殼寡糖對S180肉瘤小鼠抗腫瘤作用的研究

劉晶瑩， 劉洋， 譚子強

( 牡丹江醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科，牧丹江 157011 )

殼寡糖[1](Chitosan oligosaccharide，COC)是由殼聚糖解聚生成的水溶性糖類，該物質(zhì)在殼類動物外骨骼中或者真菌細胞壁乃至于海洋的綠藻中，殼聚糖是多糖的一種，由β-1,4-糖苷鍵連接而成，殼多糖被脫乙酰化處理后加工得到。近年來，在國內(nèi)外藥物開發(fā)方面關(guān)于殼寡糖的研究廣泛開展，有資料記載其具有較好調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)和抑制腫瘤生長等功能；不但水溶性較好，而且容易被機體吸收。既能夠調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生物代謝情況，調(diào)節(jié)微生態(tài)環(huán)境，同時亦有抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，降低血壓、血脂、膽固醇、抗氧化、抗微生物等功效；有文獻報道[2]其抗腫瘤機制為直接抑制瘤細胞生長，并且能夠誘導(dǎo)細胞壞死和凋亡，減少腫瘤血管生成從而實現(xiàn)抑制瘤細胞轉(zhuǎn)移，也有可能是增強機體免疫力，間接實現(xiàn)拮抗腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。本實驗通過荷瘤小鼠模型，觀察不同藥物劑量的殼寡糖對腫瘤的生長情況影響，同時檢測相關(guān)因子，論證其抑瘤的機制，為開發(fā)新型抗癌藥物做出有效的科學(xué)論據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1 藥品和試劑

殼寡糖(沈陽藥科大學(xué)制備)，肝素鈉(洪都生物化學(xué)制藥廠)，黃芪多糖(哈爾濱海霞試劑有限公司)，IL-2定量酶聯(lián)免疫檢測試劑盒、VEGF、bFGF檢測試劑盒(黑龍江科貝試劑有限公司)。

1.2 實驗動物及瘤株

昆明種小鼠，體重20±2.0g，雄性，肉瘤S180細胞均購于牡丹江醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.3 儀器

電子天平TB102 (太盟儀器廠)，電熱恒溫水浴鍋(成都太盟儀器廠)，微量移液器(大邁儀器有限公司)，離心機(上海知信實驗儀器技術(shù)有限公司)，Olympus IX70倒置顯微鏡(O-lympus公司)，酶標(biāo)儀(濟南安暢醫(yī)療設(shè)備有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 造模過程

(1)分組及給藥：昆明小鼠隨機分為5組，每組10只，于右下腹接種S180肉瘤細胞稀釋液24h后，分別對5組小鼠進行腹腔注射給藥，每日一次。即為殼寡糖高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)劑量組，陽性組給黃芪多糖（APS）100mg/kg，模型對照組給相同體積的生理鹽水，連續(xù)給藥10d。

(2)計算抑瘤率：停藥次日處死，稱取小鼠瘤重。抑制率=(對照組平均瘤重－給藥組平均)/瘤重對照組平均瘤重×100%。

1.4.2 指標(biāo)檢測

殼寡糖對小鼠外周血血清IL-2的測定利用ELISA法；免疫組織化學(xué)法測VEGF、bFGF相對表達值，所有操作按試劑盒說明書操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

用spss18.0軟件處理，各組數(shù)據(jù)由`x±s，樣本比較采用方差比較。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

殼寡糖對S180肉瘤生長的抑制率以中劑量為佳；能夠提高S180肉瘤小鼠外周血血清中IL-2的含量，降低肉瘤組織中VEGF、bFGF表達，具體結(jié)果見表1，表2。

3 討論

白細胞介素-2是由Th細胞而產(chǎn)生，與之受體結(jié)合后使T細胞產(chǎn)生活性并且增生，同時促進B細胞分泌抗體和誘導(dǎo)LAK細胞產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。其既能夠刺激NK細胞產(chǎn)生干擾素，又能提高Th細胞的數(shù)量并增加其功能，從而達到增強機體的免疫系統(tǒng)功能等。

表1 殼寡糖對荷S180肉瘤小鼠瘤重的影響(`x±s，n=10)

表2 殼寡糖對荷S180肉瘤小鼠外周血清中IL-2含量和瘤組織中VEGF、bFGF表達影響

VEGF和bFGF這兩種細胞因子為促血管生成因子，在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中起到了十分關(guān)鍵的作用，可以促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移及增加血管的供應(yīng)，與各種類型的惡性腫瘤的發(fā)病和遷徙關(guān)系密切[3]。有文獻報道過關(guān)于腫瘤遷徙的機制，主要是由于促血管生成因子和抗血管生成因子之間的平衡失調(diào)，各種病理因素使促血管生成物質(zhì)含量增加，促進了腫瘤血管生成，從而腫瘤細胞發(fā)病和發(fā)生轉(zhuǎn)移。

本實驗中，以荷瘤小鼠模型為研究對象，通過給藥干預(yù)瘤細胞的生長和相關(guān)因子的檢測發(fā)現(xiàn)，殼寡糖對S180肉瘤的生長確有抑制作用，主要是通過增加IL-2的含量，達到增強機體的免疫功能的目的，同時，降低瘤組織中VEGF和bFGF的表達，而實現(xiàn)減少腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的。

[1] Coleman JR. The PB1-F2 protein of influenza A virus: increasing pathogenicity by disrupting alveolar macrophages[J].Virol J, 2007, 4: 9.

[2] Santoro SW, Joyee GF. A general purpose RNA-cleaving DNA enzyme [J].Pro Natl Acad Sci USA, l997, 94 (9):4262-4266.

[3] CARMELIET P. Angiogenesis in life, disease and medicine[J]. Nature, 2005, 438(7070): 932-936.