龍血竭噴霧膜劑的質(zhì)量控制*

李宜航，宋美芳，呂亞娜，李學(xué)蘭 ，陳曦，2

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所云南分所，景洪 666100；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193)

龍血竭噴霧膜劑的質(zhì)量控制*

李宜航1，宋美芳1，呂亞娜1，李學(xué)蘭1，陳曦1，2

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所云南分所，景洪 666100；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193)

目的 研究龍血竭噴霧膜劑的質(zhì)量控制方法。方法 測(cè)定噴霧膜劑的pH和黏度，納米粒度儀聯(lián)用顯微鏡檢測(cè)龍血竭噴霧膜劑的藥物分散均勻程度和粒徑；采用超高效液相色譜法對(duì)龍血素B含量進(jìn)行測(cè)定。Waters BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；柱溫40 ℃。流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液-乙腈，流速0.8 mL·min-1。結(jié)果 龍血竭噴霧膜劑的pH和黏度穩(wěn)定；藥物分散較均勻，藥物粒徑小；龍血素B濃度在15.51～77.54 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確可控，穩(wěn)定性強(qiáng)，重復(fù)性好，可較全面控制龍血竭噴霧膜劑的質(zhì)量。

龍血竭噴霧膜劑；龍血素B；黏度；粒徑

龍血竭為百合科劍葉龍血樹[Dracaenacochinchinensis(Lour.)S.C.Chen]的樹脂，具有活血散瘀、鎮(zhèn)痛止血、斂瘡生肌的功效，在臨床應(yīng)用中，龍血竭粉末或乙醇溶液外用治療糖尿病足潰瘍、壓瘡和軟組織損傷等癥均取得理想的療效[1-4]。龍血竭經(jīng)皮給藥不但可以在病灶處產(chǎn)生較高的血藥濃度，而且避免肝臟首關(guān)效應(yīng)和胃腸道不良反應(yīng)，但是目前市場(chǎng)上未見商品化的龍血竭外用制劑。龍血竭噴霧膜劑是根據(jù)龍血竭臨床應(yīng)用開發(fā)研制的外用制劑，具有抗菌、促進(jìn)潰瘍愈合的功效。其以噴霧的形式給藥于皮膚，溶劑快速揮發(fā)后形成均一、透明的聚合物薄膜，藥物均勻分散在薄膜中，達(dá)到定量給藥和覆蓋創(chuàng)面的效果。筆者對(duì)該制劑的質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters Acquity H-Class超高效液相色譜儀(沃特世公司)；Zetasizer nano納米粒度分析儀(Malvern公司)；DM4000B萊卡顯微鏡及成像系統(tǒng)(德國(guó)Leica公司)；KQ250E超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；UPW-Ⅱ90Z超純水機(jī)(成都超純科技有限公司)；NDJ-5S數(shù)字式黏度計(jì)(上海方瑞儀器有限公司)；PHSJ-4A型pH計(jì)(上海雷磁)；ABS265-S電子天平(梅特勒托利多儀器有限公司，感量：0.001 mg)。

1.2 試藥 乙腈(色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司，批號(hào)：112189)；甲醇(色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司，批號(hào)：126863)；無水乙醇(分析純，北京化工廠，批號(hào)：20121112)；龍血素B對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111558-201006)。龍血竭噴霧膜劑樣品(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所云南分所研發(fā)中心，批號(hào)：130407，130411，130412，130718，130720)。

2 方法與結(jié)果

2.1 一般性質(zhì) 龍血竭噴霧膜劑為紅色澄清液體，分別測(cè)試5批次噴霧膜劑的pH和黏度，結(jié)果見表1。不同批次龍血竭噴霧膜劑的黏度和pH不完全相同，但RSD均<2%，可認(rèn)為該制劑此兩項(xiàng)性質(zhì)比較穩(wěn)定。

表1 5批龍血竭噴霧膜劑黏度和pH測(cè)定結(jié)果

Tab.1 Determination results of viscosity and pH values in five batches of dragon's blood spraying film

2.2 藥物分散和均勻程度檢測(cè)

2.2.1 顯微觀察 將龍血竭噴霧膜劑噴于干凈載玻片，自然干燥后，使用顯微鏡對(duì)藥物膜進(jìn)行觀察，分別設(shè)置龍血竭水溶液和龍血竭乙醇溶液作為對(duì)照。見圖1。噴霧膜劑中，藥物均勻分布，顆粒粒徑均勻而且較小，與龍血竭在乙醇中溶解狀態(tài)接近。50%乙醇過飽和的龍血竭略有沉淀，顯微鏡下可見龍血竭顆粒，藥物粒徑較大；而純水中龍血竭完全不溶，十分渾濁，顯微鏡下呈泥沙狀。

2.2.2 藥物粒徑的測(cè)定 使用納米粒度分析儀對(duì)龍血竭噴霧膜劑進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)膜劑中的藥物顆粒直徑進(jìn)行測(cè)量和定量分析。結(jié)果見表2。不同批次的噴霧膜劑中藥物平均粒徑為274.8 nm，而且RSD較小，可以認(rèn)為不同批次樣品中藥物平均粒徑一致。在光強(qiáng)分布圖中，可以看到噴霧膜劑中主要存在兩種粒徑相差較大的顆粒，分布寬度系數(shù)(PDI)<0.7，可以認(rèn)為儀器動(dòng)態(tài)光散射獲得的粒徑平均值是可信的。因此可以得出結(jié)論：噴霧膜劑中存在不同直徑的藥物顆粒，其顆粒直徑平均值為274.8 nm。見圖2。

2.3 龍血素B的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 Waters BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)，預(yù)柱為BEH-C18(2.1 mm×5 mm，1.7 μm)，柱溫40 ℃。流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，采用梯度洗脫的方式進(jìn)行色譜分離，0～10 min，25%A；～20 min，25%→40%A；～30 min，40%→45%A，流速0.8 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，檢測(cè)器為Waters 2998 PDA檢測(cè)器。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備和線性范圍的考察 精密稱定龍血素B 7.754 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，配制成77.54 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液2，4，6，8，10 μL，注入高效液相色譜儀。以龍血素B濃度(C)為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為A=2 297.57C-4 120.6(r=0.999 4)，龍血素B在15.51～77.54 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3.3 樣品溶液的制備 取龍血竭噴霧膜劑1 mL，置具塞試管中加入純水10 mL，充分振蕩混勻后過濾。濾液重復(fù)加水充分混勻后濾過，濾渣加入甲醇5 mL充分溶解，轉(zhuǎn)入25 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容，搖勻備用。

2.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，測(cè)得龍血素B峰面積的RSD為1.3%。

2.3.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批龍血竭噴霧膜劑樣品(批號(hào)：130411)6份，按“2.3.3”項(xiàng)制備供試品溶液測(cè)定龍血素B含量，結(jié)果該批次樣品中龍血素B含量平均值為42.73 μg·mL-1，RSD=1.2%，說明該方法具有較好的重復(fù)性。

Tab.2 Determination on drug particle size of different batches of spraying film

2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 同一樣品溶液，于室溫下放置0，4，8，10，12，24 h后分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果龍血素B含量的RSD=0.96%，說明樣品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定。

2.3.7 樣品的含量測(cè)定 精密量取5個(gè)批號(hào)的龍血竭噴霧膜劑，按照樣品溶液配制方法處理后，每份進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行分析；并取龍血素B對(duì)照品溶液10 μL以相同條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見圖3。通過與對(duì)照品譜圖對(duì)比，確認(rèn)5號(hào)峰為龍血素B。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，龍血素B在噴霧膜劑中平均含量為42.46 μg·mL-1，保留時(shí)間為18.6 min，不同批次樣品的龍血素B含量RSD為1.51%，表明不同批次樣品之間差異較小。見表3。

Fig.3 UPLC chromatogram of Dragon's blood spraying film

表3 不同批次噴霧膜劑中龍血素B含量

Tab.3 Loureirin B content in different batches of spraying film

3 討論

噴霧膜劑能結(jié)成膜狀覆蓋在患處，同時(shí)形成微小而致密的小孔，因而能使傷口在保持一定的透氣性的同時(shí)，又能防止細(xì)菌等進(jìn)入患處引發(fā)炎癥和二次感染[5-6]，是一種便攜、小型創(chuàng)面應(yīng)急處理藥物劑型，廣泛應(yīng)用于燒燙傷、皮膚軟組織創(chuàng)傷、凍瘡潰爛及潰瘍等疾病[7-8]。但是目前2010版《中華人民共和國(guó)藥典》中并未對(duì)噴霧膜劑的質(zhì)量控制方面做出明確的規(guī)定，因此本課題組參考《中華人民共和國(guó)藥典》中對(duì)噴霧劑和涂膜劑質(zhì)量控制的研究方法，兼顧噴霧膜劑的物理性質(zhì)，建立龍血竭噴霧膜劑質(zhì)量控制體系。

在質(zhì)量控制方面首先對(duì)噴霧膜劑的一般性質(zhì)進(jìn)行觀察，其中噴霧膜劑的黏度會(huì)直接影響噴霧狀態(tài)和創(chuàng)面附著效果、pH過高或者過低可能會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的刺激性，因此列為一般性質(zhì)中的主要考察項(xiàng)目。另外，引進(jìn)馬爾文納米粒度儀和電子顯微鏡用于對(duì)藥物的分散狀態(tài)進(jìn)行量化描述和直觀觀察。藥物分散狀態(tài)包括兩個(gè)方面，一方面是藥物分散均勻程度，一方面是藥物粒徑，分別與定量給藥和藥物吸收速度相關(guān)。在成分控制方面，對(duì)龍血素B含量進(jìn)行定量檢測(cè)。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，龍血竭噴霧膜劑的黏度和pH穩(wěn)定，藥物分布比較均勻，藥物顆粒平均直徑274.8 nm，制劑中龍血素B含量變異小。測(cè)定方法結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，證明該方法適用于龍血竭噴霧膜劑的質(zhì)量控制。

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DOI 10.3870/yydb.2015.06.028

Quality Control of Dragon's Blood Spraying Film Agent

LI Yihang1, SONG Meifang1,LYU Yana1, LI Xuelan1, CHEN Xi1，2

(1.YunnanBranchInstituteofMedicinalPlant,ChineseAcademyofMedicalSciences,Jinghong666100,China； 2.InstituteofMedicinalPlant,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100193,China)

Objective To study the quality control methods for dragon's blood spraying film agent. Methods The pH value and viscosity of dragon's blood spraying film agent were detected.Drug dispersed homogeneous degree and particle sizes were determined with Nano Particle Size Analyzer and microscope.Content of Loureirin B was measured by Ultra Performance Liquid-Chromtography (UPLC).UPLC was performed on Waters BEH C18column (2.1 mm×100 mm,1.7 μm), the wavelength was 280 nm, the column temperature was 40 ℃, and the mobile phase was 0.1% formic acid aqueous solution and acetonitrile, and the flow rate was 0.8 mL·min-1. Results The pH value and viscosity of dragon's blood spraying film agent were stable, drug dispersion was homogeneous, and particle size of the drug was tiny.The concentration of Loureirin B had a good linear relationship in the range of 15.51-77.54 μg. Conclusion This method can be accurately controlled, has good stability and repeatability, and can fully control quality of dragon's blood spraying film agent.

Dragon's blood spraying film； Loureirin B； Viscosity； Particle size

2014-02-17

2014-03-28

*中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)專項(xiàng)(YZYN-12-01)

李宜航(1984-)，男，云南景洪人，實(shí)習(xí)研究員，碩士，研究方向：中藥藥理學(xué)。電話：(0)15087657871，E-mail：yihang_313@126.com。

陳曦(1973-)，男，北京人，副研究員，博士，研究方向：藥物活性篩選、藥動(dòng)學(xué)。電話：010-57833257，E-mail：chenxi@implad.ac.cn。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0805-04