參加全國雞新城疫抗體水平測定競賽的體會

王麗娟卜春華遼寧職業學院，遼寧鐵嶺112099

參加全國雞新城疫抗體水平測定競賽的體會

王麗娟卜春華
遼寧職業學院，遼寧鐵嶺112099

摘要自2011年開始，在江蘇舉辦了3年全國雞新城疫抗體水平測定競賽項目，遼寧職業學院共參加2年該比賽項目，取得了優異的成績。筆者作為該項目的指導教師，現將參賽的具體體會總結如下，供參賽選手參考與借鑒。

關鍵詞雞新城疫；抗體水平；測定；競賽

王麗娟，女，1967年生，副教授。

1　賽前熟悉考場，做好準備工作

賽前一定認真熟悉考場，對自己比賽所處的環境條件，如承辦院校所提供比賽的器材、放置位置、甚至廁所的方位等，都要心中有數，把一個陌生的新環境定位在自己過去熟悉的訓練環境里，讓自己心情輕松地去迎接比賽。技能操作考試的時間比較長，體能消耗相當大，考前應休息好，保證考試時精力旺盛、體力充沛。這樣才能保證選手在比賽中按時完成考試項目，正常發揮水平，取得好的成績。

2　檢查考場器材，制定操作方案

進入考場后，首先應對儀器、材料進行檢查，若有問題應及時與監考老師反映。然后根據現場提供的試驗材料，確定操作方案。

3　選擇試驗器材，擺放整齊合理

比賽開始，兩個人應分工協作、密切配合，熟練迅速、有條不紊地將選擇的器材和物品在操作臺上擺放整齊。擺放的原則是橫豎成排，方便操作，先用放在前排，后用放在后排，低的在前排，高的在后排，污染區與清潔區分開，擺放過程中一定注意無菌操作。注意各個材料之間留有距離，方便取送。

4　儀器使用規范，正確熟練

4.1托盤天平的使用

天平使用前，先檢查游碼是否移在標尺左端的零刻度處，然后把小燒杯置于托盤中心位置，才開始調節平衡螺母，使天平平衡。若將左右平衡螺母移至盡頭，天平仍不能平衡，應查找原因，絕不能用移動游碼來達到平衡。天平使用完畢，將兩托盤放在一邊支架上，放上保護膠墊，不得讓其自由擺動，使其處于休止狀態。

4.2微量移液器的使用

首先檢查移液器量程范圍，確認所要求的移液量在量程范圍內。轉動移液器頂部的操作按鈕至所選定移液量，保證移液量調整到位，絕對不能超出移液器標定的容量范圍，旋動調節鍵時，一定逐檔加或減，動作要輕、慢，不能出太大聲音。在裝配吸頭時，要將移液器垂直插入吸頭，左右稍微轉動上緊即可，切勿用移液器上下反復撞擊吸頭來上緊。吸液時應垂直握住移液器，先預潤濕吸頭，并排空然后進行正式移液；用大拇指將按鈕壓至第一停點位置，并將吸頭嘴垂直浸入液面下3 mm左右深度并慢慢松開按鈕，待管嘴吸入溶液后，把管嘴撤出液面并斜貼在試劑瓶壁上淌走多余的液體。放液時將移液器傾斜一定角度，輕輕壓下操作按鈕至第一停點位置，打出大部分液體，稍微停頓1 s，待剩余液體聚集后，繼續將操作按鈕向下壓至第二停點，將剩余的液體全部排出。松開按鈕使之返回按鈕的起點位置。棄去管嘴，將移液器調至最大量程后放回移液器支架。

4.3普通離心機的使用

接通電源，先檢查離心機內有無異物、運轉是否正常等。先將盛有血液和水的兩個離心管及套管置于天平上配平后，再對稱放入離心機中，注意離心管中的液體不要裝得太滿。離心機運轉時，必須有1名選手看管，若出現雜音或離心機震動等異常，要立即停止使用，進行檢查。使用完畢，各項數據歸零，及時拔下電源插頭，整理好電線。

4.4微量振動器的使用

先檢查振幅調節旋鈕是否調至最低，再接通電源，打開電源開關，順時針方向緩慢旋轉振幅調節旋鈕檢查其工作狀況。工作正常后逆時針方向將振幅調至最低，關閉電源開關。振蕩時，先將微量反應板置于振蕩器中央，按上述方法旋轉振幅調節旋鈕至適宜的振幅，振蕩所需時間后，將振幅調節旋鈕調至最低，取下振蕩物，關閉電源開關。不用時及時拔下電源插頭，電線整理好，整齊放在機器后面。

5　采血方法規范、熟練，采血量適宜

采血者一定做到一針見血而不淤血，采血過程中兩位參賽者的默契配合很重要。助手將雞側臥保定，并便于采血者操作；采血者展開采血側翅膀，一只手固定采血部位，另一只手拿酒精棉球消毒采血部位后，用已吸入3.8%的枸櫞酸鈉的注射器向翅靜脈叢刺入（此處比較容易采血成功且不容易淤血），吸取血液（血∶抗凝劑=4∶1）。采血完畢后，采血者一只手用干酒精棉球按壓采血部位止血，另一只手立即將抗凝劑和血液輕輕上下顛倒搖勻，防止血液凝固。采血的量要根據檢疫血清的數量而定。過多不宜洗滌，過少配制紅細胞的量不夠，影響試驗順利進行。采血完畢，注意手的消毒和場地整潔。

6　1%紅細胞懸液的配制

采血完畢，混勻后的血液需要取下針頭（禽用采血器則需要把前端旋下），再把抗凝血沿著傾斜的離心管管壁緩慢注入到事先已放好生理鹽水的離心管中，以防紅細胞溶血。然后扭緊瓶蓋，輕晃離心管，使血液與生理鹽水充分混勻，配平后離心。離心完畢，用移液器以畫圈的方式吸取白細胞和血小板層，再吸取剩余的液體。以此方式洗滌，一般3次即可洗凈。最后一次離心完畢，按照檢測所需1%紅細胞懸液的量，用移液器垂直從離心管的底部吸取壓積紅細胞放入到事先已加好生理鹽水的50 mL燒杯中，再反復吸取生理鹽水將吸嘴里的紅細胞沖洗下來，保證配制紅細胞濃度的準確性。

7　4IU病毒的配制

4IU病毒的配制應根據所檢測血清的份數計算出生理鹽水和抗原的用量，先用2～10mL移液器吸取生理鹽水放入50 mL小燒杯里，然后用5～50μL移液器吸取充分混勻的抗原。注意要反復用生理鹽水將移液器吸嘴里的抗原洗下來，才能保證配制濃度的準確性。

8　血凝試驗與血凝抑制試驗

加樣時，應該將所加液體在V型板的底部，避免加到孔壁的上部，切勿濺出。倍比稀釋抗原或血清時，應使用第一檔混勻，全部排空后再重新吸取液體放到下一孔。注意每孔混勻的次數要一致，避免產生氣泡而影響結果的準確性。補加生理鹽水或加4 IU病毒液和紅細胞懸液時，應由后往前懸滴加入，避免移液器吸頭與孔內的液體接觸，造成各孔間液體相互污染，導致試驗結果出現誤差。每滴加一種材料要及時更換吸頭。注意抗原懸液、血清一定要充分混勻后加樣，4 IU病毒和紅細胞懸液要邊搖勻邊加入，這樣才能保證每孔所加的樣品量和濃度一致。振蕩時，振幅不能過大，時間不能過長，以免把紅細胞膜振破，造成溶血。感作時間和結果判定要嚴格按照國標規定的要求，在生理鹽水對照孔紅細胞呈明顯鈕扣狀沉淀到孔底時判定結果，并且陽性對照和陰性對照成立。判定過早，血凝價容易判高，血凝抑制價容易判低；判定過晚，紅細胞會從病毒表面脫落而造成錯判。

9　填寫檢測結果報告，整理實驗臺

填寫檢測報告，要求選手及時記錄試驗結果，書寫規范，字體美觀。結束時整理實驗臺，物品擺放整齊有序，把要清洗消毒的物品放到指定位置，脫下工作服疊好，洗手消毒后方可離開。

收稿日期：2015- 04- 28