高效液相色譜法測定復方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量

周紅玲，石 雕，王智穎，劉 陽，丁 楠

（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院，湖南 株洲 412000）

高效液相色譜法測定復方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量

周紅玲，石 雕，王智穎，劉 陽，丁 楠

（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院，湖南 株洲 412000）

目的建立高效液相色譜法測定復方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿含量的方法。方法采用色譜柱為Agilent Extend-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（含 0.1%三乙胺）（4∶96）：流速為 1 mL/min；柱溫為25℃；檢測波長為260 nm；進樣量為10 μL。結果鹽酸麻黃堿在0.24～2.4 μg內線性關系良好，回歸方程Y=4 118X－36.3，r=0.999 8（n=6），平均加樣回收率為98.2%，RSD為0.5%(n=6)。結論本法快速簡便、重復性好、結果準確，可用于測定復方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量。

復方咳喘顆粒；鹽酸麻黃堿；高效液相色譜法；含量測定

復方咳喘顆粒為我院創新制劑，由麻黃、苦杏仁、石膏、茯苓等組成，具有鎮咳、祛痰、抗炎作用，臨床用于治療咳喘，具有良好的療效。該方由五虎湯加減化裁而來，研究證實五虎湯具有抑制哮喘患兒輔助性T細胞2（Th2）類細胞因子白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-5（IL-5）的產生，從而調節輔助性T細胞1（Th1）/Th2失衡的作用[1]。處方中麻黃為君藥，具有宣肺平喘的功效，其主要有效成分為鹽酸麻黃堿[2-4]，為了有效的控制制劑的質量，本研究采用高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿含量，建立復方咳喘顆粒的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀 （DAD檢測器G1315B等，美國）；KQ-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；AR2140電子分析天平（美國奧豪斯公司）。

1.2 試藥

鹽酸麻黃堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201007）；乙腈為色譜純；水為雙蒸水；其他試劑均為分析純；復方咳喘顆粒（規格8 g/袋，為本院自制，批號：121201、121202、121203）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性

色譜柱：Agilent Extend-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（含 0.1%三乙胺）（4∶96）；流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃； 檢測波長：260 nm；進樣量：10 μL。理論板數按鹽酸麻黃堿色譜峰計算應不低于3 000。在上述色譜條件下，鹽酸麻黃堿色譜峰與其他組分色譜峰達基線分離，且分離度＞1.5；陰性對照品測定無干擾，對照品、樣品及陰性樣品色譜圖，見圖1。

2.2 溶液的制備

圖1 鹽酸麻黃堿對照品和供試品高效液相色譜圖

2.2.1 對照品溶液的制備 取105℃干燥3 h的鹽酸麻黃堿對照品 12 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加甲醇制成 0.48 mg/mL的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取復方咳喘顆粒適量，研成細粉，取約1.0 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸溶液50 mL，稱定質量，超聲處理30 min，冷卻后用0.1 mol/L鹽酸溶液補足減失重，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，滴加氨水調節pH 11～12，用乙醚萃取3次，每次30 mL，合并乙醚萃取液，加5%鹽酸乙醇溶液1 mL，搖勻，低溫蒸干，殘渣用流動相溶解至10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，取續濾液即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按復方咳喘顆粒制備工藝制備缺麻黃的陰性樣品顆粒，依照“2.2.2”項下方法制得陰性樣品溶液。

2.3 線性關系考察

取對照品溶液適量，用甲醇依次稀釋成每1 mL含鹽酸麻黃堿 0.24、0.192、0.144、0.048、0.024 mg 的溶液。依次量取各溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄鹽酸麻黃堿色譜峰面積，以進樣量為橫坐標（X，μg）、以峰面積為縱坐標（Y）繪制標準曲線，得回歸方程為 Y=4 118X－36.3，r=0.999 8，結果表明鹽酸麻黃堿在0.24～2.4 μg范圍內具有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

量取對照品溶液10 μL，注入色譜儀，記錄鹽酸麻黃堿對照品色譜峰面積，連續進樣6次，計算峰面積RSD為0.5%，結果表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

取復方咳喘顆粒 （批號：121201）適量，按照“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，進樣10 μL，記錄供試品中鹽酸麻黃堿色譜峰面積，計算鹽酸麻黃堿的平均含量為0.654 9 mg/g，其RSD為1.0%，表明本方法的重復性良好。

2.6 穩定性試驗

取復方咳喘顆粒（批號：121201）供試品溶液，分別于 0、1、2、4、8、24 h 測定供試品中鹽酸麻黃堿的含量，結果RSD為0.6%，表明復方咳喘顆粒供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.7 加樣回收試驗

取已知含量的復方咳喘顆粒 （批號：121201）樣品6份，每份約 0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，分別精密加入對照品溶液，依“2.2.2”項下方法制得供試液，測定鹽酸麻黃堿的含量，計算回收率。結果見表1。

2.8 樣品含量測定

取復方咳喘顆粒樣品3批，依法測定鹽酸麻黃堿峰面積，計算樣品中鹽酸麻黃堿的含量，結果見表2。

表2 3批樣品中鹽酸麻黃堿含量測定結果 （mg/g）

3 討論

本實驗參考《中華人民共和國藥典》[5]，選用了甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動相，但發現色譜峰保留時間較長，所以改用乙腈-0.1%磷酸溶液作為流動相；在檢測波長的選擇中，藥典采用210 nm，考慮到樣品在210 nm處吸收峰復雜，而且色譜峰基線不穩定，故采用DAD檢測器對供試品中的鹽酸麻黃堿峰進行紫外掃描，發現二者的吸收光譜形狀一致，且在260 nm處有強吸收，因此我們采用260 nm作為檢測波長。

本試驗建立了高效液相色譜法測定方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿含量的方法，可有效控制復方咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量。

[1]楊靜宜，王孟清，黃 婷，等.五虎湯對哮喘嬰幼兒DC刺激T淋巴細胞分泌IL-4、IL-5的影響[J].湖南中醫藥大學學報，2009，29（2）：49-51.

[2]李佳蓮，方 磊，張永清，等.麻黃的化學成分和藥理活性的研究進展[J].中國現代中藥，2012，14(7)：21-27.

[3]劉 賾，石 倩，楊 洋.麻黃堿與偽麻黃堿平喘效果及機制比較研究[J].中草藥，2009(5)：771-774.

[4]鐘凌云，祝 婧，龔千鋒，等.炮制對麻黃發汗、平喘藥效影響研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24(6)：53-56.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：300-301.

（本文編輯 徐愛良）

Determination Ephedrine Hydrochloride in Compound Cough Granules by HPLC

ZHOU Hongling,SHI Diao,WANG Zhiying,LIU Yang,DING Nan
(The First Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medical College,Zhuzhou,Hunan 412000,China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for determination of ephedrine hydrochloride in compound cough granules.MethodsAgilent Extend-C18 column(5 μm,4.6 mm×250 mm)was used and the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (4:96).The flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was 25℃and the wavelength was 260 nm.The injection volume was10 μL.ResultsThe ephedrine hydrochloride waslineroverthe range of 0.24-2.49 μg.The regression equation Y=4 118.1X-36.278,correlation coefficient r=0.999 8(n=6).The average recovery was 98.2%with RSD=0.5%(n=6).Conclusions The method is rapid simple,reproducible,accurate,and can be used for the content determination of ephedrine hydrochloride in compound cough granules.

compound cough granules;phedrine hydrochloride;HPLC;content determination

周紅玲，女，副主任藥師，主要從事醫院新制劑開發研究。

R248.1

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.08.006.021.03

2014－06－26

湖南中醫藥管理局資助項目（2013144）。