懸浮紅細胞與去白細胞懸浮紅細胞溶血率在貯存期的比較

劉延玲

山東省萊蕪市中心血站總務科，山東萊蕪 271100

隨著目前獻血宣傳工作的強化,人民獻血意識的增強，我國的獻血量在逐年的增加，為了保證這些血液能安全有效的應用于臨床，必須對血液的貯存加強管理。而貯存期溶血現象的發生是貯存面臨的主要問題，所謂的溶血是紅細胞膜因各種內在或外界的原因受損使其細胞內血紅蛋白流出，導致血液成分破壞，血液顏色加深。當溶血率達到一定值時嚴重的影響臨床用血，對輸血患者有潛在的隱患，依據臨床數據顯示血液貯存期越長其溶血現象越容易發生[1]。而臨床用血主要有全血、去白細胞懸浮紅細胞血液、懸浮紅細胞血液，血為液中的白細胞會引起很多疾病，也是多種疾病的熱源，所以國外大都采用去白細胞紅細胞懸浮液[2]，能夠進一步的確保臨床用血的安全性，但有部分文獻報道[3]去白細胞的過程會增加溶血的風險，為了探討不同血液在貯存期的溶血率，為臨床貯存用血提供參考指標，該研究于2013年3—8月該站收集的90袋每袋200 mL的血液，將同等樣本血液通過不同分離及過濾方法，分析其溶血率的變化，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

一次性的200 mL去白細胞過濾血袋（上海輸血技術有限公司生產，國藥管械（準)字：20023661071號）60套，由南京賽爾金生物醫學有限公司提供的普通血液四聯血袋（國食藥監械(準)字2004第3660460號）90套，低溫操作臺、離心機、無菌操作臺、4度血液冷藏柜（北京福意電器有限公司，型號 FYL-YS-66L），紅細胞保存液，簡稱MAP（主要成分包括枸櫞酸鹽、枸櫞酸、葡萄糖、腺嘌呤、磷酸鹽等）。

1.2 方法

1.2.1 去白細胞懸浮紅細胞血液的制備I組 應用一次性200ml普通血液四聯袋采集2012年4月—10月的全血30袋，放入4度冰箱中12 h，冰箱的溫度為（4±2）℃，12 h后在無菌環境下用離心機離心15 min，離心機的轉速為 2820轉/min，靜止后去除上層溶液，在低溫環境中按照白細胞過濾血袋操作，操作環境均為無菌環境，空氣經過紫外線殺菌，地面經過氧乙酸消毒，操作中手均用75%的酒精消毒，實驗過濾后加入MAP保存液可得去白細胞懸浮紅細胞液。將此方法得到的血液標記為去白懸紅I組。

1.2.2 去白細胞懸浮紅細胞血液制備II組 應用一次性200 mL普通血液四聯袋采集2012年4月—10月的全血30袋，放入4度冰箱中12 h，冰箱的溫度為（4±2）℃，12 h后在低溫無菌環境中按照白細胞過濾血袋操作將全血進行過濾，然后將溶液繼續放入離心機中離心15 min，靜止后去除上層液，加入MAP保存液，可得去白細胞懸浮紅細胞液。將此方法得到的血液標記為去白懸紅II組。

1.2.3 懸浮紅細胞制備 應用一次性200 mL普通血液四聯袋采集2012年4月—10月的全血40袋，放入4℃冰箱中 12 h，冰箱的溫度為（4±2）℃，12 h后在無菌環境下用離心機離心15 min，離心機的轉速為2820轉/min，靜止后去除上層溶液，加入MAP保存液可得去白細胞懸浮紅細胞液。

1.3 樣品檢測

分別在7、14、21、28 d從4℃冰箱中采取三組的血液樣本，利用血細胞計數儀測定每個樣品中紅細胞比容、血紅蛋白含量，游離紅細胞蛋白的含量用鄰甲聯苯胺法測定 。計算公式：紅細胞溶血率（%）=游離紅細胞蛋白濃度 ×容量×（1－紅細胞比容）×100/血紅蛋白濃度×容量 ×100

1.4 統計方法

統計采用SPSS17.0軟件進行處理，計量數據以均數±標準差（）形式表示，計量資料采用 t檢驗。

2 結果

2.13 組樣品貯存期游離紅細胞蛋白的比較

3組經過7、14、21、28 d后分別檢查其血液中游離紅細胞蛋白數，去白懸紅I組與去白懸紅II組的游離紅細胞蛋白數目都高于紅細胞懸浮組，差異有統計學意義（P＜0.05）,去白懸紅I組與去白懸紅II組比較差異無統計學意義（P>0.05）,見表1。2.23組樣品貯存期溶血率的比較

表1 紅細胞懸浮組與去白兩組游離紅細胞蛋白的比較[（），g/L]

表1 紅細胞懸浮組與去白兩組游離紅細胞蛋白的比較[（），g/L]

注：與紅細胞懸浮組比◇t=12.412,7.924,11.221,8.910,◇P<0.01;□t=10.521,8.412,13.514,9.310，□P＜0.05；與去白紅懸 II比較，*P＞0.05 差異無統計學意義。

時間 紅細胞懸浮組 去白懸紅I 去白懸紅II第7天第14天第21天第28天0.18±0.170.33±0.220.47±0.290.71±0.34（0.41±0.34）◇*（0.60±0.46）◇*（0.78±0.46）◇*（1.30±0.69）◇*（0.36±0.24）□（0.65±0.41）□（1.02±0.59）□（1.38±0.62）□

3組血液分別在7、14、21、28 d取樣計算其溶血率，去白懸紅I組與去白懸紅II組的溶血率都高于紅細胞懸浮組，差異有統計學意義（P<0.05）,去白懸紅I組與去白懸紅II組比較差異無統計學意義（P>0.05），見表 2。

表2 紅細胞懸浮組與去白兩組不同時期溶血率的比較（）

表2 紅細胞懸浮組與去白兩組不同時期溶血率的比較（）

注：P1為紅細胞懸浮組與去白懸紅I比較，P2為紅細胞懸浮組與去白懸紅II組比較，P3為去白懸紅I與去白懸紅II比較。

時間 紅細胞懸浮組 去白懸紅I 去白懸紅II P第7天0.59±0.020.14±0.090.10±0.06第14天0.11±0.070.20±0.130.21±0.10第21天0.13±0.080.24±0.140.32±0.16第28天0.21±0.110.10±0.220.41±0.18 P1=0.047 P2=0.010 P3=0.035 P1=0.022 P2=0.015 P3=0.043 P1=0.035 P2=0.039 P3=0.040 P1=0.001 P2=0.001 P3=0.042

3 討論

由于人體白細胞抗原的抗原性不強，特別是特殊體質人群，如孕婦、多次輸血者、白血病、和非鐵血貧血者、臟器移植患者等體內可產生一定量的白細胞凝聚素[3]，這些人群中的凝聚素具有特異性，和自己體內的白細胞不會發生凝聚反應，但對外界輸入體內的血液會發生凝聚反應，多數患者有發熱和過敏的臨床表現，過敏反應多為尊麻疹或斑丘疹，為了降低輸血后的臨床不良反應事件，臨床上有在輸血前可以靜脈注射地塞米松，但有數據統計輸血前注射地塞米松并不能有效的降低不良反應，如果發生麻疹等過敏反應可注射撲爾敏50 mg或者25 mg苯海拉明，嚴重者應該馬上停止輸血，靜脈滴注或者肌肉注射腎上腺，但這些藥物的應用對特殊體質人群還需要慎重用藥，且這些藥物的注射不能直接同輸血靜脈注射，需要另一靜脈注射，也給患者再次輸血帶來很大心理障礙，所以提高血漿質量預防不良反應在臨床上顯得尤為重要。目前應用最廣泛的是將血液中的白細胞過濾掉[4]，有研究報道只要將血漿中75%的白細胞去掉就可以降低不良反應的發生[5]。但血站有報告顯示去白細胞懸浮紅細胞血液在保存期會出現溶血的現象，可能與過濾過程造成紅細胞膜受損有關，也可能過濾儀器的型號、和操作人員的技術有影響[6-10]。有研究表明在過濾過程中一些紅細胞變形能力較差剛能通過濾膜，再通過過程中紅細胞膜就會和過濾器間產生較大的摩擦，使得其結構受損，穩定性降低在存儲中壽命較短，也有操作不當，如過濾前過早的對血漿品進行震蕩、或者劇烈搖晃導致部分細胞受損，容易破裂[11]。

根據該研究結果，兩組經過去白過濾的血液（去白懸紅I、去白懸紅II）溶血率都高于未經過去白過濾的紅細胞懸浮組，所以證明去白過程中確實可以破壞部分紅細胞，使得溶血率升高，但是去除白細胞的兩組溶血率也都低于0.8%,歐盟新標準規定在貯存期血液溶血率＜0.8%作為溶液的參照指標[12]，所以該結果符合臨床用血的要求。而不同過濾流程得到的去白懸浮紅細胞液的兩組溶血率差異無統計學意義（P>0.05）。結合該研究結果可得出去懸浮紅細胞血漿更適合長期保存，因為其溶血率低，血漿中游離血紅蛋白少，但據臨床反應會有一定的不良反應[13-16]，所以此方法適合長時間貯備的應急血液，但給患者輸血時候應該主意觀察患者反應。去白懸浮紅細胞血漿更適于短期保存，雖然其溶血率偏高，但是卻在合理的范圍內，切能夠減少臨床不良反應時間的發生，可以更好的應用臨床。所以該研究認為可以再加強過濾技術后，在短期保存期內盡早的用于輸血患者，可以更好的保證用血的安全，同時也降低了輸血患者不良反應后再次注射藥物的傷害。

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