加權評分正交實驗優選益胃即型凝膠提取工藝

徐宏峰，楊全偉，劉新國，余南才，張耕

(武漢市第一醫院藥學部，武漢 430022)

加權評分正交實驗優選益胃即型凝膠提取工藝

徐宏峰，楊全偉，劉新國，余南才，張耕

(武漢市第一醫院藥學部，武漢 430022)

目的 優選益胃即型凝膠中丹酚酸B的水回流提取工藝條件。方法 在單因素考察基礎上，以君藥丹參中水溶性成分丹酚酸B提取量和干膏得率進行加權評分，作為綜合考察指標，采用高效液相色譜法測定丹酚酸B的含量，優選其正交實驗提取條件。結果 優選工藝為加10倍水浸泡1 h，回流提取2次，每次1 h。結論 優選工藝所得丹酚酸B含量和干膏得率較高，工藝穩定可行。

益胃即型凝膠；丹酚酸B；正交實驗；提取工藝；色譜法，高效液相

益胃即型凝膠為武漢市第一醫院國家級重點專科脾胃病科的臨床處方，是在四君子湯合左金丸基礎上化裁而來，主要用于益氣和胃，活血止痛，治療脾胃虛弱、血瘀胃痛、體倦神疲、噯腐吞酸、纏綿反復。可提高潰瘍愈合質量，與三聯療法合用，提高幽門螺桿菌根除率。該方主要由丹參、太子參、姜黃連、大黃等中藥組成，具有益氣和胃之功，結合胃中的內環境呈酸性，故制備成pH敏感型凝膠，藥物直達病灶，能更好發揮其治療作用。為了優選其最佳提取工藝條件，以方中君藥丹參中水溶性成分丹酚酸B的提取量和干膏提取率進行加權評分，作為綜合考察指標，采用高效液相色譜法測定其含量，結合提取的干膏得率，以加水量、提取時間、浸泡時間、提取次數分別進行單因素考察，確定其提取因素水平，以L9(34)進行正交實驗，實驗方法與結果報道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695系列高效液相色譜儀(美國)；電子天平：Sartorius ME215S(Max210 g，感量：0.01mg)；丹酚酸B對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201016)；丹參、太子參、白術、茯苓、姜黃連、大黃、仙鶴草、炙甘草、制吳茱萸(湖北天濟醫藥有限公司提供)；甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：HYPERSIL-C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-甲醇-水-甲酸(7：25：67：1)，流速1.0 mL·min-1，波長286 nm，柱溫30 ℃

2.2 溶液的制備

2.2.1 丹酚酸B對照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對照品13.94 mg，置50 mL量瓶中，加75%甲醇溶解并定容，制成每毫升含丹酚酸B 0.278 8 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 按處方比例稱取藥材121.5 g，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，水回流提取，收集所得藥液，濃縮至一定程度，加苯甲酸鈉0.6 g，調整全量至200 mL，搖勻，即得樣品。精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得供試品溶液。

2.2.3 丹參藥材溶液的制備 精密稱取丹參粉末(過三號篩)0.247 3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用75%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得[1]。

2.2.4 丹參陰性對照溶液的制備 按處方量稱取不含丹參的其余藥材，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，收集所得藥液，濃縮至一定程度，加苯甲酸鈉0.6 g，調整全量至200 mL，搖勻，按丹參藥材溶液制法即得。

2.3 方法專屬性 吸取對照品溶液、丹參藥材溶液、供試品溶液、丹參陰性對照溶液各10 μL，進樣，檢測，丹酚酸B對照品、丹參藥材溶液、供試品在約18 min出現丹酚酸B色譜峰，丹參陰性對照無干擾，見圖1。

A.丹參陰性對照溶液；B.丹酚酸B對照品溶液；C.丹參藥材溶液；D.供試品溶液；1.丹酚酸B

圖1 4種溶液的HPLC圖

2.4 線性關系考察 取上述對照品溶液，精密量取2，3，4，5，10，20 mL，分別至20 mL量瓶中，加75%甲醇定容，搖勻，即得。分別在上述色譜條件下進樣10 μL，測定峰面積，以峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標線性回歸，得回歸方程：Y=11 143X-23 229，r=0.999 9；表明丹酚酸B在27.88～278.80 μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5 精密度實驗 精密量取對照品溶液10 mL至20 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。進樣10 μL，連續進樣6次，記錄丹酚酸B峰面積，峰面積RSD=1.02%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩定性實驗 取“2.2.2”項供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12 h進樣10 μL，測定峰面積，計算丹酚酸B峰面積RSD=0.49%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.7 重復性實驗 取本品，按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，測定丹酚酸B的含量，結果平均含量為1.966 4 mg·mL-1，RSD為0.83%，表明本法重復性良好。

2.8 加樣回收率實驗 取已知含量的供試品溶液6份，搖勻，精密量取1 mL，分別置50 mL量瓶中，各精密加入適量的丹酚酸B對照品，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得，分別進樣10 μL，測定并計算回收率，結果平均回收率為97.74%(RSD=1.38%)，結果見表1。

2.9 正交實驗 在查閱文獻和單因素考察基礎上，針對加水量，提取時間，浸泡時間，提取次數4個影響因素，以丹酚酸B含量和干膏得率進行加權評分，權重系數按丹酚酸B、出膏率所占比例75：25來確定(綜合評分=丹酚酸B總量/最大丹酚酸B提取總量×75% +出膏得率/最大出膏得率×25%)，以L9(34)表進行正交實驗，結果見表2～4。

正交實驗結果表明：通過直觀分析，4個因素對丹酚酸B提取量、干膏得率，綜合評分的影響次序不同，丹酚酸B提取量為D>A>C>B，最佳工藝為A3B3C2D2；干膏得率為D>A>B>C，最佳工藝為A3B3C1D3；綜合評分為D>A>C>B，最佳工藝為A3B3C2D2。以綜合評分為指標所考察的4個因素中，加水量和提取次數對提取工藝的影響差異有統計學意義。

綜合考慮，最終確定最佳工藝為A3B1C2D2，即浸泡1 h，加10倍量水，提取2次，每次1 h。

根據確定的工藝條件，進行3批小試、中試驗證實驗，結果見表5，6。按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅨH項水分測定法第一法(烘干法)測定，測得丹參藥材含水量12.69%，丹參藥材中含丹酚酸B平均量為42.742 9 mg·g-1。

A.加水量；B.提取時間；C.浸泡時間；D.提取次數；丹酚酸B含量為丹參22.5 g提取量

3 討論

2010年版《中華人民共和國藥典》收載丹參含量測定成分指標為脂溶性成分丹參酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B，本實驗為水回流提取，故選擇丹酚酸B含量作為考察指標[2]，也有選擇對丹參中水溶性成分丹參素鈉和原兒茶醛進行測定[3]。本實驗采用高效液相色譜法測定丹酚酸B含量，分離效果好，操作簡便，穩定性好。

通過正交實驗優選提取條件，通過對3批小試及3批中試生產樣品中丹酚酸B進行含量測定，丹酚酸B提取率較高，含量穩定，可以為益胃即型凝膠進行工業化大生產提供參考依據。

A.加水量；B.提取時間；C.浸泡時間；D.提取次數；F0.05(2，2)=19.00

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：70-71.

[2] 張昀，劉路，李欽.丹參中丹酚酸B的提取工藝研究[J].中草藥，2007，38(8)：1193-1194.

[3] 薛繼雄，周暉，劉萌.高效液相色譜法測定消炎灌腸液中丹參水溶性成分的含量[J].醫藥導報，2005，24(1)：66-67.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.029

2014-05-20

2014-08-29

徐宏峰(1979-)，男，湖北黃陂人，主管中藥師，碩士，主要從事中藥新制劑新劑型研究。電話：(0)15327269593，E-mail：282215830@qq.com。

張耕(1965-)，男，湖北仙桃人，主任藥師，主要從事藥物制劑工作。電話：(0)13607167162，E-mail：zhanggeng888@126.com。

R286；TQ460.6

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1004-0781(2015)06-0808-03