糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素與血管內皮生長因子的相關性研究＊

陳 萍，李海軍

（1.重慶市長壽區人民醫院眼科，重慶 401220；2.第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所眼科，重慶 400042）

糖尿病性視網膜病變（DR）是糖尿病最常見的并發癥之一，最終會導致雙眼不可逆性失明。DR的發病機制一直在探討之中，血管內皮細胞生長因子（VEGF）在糖尿病視網膜病變發生、發展過程中所起的作用已獲得一定的認可［1］，有報道［2］認為抵抗素（Resist）能誘導VEGF產生，也有報道［3］抵抗素水平與糖尿病視網膜病變嚴重程度具有相關性，本研究通過探討血清抵抗素Resist與血管內皮生長因子（VEGF）的關系，為闡明糖尿病性視網膜病變的發病機制及治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年12月～20013年6月期間本院眼科就診且確診為糖尿病性視網膜病變的患者107例為實驗組，男49例，女58例，年齡（65.17±11.48）歲，診斷分期按照糖尿病性視網膜病變新的國際臨床分級標準（2002年）進行分級［4］，其中Ⅰ期18例35眼、Ⅱ期20例40眼、Ⅲ期17例34眼，Ⅳ期19例38眼、Ⅴ期17例34眼、Ⅵ期16例32眼，均為Ⅱ型糖尿病；另取20例無視網膜病變的Ⅱ型糖尿病患者為糖尿病組，男12例，女8例，年齡（64.81±12.17）歲；20例健康體檢的健康志愿者為對照組，男11例，女9例，年齡（64.02±11.86）歲。三組年齡、性別比無顯著差異（均為P＞0.05），具有可比性。所有研究對象均排除糖尿病急性并發癥、惡性腫瘤、一個月內使用胰島素、胰島素增敏劑、影響糖代謝的藥物服用史及嚴重肝、腎功能不全者。

1.2 研究方法 三組患者均于清晨采集空腹肘靜脈血5ml，靜置30min，3000轉／分離心20min，取血清貯存在一80℃冰箱備檢。采用酶聯免疫吸附（ELISA）法檢測血清VEGF與抵抗素的水平，抵抗素試劑盒購自上海軒昊科技公司，靈敏度：0.05ng／ml，人VEGF ELISA試劑盒購自深圳晶美生物工程公司，最小可測值為30pg／ml，所有檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書操作，采用BIO－RAD550型酶標儀檢測，在450nm處讀取OD值后按標準曲線換算成血清含量。

1.3 統計學方法 用SPSS 16.0統計軟件對數據進行統計分析，計量資料采用均數±標準差（）表示，多組間計量資料比較采用ANOVA方差分析，多個樣本均數的兩兩比較采用LSD－T檢驗，以Pearson相關分析的方法來分析兩組數據間的相關性，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清抵抗素與血清VEGF在各組差異 實驗組血清抵抗素與血清VEGF水平顯著高于無視網膜病變的糖尿病組和對照組（P＜0.05），糖尿病組高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 各組血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 1 The resist and VEGF of the patients

表1 各組血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 1 The resist and VEGF of the patients

注：與對照組比較①P＜0.05，與糖尿病組比較②P＜0.05

組別 n Resist（ng／ml） VEGF（pg／ml）0.00120 5.76±0.12 47.85±13.71糖尿病組 20 6.51±0.23① 59.85±14.49①實驗組 107 9.09±2.56①② 149.43±76.55①②F／p 85.74／0.001 97.61／對照組

2.2 隨著視網膜病變的發展，血清抵抗素Resist與VEGF水平逐漸升高，在各期間兩兩比較，有顯著差異（P＜0.05），見表2。

表2 不同分期糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 2 The resist and VEGF of different stage of diabetic retinopathy

表2 不同分期糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 2 The resist and VEGF of different stage of diabetic retinopathy

注：與Ⅰ期比較①P＜0.05，與Ⅱ期比較②P＜0.05，與Ⅲ期比較③P＜0.05，與Ⅳ期比較④P＜0.05，與Ⅴ期比較⑤P＜0.05

分期 n Resist（ng／ml） VEGF（pg／ml）0.00118 6.72±0.34 68.43±17.55Ⅱ期 20 7.49±0.25① 86.91±19.22①Ⅲ期 17 8.21±0.56①② 99.75±20.24①②Ⅳ期 19 9.34±0.78①②③ 131.65±34.49①②③Ⅴ期 17 9.89±1.17①②③④ 160.18±49.43①②③④Ⅵ期 16 10.11±1.53①②③④ 187.46±63.42①②③④⑤F／p 265.1／0.001 140.25／Ⅰ期

2.3 糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的相關性 Pearson相關分析顯示，糖尿病性視網膜病變患者血清血清抵抗素Resist與VEGF水平呈正相關（r＝0.027，P＝0.001），見圖1。

圖1 糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的相關性分析Figure 1 The relation of resist and VEGF

3 討論

新生血管形成使視網膜毛細血管功能紊亂、硬化與閉塞導致視網膜血液循環障礙，致使視網膜出血及滲出、神經纖維層微小梗死是糖尿病視網膜病變的主要病理改變。但目前糖尿病視網膜病變的發病機制尚在探討之中，除了缺血、缺氧及炎癥誘導的血管生成因子與抑制因子之間的不平衡是導致眼部新生血管形成外，也有多種細胞因子在糖尿病視網膜病變的發生發展中起作用，其中血管內皮生長因子（VEGF）被認為是眼部最主要的促血管生成因子，有效抑制VEGF的過度分泌可以治療糖尿病視網膜病變，但仍有許多患者對抗VEGF治療并無強烈的反應，這提示或許還有其它的因子參與了新生血管形成［5］，荊愛玉等［6］發現：空腹血漿抵抗素水平在糖尿病微血管病的發生、發展中可能起一定作用，抵抗素是一種脂肪內分泌因子，可以引起胰島素抵抗，與糖尿病和肥胖有關［7］，但關于糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素與血管內皮生長因子（VEGF）的關系尚未見報道。

本研究對Ⅱ型糖尿病視網膜病變患者、無視網膜病變的Ⅱ型糖尿病患者及健康志愿者對比發現：糖尿病視網膜病變患者血清抵抗素與血清VEGF水平顯著高于無視網膜病變的Ⅱ型糖尿病患者和健康者，無視網膜病變的Ⅱ型糖尿病患者高于健康者，表明無視網膜病變時糖尿病患者的體內血清抵抗素與血清VEGF已經有了變化，糖尿病視網膜病變發病隱匿而且進展緩慢［8］。Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期為單純型病變，即非增殖性糖尿病性視網膜病變，非增殖性糖尿病性視網膜病變發展到一定程度時由于新生血管過度增殖，在視網膜組織附近逐漸形成纖維條帶，視網膜受到牽拉，會進一步發展為形成增殖性糖尿病視網膜病變，即Ⅳ期、Ⅴ期和Ⅵ期為增殖性糖尿病性視網膜病變，本研究發現：隨著視網膜病變程度的發展，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期和Ⅵ期血清抵抗素與血清VEGF水平逐漸升高，在各期兩兩之間有顯著差異，血清抵抗素與血清VEGF隨著糖尿病性視網膜病變程度加重而升高，VEGF的增加主要是由視網膜Muller細胞分泌的［9］。VEGF是一種促新生血管形成的生長因子，且能刺激內皮細胞基底膜，使其上有明顯血管樣管道形成，VEGF通過兩種酪氨酸激酶受體（VEGFR－1和 VEGFR－2）對血管細胞發生作用，這兩種受體是視網膜血管和神經的組成成分，VEGFR－2主要存在于星形膠質細胞、Muller細胞、神經節細胞以及視網膜色素上皮細胞中，過量的VEGF促進大量的新生血管形成，導致了糖尿病性視網膜病變。本研究結果一方面驗證了糖尿病性視網膜病變患者有過度分泌的VEGF，另一方面提示血清抵抗素與糖尿病性視網膜病變的發展具有某種聯系。

本研究在相關性分析中發現：糖尿病視網膜病變患者的血清抵抗素與血清VEGF水平具有正相關性，表明血清抵抗素可能通過參與新生血管形成而促進糖尿病性視網膜病變的進展，有研究［10］認為：抵抗素與Ⅱ型糖尿病患者的并發心血管病變密切相關，也有研究［11］認為：抵抗素可以通過促進內皮細胞增殖和遷移，促進毛細血管樣管道形成，上調VEGF受體和MMP以及激活ERK1／2、p38MAPK途徑磷酸化作用，促進新生血管形成。由于目前相關文獻少，對血清抵抗素與血清VEGF水平在糖尿病性視網膜病變中的作用機制未形成定論，進行需要進一步分析研究非增殖性糖尿病性視網膜病變與增殖性糖尿病性視網膜病變患者血清抵抗素與血清VEGF水平的差異及血清抵抗素與血清VEGF在糖尿病性視網膜病變中的作用機制。

4 結論

血清抵抗素與血清VEGF隨著糖尿病性視網膜病變程度加重而升高，血清抵抗素與血清VEGF水平具有正相關性，血清抵抗素可能通過參與新生血管形成而促進糖尿病性視網膜病變的進展。

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