白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷保護研究

黃 展，李春豐，王 晶，何淑玲，姜 成，張羽男，時 慧，蔣 勇，江清林

(1.佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江佳木斯154003；2.佳木斯大學生命科學院，黑龍江佳木斯154007；3.佳木斯大學基礎醫學院，黑龍江佳木斯154007)

白頭翁為毛茛科植物(Pulsatilla chinensis(Bunge)Regel)，多年生草本，別名：打碗花、老翁花、奈何草、耗子花、毛姑朵花、老公花。分布在黑龍江、吉林、遼寧等省山崗與荒坡及田野間。白頭翁干燥根春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。白頭翁干燥根具有清熱解毒，涼血止痢，燥濕殺蟲的功效。對細菌及真菌等有不同抑制作用，白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷是否有保護作用尚未見報道。本實驗進行白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷是否有保護作用研究。

1 材料與方法

1.1 材料

①試劑：四氯化碳(CCl4，分析純，重慶川江化學試劑廠，批號20120426)；正丁醇(CH3CH2CH2CH2OH，分析純，上海紫業化工有限公司，批號20110312)；葵花護肝片(黑龍江葵花藥業股份有限公司，批號110602)；丙二醛(Malondialdehyde；malonic dialdehyde；Propan edial，MDA)；黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase from buttermilk，XOD)；谷胱甘肽還原酶試劑盒(Glutathione Reductase Assay Kit上海碧云天生物技術有限公司，批號20100322)。

②藥物：白頭翁正丁醇提取物提取工藝流程：白頭翁粗粉→加95%乙醇熱回流提取3h→用布氏濾斗過濾，共提取3次，合并濾液靜置12 h→80℃R2003旋轉蒸發器減壓濃縮→白頭翁提取物(BR)→水溶解混懸→正丁醇萃取→YC-015微型實驗室噴霧干燥機真空干燥備用。正丁醇組分加水超聲溶解定容10mL，即1mL，含生藥量5g。

③實驗動物：昆明種(KM)小鼠，60只，平均體質量(20±2)g，由佳木斯大學實驗動物中心提供。

④儀器722分光光度計(上海棱光技術有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 急性肝損傷模型建立：昆明種(KM)小鼠，60只，平均體質量(20±2)g，由佳木斯大學實驗動物中心提供，采用0.1%CCl4花生油溶液10mL/kg，禁食不禁水24h后模型成功。

1.2.2 分組與給藥：采用隨機分組，①正常對照組：昆明種(KM)小鼠10只，喂飼普通飼料，灌胃生理鹽水1mL/100g·d；②急性肝損傷模型組(以下簡稱模型組)：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃生理鹽水1mL/100g·d；③葵花護肝片組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃0.5%葵花護肝片1mL/100g·d；④白頭翁正丁醇提取物低劑量組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃5%白頭翁正丁醇提取物1mL/100g·d；⑤白頭翁正丁醇提取物中劑量組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃10%白頭翁正丁醇提取物1mL/100g·d；⑥白頭翁正丁醇提取物高劑量組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃15%白頭翁正丁醇提取物1mL/100g·d。以上6組分別每天灌胃給藥(ig)1次連續灌胃15d后，除正常對照組外，其它組小鼠灌胃0.1%CCl花生油溶液10mL/kg禁食不禁水，24h后造模成功，分別進行生化測定及形態學檢查實驗觀察白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷保護效果。

1.3 統計學處理

采用SPSS18.0統計軟件處理，實驗數據用平均數±標準差()表示，方差分析實驗數據。

2 結果

2.1 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)及肝臟系數影響結果，見表1。

表1 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清中ALT與AST及肝臟系數影響(x± s，n=10)

白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)及肝臟系數影響實驗方法是從模型成功小鼠由眼球后靜脈取血，測血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)及取肝稱重計算肝臟系數(肝臟重量/體重)。實驗結果從表1中可以見到急性肝損傷模型組與正常對照組比較丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)顯著升高(P＜0.01)。白頭翁正丁醇提取物中、高劑量組與急性肝損傷模型組血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)比較差異顯著(P＜0.01、P＜0.05)，表明白頭翁正丁醇提取物對急性肝損傷小鼠肝臟保護作用明顯。急性肝損傷模型組肝臟系數增大明顯，表明藥物對肝臟輕度腫脹有緩解作用。

2.2 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠肝組織中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)及谷胱甘肽還原酶(GSH)影響，見表2。

白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)及谷胱甘肽還原酶(GSH)影響實驗方法，從模型成功小鼠肝左葉取病部肝組織制備10%肝組織勻漿，運用試劑盒測定血清中丙二醛(MDA)(n mol/mg)含量與黃嘌呤氧化酶(XOD)(U/g)及谷胱甘肽還原酶(GSH)(U/g)活性，722分光光度計測定。

實驗結果從表2中可以見到急性肝損傷模型組與正常對照組比較肝組織中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)活性顯著升高，谷胱甘肽還原酶(GSH)活性降低顯著(P＜0.01)。白頭翁正丁醇提取物中、高劑量組均可降低肝組織中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)水平，谷胱甘肽還原酶(GSH)活力提高顯著(P＜0.01)。

表2 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠肝組織中MDA、XOD及GSH影響(x± s，n=10)

3 討論

肝損傷臨床表現腹腔內出血與血液及膽汁引起腹膜刺激征，按損傷程度分真性肝裂傷與肝包膜下裂傷及中央型肝裂傷三種類型。小鼠肝損傷是研究白頭翁正丁醇提取物護肝作用及機制理想病理模型。四氯化碳(CCl4)引起小鼠肝損傷主要是代謝產生自由基作用，其機制是四氯化碳(CCl4)進入小鼠體內經電子還原產生氯甲基及過氧化三氯甲基自由基攻擊脂質細胞膜，肝臟中肝細胞脂質過氧化形成肝損傷，表現為肝腫大，肝脂肪變性，肝硬化等病變。小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)是表示肝損傷主要指標和肝細胞受損程度。

白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷保護研究中經過小鼠灌胃0.1%CCl花生油溶液10mL/kg 24h肝損傷模型形成，表現為肝臟被膜分隔形成肝小葉結構被破壞，肝細胞間血竇及中央靜脈擴張明顯，肝細胞索排列不規律，肝臟組織呈點狀及碎片狀和橋接壞死，脂肪變性及肝細胞變性呈水樣，肝小葉有大量浸潤發炎細胞。實驗結果表明白頭翁正丁醇提取物中、高劑量對小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸轉氨酶(AST)及肝臟系數降低顯著，四氯化碳(CCl4)引起肝損傷形態學病變減輕，說明白頭翁正丁醇提取物對四氯化碳(CCl4)引起肝損傷小鼠保護作用顯著。本實驗的白頭翁正丁醇提取物中和高劑量組小鼠肝小葉結構破壞不顯著，肝細胞間血竇及中央靜脈擴張不明顯，肝細胞腫脹壞死處不明顯，發炎浸潤細胞不多，肝臟組織呈點狀少量壞死。表明白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷有保護作用，這可能就是白頭翁正丁醇提取物保護小鼠肝損傷主要作用機制之一。

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