免疫組化染色的操作技巧和注意事項

王志生 李曉輝 任 飛 薛鳳艷 張國靜

免疫組化染色的操作技巧和注意事項

王志生 李曉輝 任 飛 薛鳳艷 張國靜

目的 本院對免疫組化染色過程中存在的問題及對策進(jìn)行深入的探討以及仔細(xì)的分析。方法 自從2010年6月~2011年7月期間, 本院共收治免疫組化染色標(biāo)本患者有200例, 對其中存在問題的60例患者標(biāo)本進(jìn)行了仔細(xì)的分析, 并且要提出科學(xué)的應(yīng)對措施。結(jié)果 本院對疫組化染色過程提出了主要的積極應(yīng)對措施和科學(xué)的建議。結(jié)論 對于每一個步驟以及環(huán)節(jié), 都會影響到染色的最終后果, 對此, 要盡量避免在染色過程中會出現(xiàn)一些問題, 會使免疫組化染色的質(zhì)量有所提高。

免疫組化；技術(shù)方法；質(zhì)量控制；抗原修復(fù)；原因分析

對于免疫組化(IHC)技術(shù)在上世紀(jì)的80年代之后, 在我國就迅速的開展, 至今已經(jīng)有20年快速發(fā)展的歷程, 現(xiàn)在已經(jīng)逐漸的成為病理科工作中主要的組成要素。綜合性操作技術(shù)主要是導(dǎo)致免疫組化, 這樣會使其反應(yīng)步驟增加, 出現(xiàn)復(fù)雜的影響因素, 技術(shù)員在基礎(chǔ)技術(shù)上的操作要求是相對較高的, 對免疫組織學(xué)習(xí)要進(jìn)行不斷的提高, 了解這種技術(shù)在病理診斷方面是主要的輔助方式, 在對疾病診斷、分析、預(yù)后以及指導(dǎo)臨床個體化治療等方面, 都有著主要的作用。在免疫組化的技術(shù)方面, 也存在著各種實質(zhì)性的問題, 收治免疫組化染色標(biāo)本200例, 其中有60例標(biāo)本存在著問題, 本院對其進(jìn)行仔細(xì)的分析, 并且提出相應(yīng)的科學(xué)對策治療方式。

1 免疫組化染色不理想的原因分析及改進(jìn)措施

1.1 由于大分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定, 它在水中呈現(xiàn)膠狀體, 不易被機體破壞或排除, 這樣在體內(nèi)存留時間就很長,有利于持續(xù)刺激淋巴細(xì)胞。抗體是人體抵抗感染的一種重要武器, 抗體是人或動物受抗原物質(zhì)刺激后, 由漿細(xì)胞合成和分泌的一種特異性蛋白質(zhì), 并具有疏水性, 因此當(dāng)對抗體進(jìn)行稀釋時可降低它的疏水性, 當(dāng)pH接近抗體的等電點時,抗體的疏水性能十分巨大。

1.2 抗體與抗原的交叉反應(yīng) 抗原是一類能誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答, 并能與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)；抗體是人或動物受抗原物質(zhì)刺激后, 由漿細(xì)胞合成和分泌的一種特異性蛋白質(zhì)。組織中其它蛋白質(zhì)存在相同的抗原,就能與抗體直接產(chǎn)生反應(yīng), 會有其它反應(yīng), 臨床由于多克隆抗體適應(yīng)性強, 極容易有交叉反應(yīng)單克隆抗體也能產(chǎn)生交叉反應(yīng), 所以對克隆抗體的應(yīng)用必須謹(jǐn)慎, 使交叉反應(yīng)降到最低。

1.3 抗原修復(fù)不足 對于固定的組織, 會導(dǎo)致抗原之間有相交的聯(lián)系, 是抗原決定簇被封閉, 對此, 要盡早的對抗原進(jìn)行有效的修復(fù)。應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行選擇在修復(fù)時所用的方式,通常可以使用酶消化修復(fù)以及熱修復(fù)等方式。在使用微波修復(fù)還是高壓高溫進(jìn)行修復(fù), 熱修復(fù)都能達(dá)到有效的修復(fù)作為實驗的科學(xué)依據(jù)。

1.4 組織固定不恰當(dāng) 當(dāng)試驗的組織固定的位置是否正確時對試驗結(jié)果有很大影響, 它的好與壞與抗原的保存有直接關(guān)系；當(dāng)固定不及時會出現(xiàn)組織自行溶解或者干硬變形, 一旦出現(xiàn)自溶就會造成抗原丟失, 而干硬就是蛋白質(zhì)變性的結(jié)果, 就會出現(xiàn)大量抗原性功能消失, 極易脫色即便染上也會是棕色的, 所以對體積的要求就更嚴(yán)格了。

2 IHC過程及注意事項

2.1 組織準(zhǔn)備 對于IHC先決條件是進(jìn)行良好的組織處理,組織固定要確保能夠做到最好, 包括對保存細(xì)胞以及組織的形態(tài)的結(jié)構(gòu), 并且在最大限度方面, 能夠保存其抗原的免疫活性值。這樣, 在組織和固定反方面必須進(jìn)行即時、必要處理。

2.2 蠟塊選擇與切片質(zhì)量 對于脫水和包埋質(zhì)量好的蠟塊在選擇上, 能夠充分的保證蠟?zāi)さ耐暾⒕鶆虺潭取Ｍǔ?切片的厚度要確保在3 μm之內(nèi), 對于出現(xiàn)過厚的切片會導(dǎo)致與載玻片的粘附性不牢固, 對于乳腺組織是人體中脂肪含量最多的部位之一, 在高溫和高壓的修復(fù)處理作用時, 容易產(chǎn)生脫片現(xiàn)象［1］。

2.3 抗原修復(fù) 在整個修復(fù)的過程中, 逐漸的減弱多聚賴氨酸分子和組織切片之間的有效結(jié)合力, 這樣, 修復(fù)是免疫組化最常出現(xiàn)的脫片現(xiàn)象。對于適當(dāng)將修復(fù)液是非常重要的,可以選擇相對比較溫和藥物, 比如是枸櫞酸修復(fù)液等。

2.4 染色中應(yīng)注意的一些細(xì)節(jié) 把孵育盒放置在一個比較平穩(wěn)的地方, 不要使抗體液流到組織的另一側(cè), 這會使結(jié)果呈現(xiàn)假陰性反應(yīng)；另外抗體孵育盒里面要留有適量的蒸餾水,但水不宜過多, 防止因水蒸汽在盒蓋聚成水滴, 掉落在切片上, 造成抗體稀釋；再有就是保持切片在整個染色過程中,一定要保持濕潤, 不要出現(xiàn)干片的現(xiàn)象。最后在加入抗體的時候, 要把組織上的水弄干, 避免抗體稀釋影響檢測結(jié)果。

3 結(jié)果

對于免疫組化染色過程, 提出了主要的應(yīng)對措施以及科學(xué)合理的建議。

4 討論

因為人體的抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,而免疫組織化學(xué)正是通過這種原理。它先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來, 以此作為抗原或半抗原, 并通過免疫動物后獲得特異性的抗體, 在用抗體去檢測組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于免疫組化技術(shù)是一個貌似單一的技術(shù), 但其中千變?nèi)f化的環(huán)節(jié)卻很難掌握。只有在關(guān)鍵的地方達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化, 才能取得較好好的檢測結(jié)果。現(xiàn)在科技更新較快, 結(jié)合大量的臨床先進(jìn)經(jīng)驗要求醫(yī)護人員熟練的掌握操作技能, 只有認(rèn)真的規(guī)范和嚴(yán)格遵守各項標(biāo)準(zhǔn), 才能讓免疫組化技術(shù)在臨床發(fā)揮更完善、更徹底、更好的為患者治療。

［1］ 李德本, 王濤, 姜駿.免疫組化染色的操作技巧和注意事項.臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2011, 27(11):1260-1261.

2014-04-01］

130012 長春, 吉林省腫瘤醫(yī)院

李曉輝