加權(quán)評分正交實驗優(yōu)選益胃即型凝膠提取工藝

徐宏峰，楊全偉，劉新國，余南才，張耕

(武漢市第一醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

加權(quán)評分正交實驗優(yōu)選益胃即型凝膠提取工藝

徐宏峰，楊全偉，劉新國，余南才，張耕

(武漢市第一醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

目的 優(yōu)選益胃即型凝膠中丹酚酸B的水回流提取工藝條件。方法 在單因素考察基礎(chǔ)上，以君藥丹參中水溶性成分丹酚酸B提取量和干膏得率進行加權(quán)評分，作為綜合考察指標，采用高效液相色譜法測定丹酚酸B的含量，優(yōu)選其正交實驗提取條件。結(jié)果 優(yōu)選工藝為加10倍水浸泡1 h，回流提取2次，每次1 h。結(jié)論 優(yōu)選工藝所得丹酚酸B含量和干膏得率較高，工藝穩(wěn)定可行。

益胃即型凝膠；丹酚酸B；正交實驗；提取工藝；色譜法，高效液相

益胃即型凝膠為武漢市第一醫(yī)院國家級重點?？破⑽覆】频呐R床處方，是在四君子湯合左金丸基礎(chǔ)上化裁而來，主要用于益氣和胃，活血止痛，治療脾胃虛弱、血瘀胃痛、體倦神疲、噯腐吞酸、纏綿反復(fù)?？商岣邼冇腺|(zhì)量，與三聯(lián)療法合用，提高幽門螺桿菌根除率。該方主要由丹參、太子參、姜黃連、大黃等中藥組成，具有益氣和胃之功，結(jié)合胃中的內(nèi)環(huán)境呈酸性，故制備成pH敏感型凝膠，藥物直達病灶，能更好發(fā)揮其治療作用。為了優(yōu)選其最佳提取工藝條件，以方中君藥丹參中水溶性成分丹酚酸B的提取量和干膏提取率進行加權(quán)評分，作為綜合考察指標，采用高效液相色譜法測定其含量，結(jié)合提取的干膏得率，以加水量、提取時間、浸泡時間、提取次數(shù)分別進行單因素考察，確定其提取因素水平，以L9(34)進行正交實驗，實驗方法與結(jié)果報道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695系列高效液相色譜儀(美國)；電子天平：Sartorius ME215S(Max210 g，感量：0.01mg)；丹酚酸B對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201016)；丹參、太子參、白術(shù)、茯苓、姜黃連、大黃、仙鶴草、炙甘草、制吳茱萸(湖北天濟醫(yī)藥有限公司提供)；甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：HYPERSIL-C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-甲醇-水-甲酸(7：25：67：1)，流速1.0 mL·min-1，波長286 nm，柱溫30 ℃

2.2 溶液的制備

2.2.1 丹酚酸B對照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對照品13.94 mg，置50 mL量瓶中，加75%甲醇溶解并定容，制成每毫升含丹酚酸B 0.278 8 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 按處方比例稱取藥材121.5 g，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，水回流提取，收集所得藥液，濃縮至一定程度，加苯甲酸鈉0.6 g，調(diào)整全量至200 mL，搖勻，即得樣品。精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 丹參藥材溶液的制備 精密稱取丹參粉末(過三號篩)0.247 3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用75%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[1]。

2.2.4 丹參陰性對照溶液的制備 按處方量稱取不含丹參的其余藥材，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，收集所得藥液，濃縮至一定程度，加苯甲酸鈉0.6 g，調(diào)整全量至200 mL，搖勻，按丹參藥材溶液制法即得。

2.3 方法專屬性 吸取對照品溶液、丹參藥材溶液、供試品溶液、丹參陰性對照溶液各10 μL，進樣，檢測，丹酚酸B對照品、丹參藥材溶液、供試品在約18 min出現(xiàn)丹酚酸B色譜峰，丹參陰性對照無干擾，見圖1。

A.丹參陰性對照溶液；B.丹酚酸B對照品溶液；C.丹參藥材溶液；D.供試品溶液；1.丹酚酸B

圖1 4種溶液的HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察 取上述對照品溶液，精密量取2，3，4，5，10，20 mL，分別至20 mL量瓶中，加75%甲醇定容，搖勻，即得。分別在上述色譜條件下進樣10 μL，測定峰面積，以峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標線性回歸，得回歸方程：Y=11 143X-23 229，r=0.999 9；表明丹酚酸B在27.88～278.80 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實驗 精密量取對照品溶液10 mL至20 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。進樣10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄丹酚酸B峰面積，峰面積RSD=1.02%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗 取“2.2.2”項供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12 h進樣10 μL，測定峰面積，計算丹酚酸B峰面積RSD=0.49%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實驗 取本品，按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，測定丹酚酸B的含量，結(jié)果平均含量為1.966 4 mg·mL-1，RSD為0.83%，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實驗 取已知含量的供試品溶液6份，搖勻，精密量取1 mL，分別置50 mL量瓶中，各精密加入適量的丹酚酸B對照品，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得，分別進樣10 μL，測定并計算回收率，結(jié)果平均回收率為97.74%(RSD=1.38%)，結(jié)果見表1。

2.9 正交實驗 在查閱文獻和單因素考察基礎(chǔ)上，針對加水量，提取時間，浸泡時間，提取次數(shù)4個影響因素，以丹酚酸B含量和干膏得率進行加權(quán)評分，權(quán)重系數(shù)按丹酚酸B、出膏率所占比例75：25來確定(綜合評分=丹酚酸B總量/最大丹酚酸B提取總量×75% +出膏得率/最大出膏得率×25%)，以L9(34)表進行正交實驗，結(jié)果見表2～4。

正交實驗結(jié)果表明：通過直觀分析，4個因素對丹酚酸B提取量、干膏得率，綜合評分的影響次序不同，丹酚酸B提取量為D>A>C>B，最佳工藝為A3B3C2D2；干膏得率為D>A>B>C，最佳工藝為A3B3C1D3；綜合評分為D>A>C>B，最佳工藝為A3B3C2D2。以綜合評分為指標所考察的4個因素中，加水量和提取次數(shù)對提取工藝的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

綜合考慮，最終確定最佳工藝為A3B1C2D2，即浸泡1 h，加10倍量水，提取2次，每次1 h。

根據(jù)確定的工藝條件，進行3批小試、中試驗證實驗，結(jié)果見表5，6。按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅨH項水分測定法第一法(烘干法)測定，測得丹參藥材含水量12.69%，丹參藥材中含丹酚酸B平均量為42.742 9 mg·g-1。

A.加水量；B.提取時間；C.浸泡時間；D.提取次數(shù)；丹酚酸B含量為丹參22.5 g提取量

3 討論

2010年版《中華人民共和國藥典》收載丹參含量測定成分指標為脂溶性成分丹參酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B，本實驗為水回流提取，故選擇丹酚酸B含量作為考察指標[2]，也有選擇對丹參中水溶性成分丹參素鈉和原兒茶醛進行測定[3]。本實驗采用高效液相色譜法測定丹酚酸B含量，分離效果好，操作簡便，穩(wěn)定性好。

通過正交實驗優(yōu)選提取條件，通過對3批小試及3批中試生產(chǎn)樣品中丹酚酸B進行含量測定，丹酚酸B提取率較高，含量穩(wěn)定，可以為益胃即型凝膠進行工業(yè)化大生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

A.加水量；B.提取時間；C.浸泡時間；D.提取次數(shù)；F0.05(2，2)=19.00

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

[2] 張昀，劉路，李欽.丹參中丹酚酸B的提取工藝研究[J].中草藥，2007，38(8)：1193-1194.

[3] 薛繼雄，周暉，劉萌.高效液相色譜法測定消炎灌腸液中丹參水溶性成分的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2005，24(1)：66-67.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.029

2014-05-20

2014-08-29

徐宏峰(1979-)，男，湖北黃陂人，主管中藥師，碩士，主要從事中藥新制劑新劑型研究。電話：(0)15327269593，E-mail：282215830@qq.com。

張耕(1965-)，男，湖北仙桃人，主任藥師，主要從事藥物制劑工作。電話：(0)13607167162，E-mail：zhanggeng888@126.com。

R286；TQ460.6

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1004-0781(2015)06-0808-03