燈盞花半枝蓮韓信草中野黃芩苷含量比較

潘偉東，杜義龍，王肖，潘海峰

(承德醫學院河北省中藥研究與開發重點實驗室，承德 067000)

燈盞花半枝蓮韓信草中野黃芩苷含量比較

潘偉東，杜義龍，王肖，潘海峰

(承德醫學院河北省中藥研究與開發重點實驗室，承德 067000)

目的 采用高效液相色譜法測定燈盞花、半枝蓮、韓信草3種藥材中野黃芩苷的含量并進行比較。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫30 ℃，流動相為0.1%磷酸水-甲醇(65：35)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長335 nm，進樣量10 μL。結果 燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷含量的線性范圍為0.017 5～0.28 mg·mL-1(r=0.999 7，n=5)，平均加樣回收率(n=6)分別為100.25%(RSD=2.49%)、99.25%(RSD=2.65%)、100.64%(RSD=3.23%)。燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量范圍分別為0.20%～5.26%，0.37%～1.59%，0.01%～0.41%。結論 燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量存在差異，野黃芩苷的總體含量燈盞花中最高，半枝蓮次之，韓信草中最低。

燈盞花；半枝蓮；韓信草；野黃芩苷；色譜法，高效液相

燈盞花為菊科植物短葶飛蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]的干燥全草，主要分布于云南、湖南、廣西、貴州、四川及西藏等地，其中云南產燈盞花占全國總產量的95%[1]。燈盞花素(breviscapine)為燈盞花中提取分離得到的黃酮類有效成分，其主成分為燈盞花乙素(野黃芩苷 scutellarin)，另外含有少量的燈盞花甲素[2]。2010年版《中華人民共和國藥典》規定，燈盞花素制劑中含野黃芩苷含量不得低于90.0%(供口服用)或98.0%(供注射用)[3]。燈盞花素具有擴張腦血管、降低腦血管阻力、增加腦血流量、改善微循環以及抗血小板聚集等作用，臨床主要用于治療缺血性心腦血管疾病[4-5]。目前市售的燈盞花素制劑分為口服和靜脈滴注兩類，如燈盞花素片、燈盞花素滴丸、燈盞花素顆粒、燈盞花素注射液等[6]。隨著燈盞花素制劑廣泛應用于臨床，燈盞花素的需求量日漸增加。作為燈盞花素制備的原藥材，燈盞花的需求量也日漸增加。目前燈盞花藥材年采集量約為1×106kg，由于過度采集，燈盞花野生資源以及栽培藥材均有供不應求之勢，而且價格昂貴。因此，尋找燈盞花的藥源成為現在急需解決的一個問題。相關文獻報道，半枝蓮(ScutellariabarbataD.Don.)、韓信草(ScutellariaindicaLinn.)中也含有野黃芩苷，筆者從化學的角度探討能否用半枝蓮或韓信草作為制備燈盞花素的原料。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200 Series高效液相色譜儀(G1322A 在線脫氣機、G1311A 四元泵、G1316A 柱溫箱、G1315D二極管陣列檢測器、G1329A自動進樣器)；Agilent Chemstation色譜工作站(美國安捷倫公司)；HC-2062高速離心機(科大創新股份有限公司)；KQ-700型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；AG-245型十萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2 試藥 野黃芩苷(批號：PCS0329)購于北京中科儀友化工技術研究院，含量98%。甲醇、乙腈為色譜純(Fisher Scientific，USA)，四氫呋喃為色譜純(Mreda Technology Inc，USA)；水為娃哈哈純凈水(河北省高碑店市經濟開發區)；其他試劑為分析純。燈盞花、半枝蓮、韓信草由承德民族師范學院董建新教授分別鑒定為菊科植物短葶飛蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]、唇形科植物半枝蓮(ScutellariabarbataD.Don)、唇形科植物韓信草(ScutellariaindicaLinn.)的干燥全草。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：0.1%磷酸水-甲醇(65：35)；檢測波長：335 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。對照品及樣品色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品2.8 mg至10 mL量瓶，加甲醇溶解并定容，制成0.28 mg·mL-1對照品溶液，作為對照品儲備液。

2.3 供試品溶液的制備 ①稱取燈盞花粉末(過60目篩)約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲(700 W，40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定質量，用50%乙醇補足質量，搖勻，提取液于12 000 r·min-1(r=5 cm)下離心10 min，內徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得(D14、D16中野黃芩苷含量超限，分別稀釋后進樣)。②精密稱取半枝蓮粉末(過60目篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲(700 W，40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定質量，用50%乙醇補足質量，搖勻，提取液于12 000 r·min-1下離心10 min，內徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得(B10、B13中野黃芩苷含量超限，分別稀釋后進樣)。③精密稱取韓信草粉末(過60目篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，超聲(700 W，40 kHz)處理30 min，提取液回收溶劑至干，用50%乙醇溶解并轉移至10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻，溶液于12 000 r·min-1離心10 min，內徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 線性關系考察 以對照品儲備液為1號溶液，采用倍比稀釋法將對照品儲備液制成系列濃度溶液，得2～5號對照品溶液，野黃芩苷的濃度分別為0.14，0.07，0.035，0.0175 mg·mL-1。在“2.1”項色譜條件下，分別取上述系列對照品溶液各10 μL進樣，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標，對照品濃度(C)為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為A=32 603C+62.138(r=0.999 7)，線性范圍為0.017 5～0.28 mg·mL-1。

2.5 精密度實驗 精密吸取3號對照品溶液10 μL，按“2.1”項下色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積，峰面積的RSD(n=6)值為0.09%(<3%)，表明方法精密度良好。

2.6 重復性實驗 取同一批燈盞花粉末(D10)6份，每份約0.25 g，精密稱定，按“2.3”項下方法平行制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣10 μL，平行測定，記錄峰面積，峰面積RSD(n=6)值為2.1%。同法，得到半枝蓮(B01)、韓信草(S02)的RSD值分別為1.3%，2.2%，均<3%，表明重復方法性良好。

2.7 穩定性實驗 取同一燈盞花(D10)供試品溶液，分別在制備后0，4，8，12，16，24 h，按“2.1”項下色譜條件進樣10 μL，記錄峰面積，峰面積RSD(n=6)1.3%。同法，得到半枝蓮(B01)、韓信草(S02)的RSD值分別為1.8%，1.5%，均<3%，表明方法穩定性良好。

2.8 加樣回收率實驗 稱取已知野黃芩苷含量的燈盞花粉末(D10)6份，每份約0.125 g，精密稱定，加入野黃芩苷對照品適量，按“2.3”項下條件制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣10 μL，進行分析測定，計算回收率。同法，測定半枝蓮(B01，取約0.25 g)、韓信草(S02，取約0.25 g)的加樣回收率，結果見表1。

2.9 樣品含量測定 取燈盞花、韓信草、半枝蓮樣品，按“2.3”項方法分別制備供試品溶液各3份，按“2.1”項下色譜條件進樣10 μL，進行分析測定，通過回歸方程分別計算燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量，結果見表2。

3 討論

3.1 色譜條件的優化 野黃芩苷在280和335 nm波長處有最大吸收，本研究采用2010年版《中華人民共和國藥典》的335 nm為檢測波長。另外，對甲醇-水、乙腈-水、水-甲醇-四氫呋喃、不同濃度的甲酸-甲醇、乙酸-甲醇、磷酸-甲醇系統，以及Agilent不同系列色譜柱進行篩選，結果使用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.1%磷酸溶液-甲醇(65：35)為流動相時3種藥材的野黃芩苷色譜峰峰形良好、分離度高，符合定量要求。

3.2 提取方法的考察 本研究分別采用甲醇、50%乙醇[7]、三氯甲烷作為提取溶劑，同時對索氏提取、回流提取、超聲提取等方法進行了優化，并對提取次數、提取時間分別進行單因素考察，結果以50%乙醇為提取溶劑，超聲提取30 min，提取1次時，野黃芩苷基本提取完全。

3.3 燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量比較與分析 由表2可得到，燈盞花中野黃芩苷的含量范圍為0.20%～5.26%，半枝蓮中野黃芩苷含量為0.37%～1.59%，韓信草中野黃芩苷的含量為0.01%～0.41%，總體上看燈盞花中野黃芩苷含量最高，半枝蓮次之，韓信草最低；燈盞花同種藥材中野黃芩苷含量差異較大，如燈盞花D16中野黃芩苷含量最高，達5.26%，與D11的0.20%相差25倍，半枝蓮、韓信草也存在同樣問題，這可能與各藥材的生長環境、采集時間、加工過程等不同有關。

3.4 燈盞花素的市場分析與展望 燈盞花素是從燈盞花提取制備而得，主要成分為野黃芩苷，2010年版《中華人民共和國藥典》規定含量不得低于90%，臨床上主要用于心腦血管疾病的治療。本研究通過對3種藥材野黃芩苷含量的比較，結果顯示半枝蓮與燈盞花中的野黃芩苷含量基本相當，且野生資源豐富，在我國各省均有分布，蘊藏量每年為450萬～500萬千克[8]，價格低廉。根據以上分析，認為利用半枝蓮替代燈盞花制備燈盞花素具有很大的可能性，有待進一步研究。

[1] 彭成.中華道地藥材[M].北京：中國中醫藥出版社，2011：985.

[2] 楊麗梅，顧軍，林明建，等.燈盞花素的研究進展[J].天津藥學，2010，22(1)：56-60.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：109-110，379.

[4] WANG Z Y，CHEN D C，HE Y，et al.Differential effects of new breviscapine on arachidonic acid metabolisms in blood cells and endothelial cells [J].Acta Pharmacologica Sinica，1993，14(2)：148-151.

[5] 劉華，廖維靖，魏黎，等.燈盞細辛對腦缺血-再灌注后血腦屏障通透性及腦代謝物的影響[J].中國中藥雜志，2009，34(2)：208-211.

[6] 來國防，程賓，王易芬，等.燈盞花的研究進展[J].商丘師范學院學報，2010，26(6)：82-87.

[7] 林燕芝，陳曉輝，唐星，等.RP-HPLC測定燈盞細辛中野黃芩苷的含量[J].藥物分析雜志，2005，25(5)：594-596.

[8] 蔡少青，王璇.常用中藥材品種整理和質量研究[M].北京：北京醫科大學出版社，2003：673-765.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.032

2014-02-24

2014-05-16

潘偉東(1989-)，男，河北滄州人，碩士，從事中藥分析工作。電話：0314-2291186，E-mail：panweidong1223@163.com。

潘海峰(1967-)，女，河北承德人，教授，碩士，從事中藥分析研究。電話：0314-2291186，E-mail：phf2301@163.com。

R284；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0816-04