川丹通脈片質量標準研究

汪濤胡衛東劉一佳李育芳曾凡波

(1.解放軍武漢療養院，430074；2.第二炮兵指揮學院訓練部，430012；3.華中科技大學同濟醫學院藥學院，430030)

川丹通脈片質量標準研究

汪濤1胡衛東1劉一佳2李育芳1曾凡波3

(1.解放軍武漢療養院，430074；2.第二炮兵指揮學院訓練部，430012；3.華中科技大學同濟醫學院藥學院，430030)

目的 建立川丹通脈片的質量控制方法。方法 用TLC法對川芎、丹參進行定性鑒別；HPLC法測定川丹通脈片中丹參所含丹參素鈉的量，選用Nova-pak ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動相為甲醇-0.5%磷酸二氫鉀溶液(0.1%磷酸溶液調pH至4.0，15∶85)檢測波長：280 nm。結果 TLC檢出了川芎、丹參特征斑點，丹參素鈉檢測濃度在10.0～100.0 μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系(r＝1.00)，加樣回收率為98.58%，RSD為0.74%。結論 質量控制方法簡便、穩定、可靠，可作為本品的質量控制方法。

川丹通脈片；質量標準；高效液相色譜法；薄層色譜法

川丹通脈片為解放軍武漢療養院研制開發的純中藥制劑，于2011年取得軍隊醫療機構制劑臨床研究批準文號：廣L2011001，具有活血化瘀，祛痰開竅，擴張血管、增進心腦動脈血流量的作用。用于治療心絞痛，心肌梗死，腦血栓，腦卒中后的偏癱，失語，口眼歪斜，頭痛頭暈等癥。為更好地控制產品質量，對川芎、丹參兩味藥材進行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法(HPLC)對方中丹參所含丹參素鈉進行了含量測定，為該制劑建立完善的質量標準提供了依據。現總結如下。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A高效液相色譜儀(SPD-M20A紫外-可見光檢測器，SIL-20AC自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱)；電子天平(CP225D，1/10萬)；KQ-500B型超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

丹參素鈉對照品(供含量測定用，批號：110855-200508)、丹參酮ⅡA對照品(批號：110766-200214)由中國藥品生物制品檢定所提供。川丹通脈片 (批號為：130114、130221、130310、130403、130517)由解放軍武漢療養院提供。硅膠H薄層板、硅膠G薄層板均由青島海洋化工廠分廠提供。乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；水為純水機凈化水(純水機型號Millipore Milli-Qbiocel型純水器)。其余試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 川芎 取本品20片，研細，稱取2 g，加乙醚20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品(樣品)溶液。另取川芎對照藥材0.3 g，同法制成對照品溶液。再取缺川芎的模擬片20片，按供試品(樣品)溶液制備法制備陰性液。照薄層色譜法[1]附錄(ⅥB)34試驗，吸取上述3種溶液各10 μL分別點于同一硅膠G254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(3∶1)為展開劑，展開，晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的一個熒光主斑點，陰性液無此斑點[2]。

2.2 丹參 取本品20片，研碎，稱取粉末4 g，加乙醚5 mL，振搖，放置1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品(樣品)溶液。另取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺丹參的模擬片20片，按供試品(樣品)溶液制備法制備陰性液。照薄層色譜法[1]附錄(ⅥB)34試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗紅色斑點[3]。

3 丹參素鈉的測定[4]

3.1 對照品溶液的制備 取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為50.0 μg/mL的溶液，搖勻，即得。

3.2 供試品溶液的制備 取本品20片，研碎置分液漏斗中，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱重，超聲處理30 min，放冷，再稱重，用上述溶劑補足失重，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例及工藝條件制備缺丹參的陰性樣品，按“3.2”項下方法制備陰性對照溶液。

3.4 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Nova-pak ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.5%磷酸二氫鉀溶液(0.1%磷酸溶液調pH至4.0，15∶85)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；進樣量：10 μL。理論塔板數按丹參素鈉峰計算應不低于4 000。在上述色譜條件下取丹參素鈉對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL進樣，結果表明樣品中其他成分對丹參素鈉的測定無干擾。色譜(圖1)。

3.5 標準曲線的制備 精密稱取丹參素鈉對照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取上述溶液0.5、1、1.5、2、3、5 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件取10 μL進樣，記錄色譜圖。以檢測濃度(X)為橫坐標，峰面積積分值(Y)為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝12.127X－17.331(r＝1.00)。結果表明，丹參素鈉檢測濃度在10.0～100.0 μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

圖1 高效液相色譜圖

3.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液，按照上述色譜條件連續進樣5次，測定峰面積。結果，RSD＝0.89%，表明儀器精密度良好。

3.7 重復性試驗 取同批次樣品，按照“3.2”項下方法制備6份供試品溶液，測定并計算其含量。結果，丹參素鈉平均含量為2.05 mg/粒，RSD＝2.04%，表明方法重復性良好。

3.8 穩定性試驗 取同一供試品溶液，于室溫下放置，在不同時間段(0、2、4、8、16、24、48 h)按上述色譜條件進樣測定。結果，RSD＝1.93%，表明供試品溶液在48 h穩定性良好。

3.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知含丹參素鈉為2.01 mg的6份川丹通脈片研碎細粉，分別精密加入不同質量的丹參素鈉對照品，每個質量平行2份，按照“3.2.2”項下方法制備供試品溶液，測定并計算其含量和加樣回收率，結果(表1)。

3.10 樣品含量測定 取5批樣品，分別按照“3.2”項下方法制備供試品溶液，測定并計算其含量，結果(表2)。

表1 加樣回收率試驗結果(n＝6)

表2 樣品測定結果

4 討論

本制劑中丹參是經水提取干燥后制成片劑，因此用超聲提取方法進行含量測定操作簡便，經與回流提取比較，提取效果無差別；提取溶劑選擇了提取效果較好的50%乙醇。

采用薄層色譜法對川丹通脈片中川芎、丹參兩味藥材進行鑒別，并采用高效液相色譜法對方中丹參所含丹參素鈉進行含量測定，方法簡便，專屬性、重復性好，且結果穩定[5]，可用于川丹通脈片的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[Z].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2]張永玲.冠心康膠囊質量標準研究[J].中國醫藥指南，2010，8(5)：44-46.

[3]崔淑云，王登旭.益肝康口服液的制備及質量標準研究[J].中國藥房，2008，19(3)：192.

[4]李華，李明，鐘雪梅，等.復方心安軟膠囊質量標準研究[J].中國藥房，2010，21(11)：1027-1029.

[5]鄒藹珍.樂脈顆粒的質量標準研究[J].中國藥房，2005，16(15)：1178.

2013-08-12)

1005-619X(2014)03-0235-02

10.13517/j.cnki.ccm.2014.03.026