核酸檢測與酶聯免疫檢測血液病毒的對比分析

吳寶軍

核酸檢測與酶聯免疫檢測血液病毒的對比分析

吳寶軍

目的探究對血液病毒采用核酸檢測和酶聯免疫檢測的方法以及準確率。方法住院的18637例患者進行檢測分析， 包括HCVAb、HBsAg、HIVAb和二次酶聯免疫法的篩查， 并對陰性和陽性血樣進行核酸檢測， 觀察兩種檢測方法的檢查結果， 對比檢測的準確性。結果酶聯免疫法中103個樣本出現檢測失誤， 漏（誤）檢率為0.6%， 而核酸檢驗沒有出現漏檢或者誤檢現象， 檢測準確率差異有統計學意義（P＜0.05）。結論對住院患者采用核酸檢測的方法檢測血液病毒， 靈敏度較高， 減少并避免漏檢。

血液病毒；核酸檢測；酶聯免疫檢測

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月～2014年3月本院住院的18637例患者進行檢測分析， 其中192例血液標本有梅毒或者轉氨酶的檢測不合格。對18216份血液標本進行病毒檢測，每個標本在采血后使用5 ml和7 ml的真空抗凝管進行留樣，放置在2～8℃的冰箱中保存， 對7 ml真空抗凝管的血樣在24 h內需要分離血漿， 進行酶聯免疫法的血液篩查， 對5 ml的真空管血氧在3 h內進行血漿分離， 給予核酸檢測。

1.2 方法

1.2.1 酶聯免疫法 將18216份7 ml真空抗凝管進行室溫離心， 將血漿成功分離， 并選擇安圖e-Lisa全自動加樣儀進行自動加樣， 并采用Uranus AE的全自動酶免分析儀， 檢驗人員要仔細記錄檢測結果。

1.2.2 核酸檢測法 把5 ml的真空抗凝管的血樣進行20 min的室溫離心， 并將其放置在2～8℃的冰箱中， 當血液樣品在血常規檢查合格后， 將其放置在加樣儀樣品的條架上， 采用一級分配試劑的程序， 將100 μl的A、B洗液以及100 μl的洗脫液， 加入到B號96孔深孔板中， 把50 μl的磁珠和600 μl的結合液加入到A號96孔深孔板中。并對樣品進行裂解， 同時避免標本污染。當完成裂解后， 要采用三級核酸的提取程序，并采用核酸提取儀經過B號的96孔深孔板以及A號的96孔深孔板來提取核酸， 并配置擴增核酸的反應液。針對標本量采用四級核酸的擴增程序將提取后核酸的結合液混入到八聯管中， 并將八聯管放置在PCR儀中擴增， 并記錄結果， 對陽性匯集孔的標本挑出來， 進行相應的拆分實驗， 確定陽性標本。

1.3 統計學方法 采用SPSS14.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

對18216份血液標本進行病毒檢測， 酶聯免疫法在檢測過程中， 有103例血樣檢測為HBV DNA陽性， 出現檢測失誤，漏（誤）檢率為0.6%， 而核酸檢驗中， 沒有出現漏檢或者誤檢現象， 檢測準確率差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

有很多疾病通過血液傳播病毒， 其中丙型肝炎、艾滋病和乙型肝炎為傳播最嚴重的疾病， 會對人體產生嚴重的不良影響， 因此通過對住院患者術前的檢測率的提高， 才能排除輸血傳播的風險， 降低醫院糾紛， 目前在血液的篩查中常用的檢測方法為酶聯免疫法［3］。對住院患者術前進行檢測， 采用核酸檢測的方法， 無一例出現HIV和HCV的誤檢和漏檢，說明醫院進行規范的檢測工作， 采取核酸檢測這種方法， 可促進醫療質量的提高。排除輸血傳播途徑， HBV漏檢是因為窗口期導致， 還由于測試劑的靈敏度較低， 造成HBV的低水平復制。酶聯免疫檢測法的靈敏度低， 其主要因素為窗口期、免疫靜默的感染以及病毒變異等。核酸檢測方法其檢測的準確率高， 基本沒有漏診和誤診情況的出現。HBV感染跟季節有一定聯系， ELISA漏檢跟氣溫相關聯， 冬季的氣溫較低， 且人體HBsAg不容易表達， 活性較低， 這就需要多次檢測和大量標本進行證明， 由此說明控制HBV的漏檢以及經血途徑的傳播， 只給予HBsAg的篩查并不夠， 需高度重視。CT值和羅氏病毒的定量數值之間為正相關， 并證實了熒光定量PCR技術來檢測核酸的CT值有必要性和可靠性。NAT檢測法的靈敏度較高， 且檢測的窗口期較短， NAT已經廣泛應用于臨床。酶聯免疫法中103個樣本出現檢測食物， 漏（誤）檢率為0.6%， 而核酸檢驗法沒有出現漏檢或者誤檢現象， 檢測準確率差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述， 在住院患者篩查中采用核酸檢測的方法， 準確率高， 靈敏度較高， 能夠較好減少并避免漏檢的情況， 值得推薦。

［1］ 龔曉燕， 任芙蓉， 宋美蘭， 等.羅氏cobas MPX混樣及單人份檢測模式對獻血者NAT檢測效果的研究.中國輸血雜志，2013， 26（21）:136-137.

［2］ 歐陽玲， 黃建國， 謝秀華， 等.核酸檢測技術在深圳地區獻血者血液病毒篩查中的應用.國際檢驗醫學雜志， 2010， 31（7）: 764-765.

［3］ 曾勁峰， 葉賢林， 馬蘭， 等.血篩用酶聯免疫吸附試驗與核酸檢測互補性探討和研究.國際檢驗醫學雜志， 2008， 29（8）:683-684.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.080 HCV、HIV、HBV這些疾病主要的傳染途徑之一為輸血，對血液給予輸血相關的抗體檢驗或者抗原檢測， 能夠避免或者減少輸血過程的疾病傳播等現象。而本院住院需要手術的患者， 按照醫院規定和要求， 術前必須對患者的血樣采用酶聯免疫的測定方法， 進行血液的各項篩查， 從而排除了醫院院內輸血傳播的可能。但因為酶聯免疫法是對相應病毒進行抗體或者抗原的篩查， 但在病毒變異、窗口期、儀器的運行程序、手工操作、實際的特異性以及環境溫度等都會造成HCV、HBV、HIV等疾病的漏檢。在目前檢驗技術的不斷發展中， 病毒核酸檢測能夠明顯減短血液感染病毒的檢測窗口期， 對病毒本身進行直接檢測， 排除醫院通過輸血傳播病毒的風險， 有利于保護醫院和患者權益， 因此臨床檢驗中推薦使用核酸檢測法［2］。選取2013年2月～2014年3月本院住院的18637例患者進行檢測分析， 觀察檢測結果， 現報告如下。

2014-11-12］

741000 天水市第一人民醫院檢驗科