恩施硒茶多酚的抗衰老作用

王振富 鐘 靈 楊付明

(湖北民族學院醫學院，湖北 恩施 445000)

許多研究表明，自由基損傷與衰老密切相關。人參多糖、香菇多糖等許多中草藥提取物能直接清除自由基，提高超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶的活性及降低丙二醛(MDA)含量，發揮抗衰老作用〔1，2〕。茶多酚(TP)是從鮮茶葉中分離提取的多酚類復合體，其主要成分為黃烷醇(主要是兒茶素)、花色素(包括茶黃素、茶黑素等)、黃酮及黃酮醇、酚酸及縮酚酸4類化合物。TP是公認的天然抗氧化劑，具有降血脂、降血壓、降血糖、抗腫瘤、防止腦梗死、抗血栓、抗突變、抗輻射、抗衰老等多種作用〔3〕。本實驗通過建立D-半乳糖小鼠衰老模型，采用溶劑提取法提取茶多酚，進一步探討恩施硒茶多酚抗衰老作用及其機制。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器 D-半乳糖(中國上海慧星生化試劑有限公司)；香菇菌多糖片(武漢迪奧藥業有限公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；WFZ- UV2000紫外可見分光光度計(尤尼科上海儀器有限公司)，T J270-30A 紅外分光光度計(天津光學儀器廠) ，TGL-16G高速臺式離心機(上海安亭儀器廠) ，F-160型藥物粉碎機(北京市永光明醫療儀器廠)，RE52-3旋轉蒸發器(上海滬西分析儀器廠)。

1.2恩施硒茶多酚的制備〔4〕硒茶購于恩施自治州農業科學院，茶葉原料→溶劑提取→濾過→去雜質→萃取→干燥→粗品。冷凍干燥保存。實驗前以純水為溶劑配制不同濃度樣品，4℃低溫保存，備用(采用雙道束原子熒光光譜法測定硒的含量為1.947 8 μg/g)。

1.3實驗動物分組、造模及處理 昆明種小鼠，體重28～32 g，由湖北民族學院實驗動物中心提供。將60只小鼠隨機分為6組，每組10只(雌雄各5只)：空白組，模型組，香菇菌多糖組和茶多酚低、中、高劑量組。空白組，灌胃等體積生理鹽水；模型組頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg和灌胃等體積生理鹽水；陽性組頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg和灌胃等體積香菇菌多糖100 mg/kg；根據預試驗確定低、中、高茶多酚劑量各組劑量小鼠的每日用量，分別灌胃75，150，300 mg/kg和同時頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg。按0.2 ml/10 g灌胃1次/d，連續給藥60 d。

1.4觀察指標與方法

1.4.1小鼠胸腺和脾臟指數的測定 末次給藥24 h后，稱量所有小鼠體質量，解剖小鼠，取其胸腺和脾臟，按“胸腺(mg)/體質量(g)、脾臟(mg)/體質量(g)”計算胸腺指數和脾臟指數。

1.4.2小鼠血MDA含量、SOD活力測定 末次給藥24 h后，眼眶取血 ，并立即離心取其血清。按MDA試劑盒說明書操作。于532 nm處測定各管吸光度，計算血清中MDA含量。按SOD試劑盒說明書操作。于550 nm處測定各管吸光度，計算血清中SOD活力。

1.4.3小鼠肝組織GSH-Px活力測定 將小鼠頸椎脫臼位處死，迅速取其肝臟，剔去結締組織、稱量、勻漿器研磨、加預冷的生理鹽水制備成10% 的組織勻漿。冷凍離心(2～4℃ ) ，取其上清液，用GSH-Px試劑盒測定GSH-Px活力。

1.4.4小鼠腦組織CAT活力測定 將小鼠處死,取其腦組織，稱量，加預冷的生理鹽水進行勻漿制備成10%的組織勻漿。冷凍離心(2～4℃) ，取其上清液，用CAT試劑盒測定過氧化氫酶活力。

2 結 果

2.1硒茶多酚對衰老小鼠胸腺和脾臟指數的影響 與空白組比較，模型組胸腺指數和脾臟指數均有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，茶多酚低、中、高劑量組胸腺指數和脾臟指數有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 硒茶多酚對衰老小鼠胸腺和脾臟指數的影響

2.2硒茶多酚對衰老小鼠MDA含量和SOD、GSH-Px 、CAT活力的影響 與空白組比較，模型組MDA含量有顯著性升高,SOD 、GSH-Px、 CAT活力有顯著性降低(P<0.05)；與模型組比較，茶多酚低、中、高劑量組MDA含量有顯著性降低(P<0.05)，茶多酚低、中、高劑量組SOD活力均有提高，中劑量組有顯著性(P<0.01)，低、高劑量組無顯著性差異；茶多酚低、中、高劑量組GSH-Px活力均有極顯著提高(P<0.01)；茶多酚中、高劑量組CAT活力有極顯著性提高(P<0.01)，低劑量組則差異無顯著(P>0.05)。見表2。

表2 硒茶多酚對衰老小鼠MAD含量和SOD、GSH-Px 、CAT活力的影響

3 討 論

衰老的自由基學說是Denham Harman在1956年提出的，認為衰老過程中的退行性變化是由于細胞正常代謝過程中產生的自由基的有害作用造成的。所謂自由基又稱游離基,就是具有未配對的原子、原子團、分子或離子叫自由基。自由基的化學性質活潑，有極強的氧化反應能力，可使各種生物膜的不飽和脂肪酸發生過氧化，形成過氧化脂質〔5〕，這些產物具有一定毒性，能使蛋白質分子內和分子間發生交聯，發生去氫、加成、裂解等反應，從而引起DNA的雙螺旋交聯出現錯誤或無法分裂，一些酶的活性改變，影響細胞的代謝。D- 半乳糖是機體的正常營養成分，當半乳糖過多時，可由半乳糖氧化酶催化生成醛糖和過氧化氫，產生超氧陰離子自由基。過量的氧自由基可引起神經元細胞的損傷，使腦內總RNA和蛋白質含量下降，腦內神經元密度降低，造成動物學習記憶能力下降及機體的衰老〔6〕。許多中草藥是強有力的抗氧化劑，適當補充外源性抗氧化物質，可提高機體抗氧化系統的活力，降低過氧化質子含量，從而起到抗衰老作用〔7〕。本實驗結果提示硒茶多酚可通過增強機體免疫功能、提高機體抗氧化能力和直接清除自由基等發揮其延緩衰老的作用，但作用效果與劑量有一定依從關系，其機制待于進一步研究。

4 參考文獻

1雷載權.中藥學〔M〕.上海：上海科學技術出版社，1995：280-1.

2黃婭琳.抗衰老中藥的研究〔J〕.時珍國醫國藥，2007；18(3):691.

3Khan N，Mukhtar H.Tea polyphenols for health promotion〔J〕.Life Sci，2007；81(7)：519-33.

4郭宇妹，張 沂，朱新生.茶多酚的提取分離與含量測定方法進展〔J〕.解放軍藥學學報，2007；23(2):121-3.

5李義奎，王欽茂.中藥藥理實驗方法學〔M〕.上海：上海科學技術出版社，1989：202.

6畢 敏，尹 政.核桃仁提取物抗腦衰老作用的實驗研究〔J〕.現代中藥研究與實踐，2006；20(3):35.

7楊 輝，程清洲，許 彬，等.竹節參多糖抗腦衰老作用的實驗研究〔J〕.時珍國醫國藥，2009；20(9)：2311-2.