藤茶雙氫楊梅素對動脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及抗氧化作用的影響*

梁柱第，曾憲彪，韋桂寧，何飛，呂紀華，蘇華，韋寶偉

(1.廣西壯族自治區藥品不良反應監測中心，南寧 530021；2.廣西中醫藥研究院，南寧 530022)

藤茶雙氫楊梅素對動脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及抗氧化作用的影響*

梁柱第1，曾憲彪2，韋桂寧2，何飛2，呂紀華2，蘇華2，韋寶偉2

(1.廣西壯族自治區藥品不良反應監測中心，南寧 530021；2.廣西中醫藥研究院，南寧 530022)

目的 探討藤茶雙氫楊梅素對動脈粥樣硬化(AS)大鼠血脂、抗氧化作用的影響。方法 健康SPF級雄性 Wistar 大鼠60 只，隨機分正常對照組、模型對照組、陽性對照組及雙氫楊梅素小劑量組和大劑量組，每組12只。除正常對照組外，其他組大鼠飼養高脂飼料+腹腔注射維生素D3，復制動脈粥樣硬化模型。陽性對照組灌胃辛伐他汀5 mg·kg-1，雙氫楊梅素大劑量組、小劑量組分別灌胃廣西藤茶雙氫楊梅素40，10 mg·kg-1，正常對照組和模型對照組灌胃等體積純化水，每天1次，連續24 周。檢測大鼠血清血脂、抗氧化作用指標。結果 與模型對照組比較，雙氫楊梅素大劑量組、小劑量組的三酰甘油由(191.65±101.10)mg·L-1減少至(111.10±29.29)，(120.55±38.12)mg·L-1；總膽固醇由(151.64±33.62)mg·L-1減少至(148.49±30.14)，(118.90±27.38)mg·L-1；高密度脂蛋白膽固醇由(1.29±0.68)mmol·L-1提高到(2.10±0.70)，(1.62±0.61)mmol·L-1；低密度脂蛋白膽固醇由(5.01±1.33)mmol·L-1下降至(3.97±0.78)，(4.28±0.79)mmol·L-1；超氧化物歧化酶活性由(141.03±42.52)U·mL-1提高到(187.97±42.08)，(150.99±46.17)U·mL-1；丙二醛由(20.51±3.81)nmol·mL-1下降至(17.64±1.54)，(18.52±3.42)nmol·mL-1，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。結論 藤茶雙氫楊梅素可改善AS大鼠血脂水平和提高抗氧化作用，對AS具有一定的防治作用。

藤茶雙氫楊梅素；動脈粥樣硬化；血脂；抗氧化

廣西藤茶系葡萄科蛇葡萄植物顯齒蛇葡萄[Ampelopsisgrossedntata(Hand - Mazz)W.T.Wang]的莖葉，其味甘淡，具清熱利濕、平肝降壓、活血通絡之功效。主治痢疾、泄瀉、小便淋痛、高血壓、頭昏目脹、跌打損傷等癥。藤茶總黃酮及其主要成分雙氫楊梅素在心血管疾病的防治方面具有顯著的藥理活性，對氧自由基有清除作用，并能預防性對抗超氧陰離子自由基引起的氧化性損傷，具有抗氧化活性[1-3]。本課題組研究表明，廣西藤茶總黃酮可顯著改善動脈粥樣硬化大鼠血脂水平，對動脈粥樣硬化具有防治作用[4]。雙氫楊梅素是藤茶總黃酮的主要活性成分，但目前有關其抗動脈粥樣硬化的文獻報道不多。筆者在本研究中觀察藤茶雙氫楊梅素對模型大鼠血清血脂、抗氧化各指標的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性Wistar大鼠，體質量150～180 g，無特定病原體(specific pathogen free,SPF)級，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK(桂)2003-0003。動物觀察室：溫度(25±1)℃，相對濕度(60±10)%。實驗動物使用許可證號：SYXK(桂)2013-0005。

1.2 試藥 廣西藤茶雙氫楊梅素，從廣西藤茶提取分離，經高效液相色譜儀測定，純度為97.65%；辛伐他汀片(濟南利民制藥有限公司，批號：20110511)；膽固醇(上海源聚生物科技有限公司，批號：111025)；膽酸鹽(上海源聚生物科技有限公司，批號：110728)；丙硫氧嘧啶(上海源聚生物科技有限公司，批號：110810)；維生素D3注射液(上海通用藥業股份有限公司，批號：110905)；高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、三酰甘油(triglycerides，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)試劑盒，均由北京北化康泰試劑有限公司提供，批號分別為：20120105，20110801，20110830，20111103；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malonaldehyde，MDA)試劑盒，均由南京建成生物工程研究提供，批號分別為：20120211，20120207。

1.3 主要儀器 722型可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)；iMark酶標儀(Japan Bio-rad公司)；TDL-5000B型低速冷凍離心機(上海安亭科學儀器廠)；FA1004電子天平(上海精科天平儀器廠)。

1.4 動物造模與給藥方法 取Wistar大鼠60只，體質量150～180 g，適應實驗場地1周后，將大鼠隨機分為5組，每組12只，即正常對照組，模型對照組，陽性對照組，雙氫楊梅素大、小劑量組。按文獻[4]報道方法進行動脈粥樣硬化造模：腹腔注射維生素D3注射液60萬U·kg-1，同時喂高脂飼料(高脂飼料：5%膽固醇，0.5%膽酸鈉，10%豬油，5%蛋黃粉，0.2%丙硫氧嘧啶及79.3%基礎飼料配制)，正常對照組給予等體積純化水，同時喂正常飼料。陽性對照組灌胃辛伐他汀5 mg·kg-1，雙氫楊梅素大劑量組、小劑量組分別灌胃廣西藤茶雙氫楊梅素40，10 mg·kg-1，正常對照組和模型對照組灌胃等體積純化水，每天1次，連續24 周。期間，抽樣檢測大鼠肝臟及主動脈弓，以觀察動脈粥樣硬化模型是否形成。末次給藥前，禁食12 h，給藥1 h后以烏拉坦麻醉動物，腹主動脈采血，測定血脂水平和SOD、MDA水平。分離主動脈弓，蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)染色。

2 結果

2.1 AS模型的判定 造模24周后，與正常對照組比較，模型對照組大鼠體質量顯著降低；大鼠主動脈管壁呈局灶性隆起，內膜明顯增厚，斑塊內可見大量泡沫細胞及多層排列，內皮細胞缺失或不連續，中膜平滑肌增生。見圖1。

2.2 對血脂的影響 與正常對照組比較，模型對照組TG、TC、LDL-C顯著升高，HDL-C顯著降低(P<0.01)；與模型對照組比較，雙氫楊梅素大劑量組TG、LDL升高，HDL-C降低(P<0.05)。見表1。

圖1 正常對照組和模型對照組主動脈弓病理圖(HE，×200)

A.normal control group；B.model control group

Fig.1 Pathology of aortic arch in normal control group and model control group(HE，×200)

2.3 MDA、SOD水平 與正常對照組比較，模型對照組大鼠MDA水平顯著升高，SOD活性顯著降低(P<0.01或P<0.05)；與模型對照組比較，雙氫楊梅素大劑量組SOD活性顯著提高(P<0.05)。見表2。

3 討論

動脈粥樣硬化是一組動脈硬化血管病中常見的最重要的一種，是威脅人類健康的第一殺手。目前臨床上應用的抗動脈粥樣硬化藥物主要有調血脂藥、抗氧化藥、多烯脂肪酸類及保護動脈內皮藥等。但是，大多是化學合成藥品，其藥理作用單一，服用時間長，且大多存在肝腎損傷等副作用，加之部分抗動脈粥樣硬化藥物價格較高，使臨床應用受到很大限制。因此，研制高效低毒的抗動脈粥樣硬化藥物是當務之急。動脈粥樣硬化病因復雜，受多種因素的影響，發病機制涉及脂質代謝及血栓形成、氧化應激、炎癥、免疫、代謝等多領域的受體、生物大分子及關鍵酶等多個方面[6-11]。脂質代謝和動脈粥樣硬化發生發展密切相關，脂質包括TG、TC、磷脂和非酯化脂肪酸，TG高是動脈粥樣硬化的危險因素，LDL-C的含量與動脈粥樣硬化的發生呈正相關，HDL-C可促進膽固醇代謝，有抗動脈粥樣硬化作用，與動脈粥樣硬化的發生呈負相關[11]。氧化應激是動脈粥樣硬化的一個十分有害的致病因素，當氧化系統和抗氧化系統失衡，氧化程度超出氧化物的清除，將LDL-C成為氧化型LDL-C(ox-LDL-C)，刺激內皮細胞分泌多種炎性因子，誘導單核細胞粘附、遷移進入動脈內膜，轉化成巨噬細胞，加速動脈粥樣硬化的發展[12-14]。

藤茶雙氫楊梅素是廣西藤茶的主要活性成分之一，具有豐富的藥理活性。近年來，雙氫楊梅素在抗心血管病等方面表現有良好的藥理活性，但其抗動脈粥樣硬化方面的活性更加引起人們重視。通過觀察藤茶雙氫楊梅素對大鼠動脈粥樣硬化模型的影響，結果顯示，藤茶雙氫楊梅素可顯著降低動脈粥樣硬化大鼠的TG、LDL-C，提高HDL-C水平，可顯著提高SOD活性。提示，藤茶雙氫楊梅素可影響動脈粥樣硬化大鼠脂質的代謝，降低TG水平，可減少“血稠”的機會及其由此引起的血管壁上小斑塊的形成。降低LDL-C水平，可減少ox-LDL-C對血管上皮細胞、平滑肌細胞的細胞毒作用，減少內源性一氧化氮的產生。增高HDL-C水平，可對抗低密度脂蛋白氧化修飾的作用，減少脂質的攝取沉積，促使膽固醇從血管壁排出，減少斑塊破裂。增高SOD活性，可降低脂質過氧化物的含量，清除人體內過多的有害的氧自由基。諸多因素都對動脈粥樣硬化具有顯著的對抗作用，顯示出多靶點性作用。其藥理作用的分子機制及物質基礎還有待進一步研究。

表1 5組大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C的檢測值

與正常對照組比較，*1P<0.05，*2P<0.01；與模型對照組比較，*3P<0.05；

Compared with normal control group*1P<0.05，*2P<0.01；compared with model control group，*3P<0.05

表2 5組大鼠血清MDA和SOD水平的測定值

與正常對照組比較，*1P<0.05，*2P<0.01；與模型對照組比較，*3P<0.05

Compared with normal control group*1P<0.05，*2P<0.01；compared with model control group，*3P<0.05

[1] 黃秋潔，葉勇，歐賢紅，等.兩種藥用植物總黃酮體外抗氧化活性比較[J].醫藥導報，2013，32(5)：576-578.

[2] 唐瑛，羅祖友，嚴奉偉，等.藤茶總黃酮對小鼠的體內外抗氧化作用研究[J].中國醫院藥學雜志，2006，26(12)：1449-1452.

[3] 何桂霞，杜方麓，楊偉麗，等.藤茶總黃酮清除氧自由基與抗脂質過氧化作用[J].中藥材，2003，26(5)：338-340.

[4] 曾憲彪，韋桂寧，何飛，等.藤茶總黃酮對動脈粥樣硬化大鼠血脂及血液流變學的影響[J].重慶醫學，2014，43(5)：518-521.

[5] 趙娟，李相軍，孫波.維生素D3聯合高脂飼料建立大鼠動脈粥樣硬化模型[J].實用醫學雜志，2009，25(21)：3569-3571.

[6] 文可明.高三酰甘油血癥在動脈粥樣硬化發生中的作用及致冠心病的危險性[J].臨床中老年保健，2002，5(2)：155-156.

[7] 霍記平，湯強，胡本容，等.長期攝入乙醇對大鼠心血管系統與肝臟的影響[J].醫藥導報，2009，28(11)：1420-1423.

[8] YOSHIDA H.Front line of oxidized lipoproteins：role of oxi-dized lipoproteins in atherogenesis and cardiovascular disease risk[J].Rinsho Byori，2010，58(6)：622-630.

[9] MEYERS C D，KASHYAP M L.Pharmacologic elevation of high-density lipoproteins：recent insights on mechanism of action and atherosclerosis protection[J].Curr Opin Cardiol，2004，19(4)：366-373.

[10] SUPERKO H R.New aspects of risk factors for the deve-lopment of atherosclerosis，including small low-density lipoprotein，homocyst(e)ine，and lipoprotein(a)[J].Curr Opin Cardiol，1995，10(4)：347-354.

[11] DAVIDENKOVA E F，SHAFRAN M G.Atherosclerosis and the process of lipid peroxidation[J].Vestn Akad Med Nauk SSSR，1989，(3)：10-18.

[12] 徐索文，劉培慶.C-反應蛋白與動脈粥樣硬化炎癥的關系[J].中國病理生理雜志，2009，25(12)：2487-2490.

[13] MORAWIETZ H.Acromegaly and oxidative stress：impact on endothelial dysfunction and atherosclerosis[J].Horm Metab Res，2013，45(4)：255-256.

[14] INCALCATERRA E，ACCARDI G，BALISTRERI C R，et al.Pro-inflammatory genetic markers of atherosclerosis[J].Curr Atheroscler Rep，2013，15(6)：329-330.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.002

Effects of Dihydromyricetin on Blood Lipid Metabolism and Antioxidation in Atherosclerosis Rats

LIANG Zhudi1，ZENG Xianbiao2，WEI Guining2，HE Fei2，LYU Jihua2，SU Hua2，WEI Baowei2

(1.CenterforDrugAdverseReactionsMonitoringofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530021,China； 2.InstituteofTraditionalMedical&PharmaceuticalSciencesofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530022,China)

Objective To observe the effect of dihydromyricetin ofampelopsisgrossedentataon lipid metabolism and antioxidation in atherosclerosis (AS) rats. Methods Sixty Wistar rats were randomly divided into five groups (n=12 each): normal control group, model control group, positive control group, high dose dihydromyricetin group (40 mg·kg-1) and low dose dihydromyricetin group (10 mg·kg-1).Except normal control group, rats in the other groups were injected with a single dose of vitamin D3(600 000 U·kg-1) and loaded with high fat diet to establish AS model.Simvastatin (5 mg·kg-1) was intragastrically administered to positive control group.High and low dose dihydromyricetin groups

intragastric administration of 40 and 10 mg·kg-1dihydromyricetin, respectively.Equal volume of purified water was given to normal and model control group.After 24 weeks of administration, serum levels of lipids, activities of superoxide-dismutase (SOD) and malonicdialdehyde (MAD) were determined. Results As compared with model control group, triglycerides (TG) of high and low dose dihydromyricetin groups was decreased [(191.65±101.10)vs.(111.10±29.29) and (120.55±38.12) mg·L-1, respectively], total cholesterol (TC) was decreased [(151.64±33.62)vs.(148.49±30.14) and (118.90±27.38) mg·L-1], and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) was increased [(1.29±0.68)vs.(2.10±0.70) and (1.62±0.61) mmol·L-1], low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) was decreased [(5.01±1.33)vs.(3.97±0.78) and (4.28±0.79) mmol·L-1], activity of SOD was increased [(141.03±42.52)vs.(187.97±42.08) and (150.99±46.17) U·mL-1], and MDA was decreased [(20.51±3.81)vs.(17.64±1.54) and (18.52±3.42) nmol·mL-1], with significant differences (P<0.05,P<0.01). Conclusion Dihydromyricetin can reduce the level of serum lipid, improve antioxidation activity, and has therapeutic effect for atherosclerosis.

Dihydromyricetin； Atherosclerosis； Blood lipid； Antioxidation

2014-04-22

2014-06-19

*國家自然科學基金資助項目(81360653)；廣西自然科學基金資助項目(2011GXNSFA018258)；廣西中醫藥管理局中醫藥科技專項(GZKZ09-48)

梁柱第(1975-)，男，廣西桂平人，主管藥師，從事藥品不良反應監測和安全性評價研究。電話：0771-5884912，E-mail：liangzhudi@163.com。

韋桂寧(1973-)，男，廣西都安人，副主任藥師，碩士，從事中藥藥理與毒理學研究研究。電話：0771-5869102，E-mail：weiguining2004@163.com。

R285.5；R543.5

A

1004-0781(2015)06-0710-04