p16INK4A蛋白及HPV感染與宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌的相關性分析

傅小一 張子雯

(宜春學院醫學院病理教研室，江西 宜春 336000)

人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌的主要致病因素〔1，2〕。在正常宮頸上皮向宮頸鱗癌轉變的進展過程中，HPV可以導致某些基因結構以及功能發生變化，其中p16INK4A基因是一種可以作用于細胞周期的抑癌基因，該基因主要調控細胞的生長和分化，參與腫瘤的形成與發展〔3〕。越來越多的研究表明，p16INK4A基因可能作為一種生物學標記應用于宮頸癌的早期篩查〔4，5〕。 本研究擬探討p16INK4A蛋白與HPV感染在宮頸癌發生發展中的關系，以期尋找可靠的宮頸癌早期篩查的標志物。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012年1月至2013年8月來宜春市中醫院就診，并在婦產科門診行宮頸活檢和宮頸手術的患者122例，年齡53～81〔平均(53.47±3.85)〕歲，其中慢性宮頸炎22例，宮頸上皮內瘤樣變(CIN)Ⅰ28例、CIN Ⅱ 20例、CIN Ⅲ29例，宮頸鱗癌的23例。所有選用的病例在術前均未接受過任何治療，且均經過病理學檢查證實。

1.2HPV DNA檢測 根據核酸分子雜交基因的原理，選用HPV DNA檢測試劑盒，根據說明書用采樣刷于宮頸內取樣，標本置于液體培養基中保存。高危型亞型中的16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亞型陽性為HPV檢測陽性。

1.3p16INK4A蛋白的檢測 采用免疫組織化學方法檢測，取宮頸組織石蠟切片，按試劑盒說明書進行操作，一抗用鼠抗人的p16INK4A單克隆抗體，1∶100稀釋。陰性對照為磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗，陽性對照為已知陽性的胰腺切片。

1.4免疫組化陽性結果判定 在400倍電子顯微鏡下觀察，取10個視野，計數500個細胞中的陽性細胞數，根據陽性細胞多占的比例及染色的強弱判定結果。細胞核或者細胞質內顆粒被染成棕黃色為p16INK4A陽性。染色強度與背景顏色無明顯差異或者陽性細胞百分率<10%為陰性結果；染色強度較弱或陽性細胞百分率為10%～30%為弱陽性(+)；陽性細胞百分率為31%～60%為中度陽性()；而陽性細胞百分率>60%為強陽性()。

1.5統計學分析 采用SPSS11.0軟件進行分析，計量資料用χ2檢驗，相關分析用Spearman相關分析。

2 結 果

2.1宮頸組織中p16INK4A的表達 p16INK4A蛋白主要表達于細胞核及細胞質中，在慢性宮頸炎中，p16INK4A蛋白幾乎不表達，在CIN Ⅰ級，p16INK4A蛋白的表達率為46.43%(13/28)，在CIN Ⅱ級為75%(15/20)，CIN Ⅲ級82.86%(24/29)，在宮頸鱗癌中為91.3%(21/23)。隨著宮頸病變的程度加重，p16INK4A蛋白的表達率逐漸上升，各級別宮頸病變中p16INK4A蛋白的表達率差異具有統計學意義(χ2=26.19，P=0.000)。并且p16INK4A蛋白的表達強度與宮頸病變程度呈正相關(r=1.216，P=0.000)，見表1，圖1。

圖1 p16INK4A蛋白在宮頸組織的表達情況(×100)

表1 p16INK4A蛋白在宮頸組織的表達(n)

2.2宮頸組織中HPV的感染情況 慢性宮頸炎的HPV感染率為22.73%(5/22)，CIN Ⅰ中HPV感染率為39.29%(11/28)，CIN Ⅱ中為55%(11/20)，CIN Ⅲ中為55.17%(16/29)，宮頸鱗癌中為73.91%(17/23)，隨著宮頸病變的程度加重，HPV的感染率也越來越高，并且各級別宮頸病變之間HPV感染率差異顯著(χ2=18.231，P=0.0066)，且宮頸病變的程度與HPV的感染率也呈正相關(r=0.628，P=0.0062)。

2.3宮頸病變HPV感染分型 在各個級別宮頸病變中HPV感染位于前3位的HPV亞型。見表2。

表2 各級別宮頸病變HPV感染分型〔n(%)〕

2.4不同級別宮頸病變中HPV感染與p16INK4A蛋白的相關性分析 在122例患者中HPV的總感染率為49.18%(60/122)，p16INK4A蛋白的陽性率為59.84%(73/122)，p16INK4A蛋白、HPV均陽性45例，均陰性34例，僅HPV陽性15例，僅p16INK4A蛋白陽性28例。Spearman相關性分析發現HPV的感染與p16INK4A蛋白的表達具有相關性(r=0.628，P=0.0015)。

3 討 論

p16INK4A是一種與細胞周期有關的抑癌基因，它的抑癌作用主要是通過直接作用于細胞周期，調控細胞的生長和分化產生的〔6〕。有研究表明，p16INK4A在宮頸鱗癌和宮頸上皮內瘤樣病變組織中高表達，可能可以作為一種宮頸鱗癌早期篩查的生物學標記〔7〕。

HPV是一種DNA病毒，其持續感染是宮頸鱗癌和宮頸上皮內瘤樣病變發生的必要因素〔8，9〕。宮頸鱗癌的流行病學研究發現高危型HPV的感染是引起宮頸鱗癌的高危因素，而低危型引起宮頸鱗癌的概率相對高危型HPV小很多，其中HPV16是高危型HPV中最常見的致病亞型〔10〕。與本研究結果相同。

本研究顯示p16INK4A蛋白的表達可能可以提示HPV感染導致宮頸上皮細胞發生病變的程度，相對于HPV對宮頸上皮內病變的檢測敏感度，p16INK4A蛋白的表達更準確、敏感，且檢測方法相對簡單易操作。如果聯合使用p16INK4A蛋白標記檢測與HPV感染檢測結合可以做出較為準確的宮頸鱗癌早期診斷。

4 參考文獻

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