紫杉醇注射液含量測定方法建立

劉利檬

哈藥集團生物工程有限公司

紫杉醇注射液含量測定方法建立

劉利檬

哈藥集團生物工程有限公司

目的采用高效液相色譜法測定紫杉醇注射液含量。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Ultimate柱（250mm★4.6mm, 5um），以乙腈：水（44：56）為流動相，柱溫45℃，流速為1.0ml/min，檢測波長為230nm。結果輔料對含量測定無干擾，耐用性試驗表明色譜條件微小變化不影響含量測定，溶液溶度在0.1mg/ml～1mg/ml范圍內線性關系良好，準確度試驗的平均回收率為99.7%，RSD為1.1%，重復性及中間精密度符合規定，溶液在8小時內穩定。結論方法學試驗各項指標符合規定，可用于本品含量測定。

紫杉醇；方法學；含量測定

紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復雜的次生代謝產物,也是目前所了解的惟一一種可以促進微管聚合和穩定已聚合微管的藥物。同位素示蹤表明,紫杉醇只結合到聚合的微管上,不與未聚合的微管蛋白二聚體反應。細胞接觸紫杉醇后會在細胞內積累大量的微管，這些微管的積累干擾了細胞的各種功能,特別是使細胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細胞的正常分裂[1]。我們采用高效液相色譜法測定紫杉醇注射液含量，建立本品含量測定方法[2]。

1.儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀LC-20A（DAD檢測器），色譜柱Ultimate AQ-C18 5μm 4.6×250mm

紫杉醇對照品（含量：99.4%），紫杉醇注射液由哈藥集團生物工程公司提供，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。

2.方法與結果

色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈：水（35：65）為流動相，檢測波長為230nm。理論塔板數不低于5000。對照品重復進樣5次，RSD不得過1.5%。

測定法取本品，精密稱定，用流動相稀釋制成每1ml含0.4mg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另精密稱取紫杉醇對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

2.1 專屬性試驗

紫杉醇、空白輔料、起始物料及中間體，加流動相溶解，按照擬定方法進樣，結果紫杉醇與其它物質可有效分離，紫杉醇峰純度符合規定，輔料、中間體及起始物料不干擾含量測定。

2.2 系統適用性試驗

取紫杉醇對照品，加流動相使溶解，制成0.4mg/ml的溶液，取對照品溶液，按照擬定含量測定方法進樣，結果重復進樣的RSD為0.6%，偏差符合規定。

2.3 耐用性試驗

改變流動相比例（乙腈變化±5%）、柱溫（30℃、35℃、45℃）、色譜柱（相同品牌不同批號的3根色譜柱）及流速（0.8ml/min、1.0ml/ min、1.2ml/min），評價各項指標改變對含量測定結果的影響，同時評價各色譜條件下系統適用性，結果表明各項指標變化對含量測定結果無明顯影響，耐用性試驗符合規定。在各種色譜條件下對稱因子在0.9至1.1之間，塔板數均大于10000。在各種條件下系統適用性偏差均小于1.0%。

2.4 線性范圍試驗

精密稱取紫杉醇對照品50mg，加流動相溶解制成2mg/ml的溶液，搖勻，作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，置10ml容量瓶中，分別加流動相稀釋至刻度，搖勻。制成系列溶度溶液，分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以紫杉醇的濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程，結果紫杉醇濃度在0.1mg/ml～0.8mg/ml的濃度范圍內線性關系良好。

2.5 準確度試驗

取紫杉醇對照品，精密稱定，加流動相溶解制成1mg/ml的溶液，作為對照品儲備溶液。領取紫杉醇注射液加流動相稀釋制成0.4mg/ml的溶液，作為供試品溶液，取供試品溶液及對照品溶液按照測定法測定供試品溶液濃度。領取供試品溶液及對照品儲備溶液，制成系列濃度溶液，即供試品溶液得80%、100%、120%組。精密量取對照品溶液及各供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算紫杉醇的含量，計算加樣回收率。結果平均回收率為100.6%，RSD為1.4%，符合規定。

2.6 重復性及中間精密度試驗

取供試品溶液，制備0.4mg/ml的溶液6份，作為重復性試驗樣品溶液。按照含量測定方法進行測定，結果平均含量為99.8%，RSD為0.1%，重復性符合規定。領取取供試品溶液，變動因素為實驗者、實驗時間，考察含量測定結果變化情況，結果6次測定平均含量為99.5%，RSD為0.4%，中間精密度符合規定。

2.7 溶液穩定性試驗

精密量取供試品溶液，加流動相制成0.4mg/ml的溶液，作為供試品溶液；領取紫杉醇對照品，加流動相制成0.4mg/ml的溶液，作為對照品溶液。室溫條件下放置放置8小時，分別于0小時、1小時、2小時、4小時、6小時及8小時進樣。按照含量測定方法測定，考察各時間點主峰峰面積變化，結果8小時內供試品及對照品溶液峰面積RSD分別為0.5%及0.9%，供試品溶液及對照品溶液在8小時內穩定。

2.8 樣品含量測定

取本品，精密稱定，用流動相溶解制成0.4mg/ml的溶液，按照所確定含量測定方法測定供試品含量，結果三批含量分別為99.1%、99.5%、99.8%。

3.討論

紫杉醇注射液含量測定方法可行，操作簡便，結果準確，重現性好，專屬性強，方法準確，可用于紫杉醇注射液含量測定。

[1]駱澤宇.紫杉醇的藥理與臨床研究進展.現代中西醫結合雜志,2006，12，15（24）：3457-3458.

[2]吳健敏,張才煜,張啟明.關于HPLC法測定紫杉醇有關物質方法的探討[J].中國藥事,2009,(11):1072-1075.

劉利檬（1982-），男，黑龍江省哈爾濱市，哈藥集團生物工程有限公司，質檢員、工程師、本科。