利多卡因預先給藥對腎臟缺血再灌注大鼠血清15-F2t-isoprostance濃度的影響

朱小兵 石翊颯 劉志龍

(中山市中醫院麻醉科，廣東 中山 528411)

利多卡因減輕大鼠腎臟缺血再灌注損傷與其抑制腎組織CD44和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達有關〔1〕，但確切機制尚不清楚。研究表明，氧化應激反應在腎缺血再灌注(IR)損傷中起重要作用〔2〕。15-F2t-isoprostance是氧化應激的特異性產物，可通過激活血栓烷A2受體產生血管收縮〔3～9〕，但其是否參與利多卡因減輕腎IR損傷過程中尚不明確。本研究評價利多卡因預先給藥對腎臟缺血再灌注損傷大鼠血清15-F2t-isoprostance濃度的影響。

1 材料與方法

1.1動物與分組 健康雄性Wistar大鼠36只，體重300～350 g，甘肅中醫學院實驗動物中心提供，隨機分為：假手術組、IR組和利多卡因組，每組12只。

1.2大鼠腎臟缺血再灌注模型的建立 實驗室溫度為25℃，大鼠實驗前禁食12 h，自由進水。腹腔注射3%戊巴比妥50 mg/kg麻醉下，股靜脈穿刺置管，注射肝素400 U/kg后，輸注林格氏液20 ml·kg-1·h-1。參照文獻〔10〕采用的方法建立大鼠腎臟IR模型。于脊柱兩旁0.5 cm肋弓下0.5 cm各縱向切開皮膚1 cm，鈍性分離腰大肌，暴露雙側腎臟，分離腎動脈，用無創動脈夾閉雙側腎動脈，腎臟由紅褐色短時間內變成蒼白色再逐漸變成暗紫色為缺血成功的標志；60 min后松開動脈夾，恢復血流灌注4 h，腎臟由暗紫色變為紅褐色為再灌注成功的標志。若松開動脈夾5 min后，腎臟仍未轉變為紅褐色，則為再灌注未成功，剔出研究。

1.3分組處理 利多卡因組于夾閉雙側腎動脈前60 min靜脈注射利多卡因(批號：110411，上海朝暉藥業有限公司)5 mg/kg，隨后以2 mg·kg-1·h-1速率靜脈輸注，輸注時間為60 min；IR組于夾閉雙側腎動脈前60 min注射等容量生理鹽水，利多卡因組；假手術組不夾閉雙側腎動脈，余同IR組。

1.4測定指標 于再灌注4 h時，打開胸腔，經心尖抽取血樣2 ml，4℃下，離心后取上清液，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法測定15-F2t-isoprostance、ET-1濃度。取腎臟組織，沿長軸切開分為兩半，置于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋，制成厚6 μm的連續切片，取3張相鄰的切片，分別進行HE染色，光鏡下觀察腎組織病理學結果；將剩余心肌組織，加入生理鹽水制成10%組織勻漿，參照試劑盒說明書，采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量。

1.5統計學處理 采用SPSS13.0進行單因素方差分析。

2 結 果

2.1腎組織HE染色結果 光鏡下假手術組腎小球和腎小管結構完整；IR組腎小球毛細血管擴張、充血，部分腎小球體積縮小，大量腎小管細胞水腫、顆粒樣變性，管腔縮小，部分腎小管腔閉合；利多卡因組腎小球毛細血管輕度擴張、充血，病理學損傷輕于IR組。

2.2腎組織SOD活性降低，MDA含量和血清15-F2t-isoprostance及ET-1濃度 與假手術組比較，IR組SOD活性降低，MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1濃度升高(P<0.05)，利多卡因組SOD活性、MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1濃度差異無統計學意義(P>0.05)；與IR組比較，利多卡因組SOD活性升高，MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1濃度降低(P<0.05)，見表1。

表1 三組大鼠腎組織SOD活性、MDA含量及血清15-F2t-isoprostance、 ET-1濃度的比較(n=12，±s)

3 討 論

以往研究多采用腹腔正中切口分離腎動脈建立IR模型，而本研究采用脊柱旁切口分離腎動脈，因不進入腹腔，減少了對大鼠的創傷，降低了死亡率。本研究中，IR組腎臟缺血60 min再灌注4 h后，提示大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型制備成功。本研究參考文獻〔11〕結合預實驗結果，選擇利多卡因給藥方法，利多卡因5 mg/kg靜脈注射后以2 mg·kg-1·h-1速率靜脈輸注60 min后大鼠腎組織SOD活性上調、MDA含量降低，提示利多卡因可減輕腎臟缺血再灌注損傷大鼠氧化應激反應，王紅梅等〔12〕研究表明，利多卡因可減輕冠狀動脈搭橋術患者炎性反應。ET-1是一種內源性的強血管收縮因子。研究表明，心肌缺血再灌注期間產生的15-F2t-isoprostance可誘導ET-1基因表達，促進其的產生和釋放，加重心肌細胞的損傷。本研究提示利多卡因減輕大鼠腎臟缺血再灌注損傷與其抑制15-F2t-isoprostance、ET-1釋放有關，具體機制有待于進一步探討。

綜上，利多卡因減輕大鼠腎臟IR損傷與其抑制15-F2t-isoprostance、ET-1釋放有關。

4 參考文獻

1石翊颯,朱小兵.利多卡因預先給藥對腎臟缺血再灌注損傷大鼠腎組織CD44和TNF-α表達的影響〔J〕.中華麻醉學雜志,2010；30(2):231-3.

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11劉樹鵬,劉 紅,張 寧,等.利多卡因預處理對大鼠吸入性急性肺損傷的影響〔J〕.陜西醫學雜志,2011；40(5):532-6.

12王紅梅,戴安盧,周海燕,等.利多卡因對冠狀動脈搭橋術患者體外循環致全身炎性反應的影響〔J〕.中華麻醉學雜志,2006；26(4):326-8.