牦牛10個STR基因座遺傳多態性研究

楊啟林，張 君，徐尚榮，彭 巍，王志強

（1.青海大學，青海西寧810016；2.青海大學畜牧獸醫科學院，青海西寧810016）

我國牦牛的數量約占世界牦牛總數的95%以上［1］，多年以來牦牛的育種工作由于各種原因開展不順利，缺乏可靠穩定的分子遺傳標記是重要的原因之一。微衛星標記（microsatellite），又稱為短串聯重復序列，是以2～6個核苷酸為基本重復單位的串聯重復序列［2－3］。微衛星作為第二代分子標記，以其較高的多態性及簡便的操作，能夠滿足一般實驗室對遺傳研究的要求，而得到較為廣泛的應用［4－5］，現已被用于種群遺傳結構分析、系統發生關系分析及保種效果檢測等方面［6－8］。目前將牦牛自身基因組微衛星標記應用于牦牛群體遺傳的報道較少［9］，研究人員只能利用普通牛的微衛星序列分析牦牛的群體遺傳結構特征和系統分類［10－13］。

本研究選用聯合國糧農組織（FAO）和國際動物遺傳學會（ISAG）聯合推薦的用于牛遺傳分析的9個Holstein奶牛微衛星基因座和自選的一個微衛星基因座對68個牦牛樣本的遺傳多樣性指征進行分析，旨在初步揭示牦牛核基因組的遺傳多樣性水平。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

抽取68 份牦牛血液樣本，用EDTA 抗凝后－20 ℃冷凍保存。

1.2 主要試劑與儀器

10×PCR buffer、dNTP、Marker、核酸染料、均購于上海生工生物工程有限公司；高速離心機購自上海HEAL FORCE 公司；PCR 儀（My－Cycle TM Thermal Cycler）購自美國BTO－RAD公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 基因組DNA 抽提 采用TIANamp Blood DNA Kit試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司），按照說明書操作進行，－20 ℃冷凍保存。

1.2.2 PCR 反應體系及反應條件 PCR 擴增反應體系：PCR 體系總體積為25μL，2×PCR Master緩沖液12.5μL，上下引物各0.6μL，DNA 模板1 μL，超純水10.5μL，采用PCR 儀進行擴增。……