海藻多糖對肝癌小鼠抗腫瘤作用的實驗研究

朱正日， 陳愛東

( 黑龍江省牡丹江醫學院紅旗醫院，牡丹江 157011 )

Zhu Zheng-ri, Chen Ai-dong

( Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College, Mndanjiang 157011 )

多糖在細胞的生長、分化、衰老和死亡的全過程中起著十分重要的作用。海藻多糖為天然的活性物質，主要是從褐藻、紅藻、藍藻、綠藻等提取而成。其是一類高分子碳水化合物，通常由不同或者相同的單糖基通過糖苷鍵相連接而形成，有重要的生物活性和藥用價值，如增加機體免疫力、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗輻射等。其發揮作用的基本機制都是通過調節機體免疫系統功能而發揮作用[1]。也有加快損傷的免疫器官修復過程，提高免疫細胞的活性，促進抗體、細胞因子的釋放等。

1 資料與方法

1.1 實驗動物及分組

昆明小鼠50只，雌雄各半，體重18~22g，由牡丹江醫學院實驗動物研究中心提供。實驗分為5組，每組10只，即空白對照組、海藻多糖高、中、低劑量組、黃芪多糖組。

1.2 試劑

海藻多糖藥品、H22肝癌細胞株由黑龍江中醫藥大學購進。IL-2、VEGF、Bcl-2測定試劑盒(哈爾濱海霞試劑有限公司)。

1.3 主要儀器

電子天平；電熱恒溫水浴鍋(華夏儀器制造廠)；微量移液器(上海易友儀器有限公司)；TD5M-WS型臺式低速離心機；全自動酶標儀-WD-2102A酶標儀。

1.4 造模及給藥方法

將H22肝癌細胞按照一定比例配比，每只小鼠0.2mL，小鼠右腋部皮下接種。接種24h后，分別腹腔注射給藥為海藻多糖高(100mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg)劑量組，陽性組給黃芪多糖100mg/kg，模型對照組給相同體積的生理鹽水，連續給藥20d，停藥次日處死。

1.5 ELISA法測血清中VEGF、IL-2含量

免疫組化法測瘤組織中Bcl-2基因表達情況、并且計算抑瘤率。抑瘤率=(對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%。

1.6 數據處理

所得數據采用SPSS18.0軟件分析，方差分析，兩均數間t檢驗，各組數據由`x±s表示，P<0.05為具有統計學意義。

2 結果

海藻多糖可以提高血清中IL-2含量，減少VEGF含量水平，同時下調Bcl-2基因表達。說明海藻多糖對H22肝癌小鼠腫瘤具有抑制效果，且以中劑量效果最佳。詳見表1，2。

表1 海藻多糖對小鼠外周血清中IL-2、VEGF及瘤組織Bcl-2基因表達的影響(`x±s)

表2 海藻多糖對H22肝癌小鼠瘤重的影響(`x±s)

3 討論

隨著人民生活水平的提高和科技的進步，人們對健康的要求也越來越高，但始終有一種難以攻克的疾病即癌癥。其中肝癌的發病率在全球仍然居高不下，我國每年被它奪走生命的人們也不計其數，而癌癥的發生發展都和免疫系統功能有關，現在治療理念基本是研發的合成西藥或者干擾素等。本研究側重于能夠提高人體免疫功能的多糖類入手，從免疫學方面深入研究，目的是能夠發現機體的免疫功能及狀態與腫瘤的發生、發展及預后密切相關性。

海藻多糖是一類多糖混合物。目前針對海藻多糖的研究主要集中在其所包含的糖單元及含量層次上。對機體免疫器官的調節作用是海藻多糖的重要功能。研究表明，海藻多糖具有抗腫瘤的作用，主要作用機理是其可以激活機體的免疫系統，從而提高機體自身的抗腫瘤能力，釋放腫瘤殺傷的生物因子，間接的起到控制腫瘤增長和轉移的效果。免疫系統中T細胞活化狀態是由IL-2維持的，其參與T細胞的活化和增值，促進NK細胞殺傷活性、活化巨噬細胞等生物學作用。VEGF具有促進血管內皮細胞增殖、分化、也能夠增加微血管通透性，同時誘導血管生成，可以被認為是促進腫瘤生長和轉移的重要因子之一[2]。Bcl-2家族是凋亡調控的重要分子，在腫瘤中Bcl-2家族成員表達異常，導致腫瘤細胞能夠逃逸凋亡，保持持續的增殖能力。抗凋亡蛋白Bcl-2的高表達增加腫瘤的轉移潛能，使轉移時間縮短及轉移的器官數增加[3]。

在本實驗中黃芪多糖早已經應用于抗腫瘤領域中，通過復制H22肝癌疾病模型，對照比較不同劑量對腫瘤動物的體內相關因子檢測來進一步判斷海藻多糖拮抗癌細胞增殖的效果，結果表明各劑量組對腫瘤都有抑制作用，以中劑量組最為明顯，海藻多糖有增加血清中IL-2的含量減少VEGF水平，降低瘤組織中抗凋亡蛋白Bcl-2的表達能力。因此，我們可以得出，該藥物對肝癌的發生發展有一定的影響，希望通過更多的實驗證實其具體機制。

[1] 劉晉, 郭長江, 劉嘉喜. 海藻多糖免疫調節作用的研究進展[J]. 中國食物與營養, 2007, 05:49-51.

[2] 王永玲, 李冬霞, 高建芝, 李紹山, 黃麗君. VEGF在肥胖患者乳腺癌組織中的表達及臨床意義[J]. 基礎醫學與臨床,2012, 05:544-547.

[3] 錢海利, 王海娟, 林晨. 抗凋亡Bc l-2家族蛋白拮抗分子在腫瘤治療中的研究進展[J]. 中國腫瘤, 2011, 02:100-102.