HPLC法同時測定川芎藥材中阿魏酸、咖啡酸的含量

張錦霞??杜曉霞??曹鳳秋??李國峰??趙寧民

[摘要] 目的 建立HPLC法同時測定川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸含量的方法。 方法 采用Kromasil -ODS（250mm×4.6mm，5?m）色譜柱，流動相為甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；流速：1.0mL/min；檢測波長：323nm。 結果 阿魏酸和咖啡酸的線性范圍分別為：13.62～257.4mg/mL （r=0.9996）和29.40～515.7mg/mL （r=0.9995）；平均回收率（n=6）分別為阿魏酸96.6%（RSD=0.8%）和咖啡酸95.6%（RSD=0.5%）。 結論 該法操作簡單，結果準確，重現性好，為全面評價不同產地川芎藥材的質量提供方法。

[關鍵詞] HPLC；阿魏酸；咖啡酸；川芎

[中圖分類號] R917 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）21-102-03

川芎（Rhizoma Chuanxiong）為傘形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根莖，其所含主要有效成分有酚酸類、內酯類、生物堿和揮發油等[1]，廣泛應用于臨床治療。目前，對川芎中成分的含量測定多集中在阿魏酸、藁本內酯和川芎嗪等的測定[2-4]。本研究將川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸兩組分含量同時測定，并對不同產地的藥材進行含量比較，以完善川芎的質量控制。

1 試劑與方法

1.1 儀器

Agilent-1100型高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器（DAD）、四元梯度泵、在線真空脫氣機和柱溫箱。超聲波清洗器（DS3120 DC），RE-52型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試劑

甲醇為色譜級，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

1.3 試驗用藥

阿魏酸、咖啡酸對照品（自制，經HPLC檢測質量分數均>99.0%）。川芎購自四川等10產地，經鑒定均為正品。

1.4 方法

1.4.1 溶液制備

1.4.1.1 對照品儲備液的制備 分別取阿魏酸和咖啡酸對照品適量，用甲醇溶解，制成濃度分別為0.5008mg/mL和1.000mg/mL的對照品溶液。

1.4.1.2 供試品溶液的制備 選取不同產地的川芎藥材，粉碎過篩后，分別精密稱定粉末約1.0g，置錐形瓶中，然后加入0.5mol/L NaOH溶液50mL，超聲提取20min，共提取3次，冷卻，靜置，離心，取上清液，用稀HCl調pH=2，然后用乙酸乙酯等量萃取3次，合并萃取液，使用旋轉蒸發儀蒸干，用甲醇復溶并稀釋至25mL量瓶中，0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液。

1.4.2 色譜條件 色譜柱：Kromasil -ODS（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；檢測波長：320nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；柱溫：30℃。

2 結果

2.1 系統適用性試驗

按照上述樣品處理方法和色譜條件進行測定，兩峰之間的分離度大于1.5；理論塔板數大于30 000；拖尾因子在0.95～1.05之間，均滿足定量要求。色譜圖見圖1。

（B）

1.咖啡酸；2.阿魏酸

2.2 線性關系的考察

分別精密量取阿魏酸和咖啡酸對照品溶液適量，配成混合對照品系列溶液，按照上述色譜條件，進樣分析，以各自的濃度X（μg/mL）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得到阿魏酸和咖啡酸回歸方程分別為：Y=5.339×104X+230.8，r=0.9996；Y=4.588×104X+470.2，r=0.9995。線性范圍分別為：13.62～57.40μg/mL和29.40～515.7μg/mL。

2.3 精密度試驗

取阿魏酸和咖啡酸的中濃度混合對照品溶液，按照1.4.2色譜條件，連續進樣6次。分別測得阿魏酸和咖啡酸的峰面積，計算兩組分峰面積的RSD分別為0.3%和0.5%，精密度良好。

2.4 重復性試驗

取6份同一產地川芎藥材粉末，精密稱定，按照1.4.1項下處理，按1.4.2色譜條件，進樣分析。阿魏酸和咖啡酸含量的RSD分別為0.2%和0.2%。

2.5 穩定性試驗

取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12h，按照2.1項下處理，按2.2色譜條件，進樣分析。阿魏酸和咖啡酸峰面積的RSD分別為0.7%和0.3%。結果表明供試品溶液在12h內穩定。

2.6 加樣回收率試驗

取同一產地已知含量的川芎藥材粉末6份，加入已知濃度的混合標準品溶液適量，再加入0.5mol/L NaOH溶液至50mL，按照按2.2色譜條件進樣分析并計算其加樣回收率。阿魏酸和咖啡酸的平均回收率分別為96.6%和95.6%，RSD分別為0.9%和0.5%。見表1。

2.7 樣品測定

取不同產地的川芎藥材粉末精密稱定1.00g，按照2.1項下處理，按2.2色譜條件，進行分析，分別計算阿魏酸和咖啡酸的含量，結果見表2。

3 討論

3.1 提取條件的優化

本實驗通過考察不同酚酸類成分的提取方法[5-8]，比較了甲醇、甲醇-水、甲醇-5%甲酸水、0.5mol/L NaOH溶液這4種不同的提取溶劑，氯仿、乙酸乙酯等2種不同的萃取溶液，對樣品進行提取分析后進樣分析，通過考察阿魏酸和咖啡酸的含量，從而選擇了最佳的提取條件。

3.2 色譜條件的優化

本實驗考察了3根不同的色譜柱，分別為Waters-C18（150mm×3.9mm，4μm）；Venusil XBP C18（L）（250mm×4.6 mm，5μm）和Kromasil -ODS （250mm×4.6mm，5μm），綜合考慮選擇Kromasil色譜柱。參考藥典[9]選擇檢測波長為320nm，此波長可避免雜質干擾且可較好的檢測該兩組分。endprint

川芎道地藥材的形成模式為道地產區獨特的生態環境與先進的栽培種植技術相結合的雙因素關聯決定型，川芎有效成分之間、土壤營養值之間均存在一定的相關關系，不同產地藥材質量差別巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作為川芎質量的評價指標。本研究采用HPLC法分析不同產地的川芎樣品，結果表明各產地藥材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明顯差別，最大可相差2倍，與其他文獻研究一致[12-13]。對不同產地的川芎進行質量評價，可以完善川芎的質控體系，具有重要意義。

[參考文獻]

[1] 舒冰，周重建.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進展[J].中國藥理學通報，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，張暉芬.HPLC法同時測定川芎藥材中3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 張慧，裴志東.HPLC法測定川芎及制劑中阿魏酸的含量[J].遼寧中醫學院學報，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干國平.氣相色譜法測定川芎油中阿魏酸的含量[J].時珍國醫國藥，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 張囡，杜麗麗.中藥酚酸類的研究進展[J].中國現代中藥，2006，8（2）：25-28.

[6] 許海棠，徐遠金.HPLC/MS測定蒲公英顆粒中綠原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化學通報，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，劉世霆.高效液相色譜法同時測定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中國現代應用藥學雜志，2006，23（3）：229-231.

[8] 劉江云，楊學東.天然酚酸類化合物的反相高效液相色譜分析[J].色譜，2002，20（3）：245-248.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：38.

[10] 陳林，彭成，劉友平，等.川芎道地藥材形成模式的探討[J].中國中藥雜志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.川芎有效成分與土壤營養值相關性研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（24）：121-125.

[12] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.新老產地川芎中酚酸類成分的含量比較及川芎等級劃分內涵研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，張了云，等.不同產地川芎對家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流變性的品質評價研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint

川芎道地藥材的形成模式為道地產區獨特的生態環境與先進的栽培種植技術相結合的雙因素關聯決定型，川芎有效成分之間、土壤營養值之間均存在一定的相關關系，不同產地藥材質量差別巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作為川芎質量的評價指標。本研究采用HPLC法分析不同產地的川芎樣品，結果表明各產地藥材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明顯差別，最大可相差2倍，與其他文獻研究一致[12-13]。對不同產地的川芎進行質量評價，可以完善川芎的質控體系，具有重要意義。

[參考文獻]

[1] 舒冰，周重建.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進展[J].中國藥理學通報，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，張暉芬.HPLC法同時測定川芎藥材中3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 張慧，裴志東.HPLC法測定川芎及制劑中阿魏酸的含量[J].遼寧中醫學院學報，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干國平.氣相色譜法測定川芎油中阿魏酸的含量[J].時珍國醫國藥，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 張囡，杜麗麗.中藥酚酸類的研究進展[J].中國現代中藥，2006，8（2）：25-28.

[6] 許海棠，徐遠金.HPLC/MS測定蒲公英顆粒中綠原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化學通報，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，劉世霆.高效液相色譜法同時測定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中國現代應用藥學雜志，2006，23（3）：229-231.

[8] 劉江云，楊學東.天然酚酸類化合物的反相高效液相色譜分析[J].色譜，2002，20（3）：245-248.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：38.

[10] 陳林，彭成，劉友平，等.川芎道地藥材形成模式的探討[J].中國中藥雜志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.川芎有效成分與土壤營養值相關性研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（24）：121-125.

[12] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.新老產地川芎中酚酸類成分的含量比較及川芎等級劃分內涵研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，張了云，等.不同產地川芎對家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流變性的品質評價研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：110-112.

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川芎道地藥材的形成模式為道地產區獨特的生態環境與先進的栽培種植技術相結合的雙因素關聯決定型，川芎有效成分之間、土壤營養值之間均存在一定的相關關系，不同產地藥材質量差別巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作為川芎質量的評價指標。本研究采用HPLC法分析不同產地的川芎樣品，結果表明各產地藥材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明顯差別，最大可相差2倍，與其他文獻研究一致[12-13]。對不同產地的川芎進行質量評價，可以完善川芎的質控體系，具有重要意義。

[參考文獻]

[1] 舒冰，周重建.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進展[J].中國藥理學通報，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，張暉芬.HPLC法同時測定川芎藥材中3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 張慧，裴志東.HPLC法測定川芎及制劑中阿魏酸的含量[J].遼寧中醫學院學報，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干國平.氣相色譜法測定川芎油中阿魏酸的含量[J].時珍國醫國藥，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 張囡，杜麗麗.中藥酚酸類的研究進展[J].中國現代中藥，2006，8（2）：25-28.

[6] 許海棠，徐遠金.HPLC/MS測定蒲公英顆粒中綠原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化學通報，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，劉世霆.高效液相色譜法同時測定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中國現代應用藥學雜志，2006，23（3）：229-231.

[8] 劉江云，楊學東.天然酚酸類化合物的反相高效液相色譜分析[J].色譜，2002，20（3）：245-248.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：38.

[10] 陳林，彭成，劉友平，等.川芎道地藥材形成模式的探討[J].中國中藥雜志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.川芎有效成分與土壤營養值相關性研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（24）：121-125.

[12] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.新老產地川芎中酚酸類成分的含量比較及川芎等級劃分內涵研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，張了云，等.不同產地川芎對家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流變性的品質評價研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：110-112.

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