網織紅細胞參數對慢性病毒性肝炎肝纖維化的診斷價值

劉松堅

(廣州軍區廣州療養院，510515)

網織紅細胞參數對慢性病毒性肝炎肝纖維化的診斷價值

劉松堅

(廣州軍區廣州療養院，510515)

目的 探討肝炎患者的紅細胞分布寬度(RDW)、平均紅細胞體積(MCV)、網織紅細胞計數(RET#)、網織紅細胞百分率(RET%)、未成熟網織紅細胞比率(IRF)、低熒光網織紅細胞比率(LFR)、中熒光網織紅細胞比率(MFR)、高熒光網織紅細胞比率(HFR)、網織紅細胞血紅蛋白量(RET-HE)等血常規參數在肝纖維化診斷中的意義。方法 選擇乙型病毒性肝炎非肝硬化組和乙型病毒性肝炎肝硬化組患者128名作為討論對象。健康對照組由59名各項檢查結果均正常的成人組成。采用XE-5000型全自動血細胞計數儀檢測所有被測試者的血常規參數，同時對這些患者采用酶聯免疫法檢測其血清透明質酸(HA)和層粘蛋白(LN)等水平，研究上述實驗組各參數與對照組各參數之間的關系。結果 在乙型病毒性肝炎非硬化組與健康對照組比較中存在顯著性差異的是IRF、HFR、RET#、RET%這4項參數，在乙型病毒性肝炎肝硬化組與健康對照組比較中存在顯著性差異的是IRF、LRF、MFR、HFR、RET#、RET%，在乙型病毒性肝炎肝硬化組與乙型病毒性肝炎非肝硬化組的比較中存在顯著性差異的是IRF、RET#、RET%。RET#與HA存在顯著正相關，與PcⅢ存在正相關性。RET%與HA、PcⅢ存在顯著正相關，與Ⅳ.c均存在正相關，LN與5項血常規參數均不存在相關性。IRF與4項均不存在相關性。結論 網織紅計數相關參數在乙型病毒性肝炎非肝硬化和乙型病毒性肝炎肝硬化患者中可以在一定程度上反映肝臟纖維化的病變程度，可以作為一項無創輔助評定指標來用于乙型病毒性肝炎非肝硬化和乙型病毒性肝炎肝硬化患者的肝臟纖維化的診斷和定期臨床監測。

肝臟纖維化；血常規參數；網織紅細胞

在正常肝組織中，各種細胞及細胞外基質有精確的相對比例和特定的相對空間位置，通過細胞之間、細胞與細胞外基質之間的信號傳遞精確地調控著結構、功能和代謝狀態，成為一個相對穩定的微生態系統[1]。肝臟纖維化(hepatic fibrosis)是指肝細胞發生壞死及炎癥刺激時，由于肝臟內彌漫性細胞外基質(特別是膠原)形成和降解的平衡失調，導致肝臟內纖維結締組織異常增生的病理過程。肝臟纖維化不是一個獨立的疾病，許多慢性肝臟疾病均可引起肝纖維化。其形成是極其復雜的病理生理過程,有多種機制參與。已明確的有多種細胞因子,如轉化生長因子1(TGF1)、干擾素(IFN)、腫瘤壞死因子(TNF)等。基質金屬蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMP)的表達水平等均不同程度地參與肝纖維化的過程。肝臟纖維化是各種慢性肝病向肝硬變發展過程中的關鍵階段，它的診斷對防止肝硬化的發生有很重要的意義。據統計,全球約有3.5億人患慢性乙型肝炎,約1.7億人患慢性丙型肝炎。此類感染者中約20%～30%會發生肝纖維化[1]。

近年來,由于分子生物學技術的發展,新推出的與肝纖維化有關的指標達20余項,但尚沒有一項能單獨用于肝纖維化的診斷。明確診斷肝纖維化及嚴重程度分級的金標準仍然是肝臟活檢。但肝活檢系侵襲性檢查,又受穿刺量小及部位的局限,且在結果判定上會有誤差,也難以常規應用[1]。目前文獻報道較多且在歐洲普遍使用的Ⅲ型前膠原氨基肽(PⅢP)及血清透明脂酸(HA)在肝纖維化診斷中作為非創傷性的綜合診斷有重要的作用[2]。血常規參數方便快捷，若可以找到一組相關參數即可以作為臨床定期監測、早期發現纖維化的重要指標。本文旨在試圖尋找能夠提供肝臟纖維化有利證據的常規試驗指標,使之既能為臨床提供有利的判定肝臟纖維化的證據又能常規應用,方便臨床診斷。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 收集2010—2011年來我院住院及門診病毒性乙型肝炎患者共131例；平均年齡45歲；其中女性59例，男性72例。其中非肝硬化性患者57例，平均年齡40歲，女性23例，男性34例。乙肝肝硬化患者74例，平均年齡50歲，女性36例，男性38例。以上病例全部按照超聲波檢查及肝臟穿刺活檢明確診斷后選取。另外選取在我院進行體檢的健康查體者59例，平均年齡41歲，其中女性29例，男性30例，做為健康對照組，經檢測病例組與健康對照組在年齡、性別等方面差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 標本及其采集 病例組與健康對照組均于每日09：00前以無菌靜脈采血程序采外周血約4 mL，分別置于干燥管和EDTAK2的抗凝管中，用于肝纖四項及血常規的測定。

1.3 方法

1.3.1 XE-5000型全自動血細胞計數儀記數血常規參數血液標本將收集到的所有標本利用XE-5000型全自動血細胞計數儀，檢測其血常規紅細胞分布寬度(RDW)、平均紅細胞體積(MCV)、網織紅細胞計數(RET#)、網織紅細胞百分率(RET%)、未成熟網織紅細胞比率(IRF)、低熒光網織紅細胞比率(LFR)、中熒光網織紅細胞比率(MFR)、高熒光網織紅細胞比率(HFR)、網織紅細胞血紅蛋白量(RET-HE)等各項參數。記錄所得結果。

1.3.2 肝纖四項參數的檢測 所有標本均分別利用上海貝西生物科技生產的診斷試劑盒檢測其透明質酸(HA)、Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ.C)、層粘蛋白(LN)共四項血清學檢測肝臟纖維化項目。

1.4 統計學方法 實驗中的計量資料均以“均數±標準差”(Mean±SD)表示，采用SPSS 13.0統計軟件做相關分析,組間均數比較用方差分析，實驗組項目間的相關性采用線性線相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乙型病毒性肝炎肝硬化和乙型病毒性肝炎非硬化組患者的血常規參數與健康組比較結果(表1)

2.2 IRF、RET#、RET%分別與HA、PCⅢ、Ⅳ.c、LN進行的相關性分析(表2)

表1 各組血常規參數結果比較(Mean±SD)

續表1 各組血常規參數結果比較(Mean±SD)

表2 IRF、RET#、RET%分別與肝纖四項的相關性分析

2.3 IRF、RET#、RET%與HA、PcⅢ、Ⅳ.c的直線回歸方程對被測人群的血常規參數數據IRF、RET#、RET%和相應HA、LN、PcⅢ、Ⅳ.c數據進行直線回歸分析，分別得到IRF與HA，RET#與HA、PcⅢ、Ⅳ.c，RET%與HA、PcⅢ、Ⅳ.c的直線回歸方程。對所得方程進行假設檢驗證明它們之間存在直線關系(表3)。

表3 RET#、RET%與HA、PcⅢ、Ⅳ.c的直線回歸方程

3 討論

肝臟是人體最大的實質性臟器，與人體的消化系統、循環系統、免疫系統等相互交聯，肩負著重要而復雜的生理功能，嚴重肝臟的病變必然引起人體其他系統的改變。已有較多的研究發現，在慢性肝臟疾病特別是病毒性肝炎不同階段患者的血常規參數存在差異，提示這些血常規參數對于監測病毒性肝炎患者病情的發展具有一定的臨床意義[3]。

3.1 血常規參數RET#、RET%、IRF在肝臟纖維化診斷中的意義 由于肝纖維化患者在肝纖維化進程中常有脾功能亢進和肝功能減退的現象，RBC易被單核-巨噬細胞系統破壞及胃腸功能障礙等原因引起貧血，肝功能障礙時，RBC生成素前驅物質生成減少，也促使貧血的發生。肝病引起的貧血多為細胞性貧血，隨著肝纖維化病程遷延，貧血日益加重，二者呈正相關。王明山等[4]在研究實驗性苯中毒中發現，WBC下降比IRF和MRV更敏感，但影響WBC的因素比較多，有時不能很好的反映，如感染外傷、休克等白細胞會很快從邊緣池和儲存池釋放到外周血液中，從而使WBC出現較大的變化。Davis BH等[5]人研究認為ANC的缺陷在于當存在臨床或亞臨床感染時能夠引起ANC受抑，若未檢測IRF等指標，ANC下降可能導致醫師錯誤地認為骨髓活性尚未恢復。網織紅細胞作為反映骨髓造血功能的指標之一，國內外學者在貧血、放化療方面早有研究[6-7]。因此，本實驗通過對肝臟生理功能和病理轉化的觀察以及目前文獻[8]報道的情況，實驗從34項血常規參數中選擇了其中9項做為研究和驗證對象。

通過對實驗組及對照組的對比統計分析發現，RET#、RET%、IRF等3項血常規參數在乙型病毒性肝炎非肝硬化組和乙型病毒性肝炎肝硬化組比較中、乙型病毒性肝炎非肝硬化組和健康對照組比較中、乙型病毒性肝炎肝硬化組和健康對照組比較中均有顯著的差異。進一步探討發現，這3項血常規參數均與網織紅細胞有關，因此我們可以得出RET#、RET%、IRF在乙型病毒性肝炎非肝硬化組、乙型病毒性肝炎肝硬化組及健康人對照組兩兩之間均存在顯著性差異，且這些參數在乙型病毒性肝炎肝硬化組及健康人對照組之間的差異大于乙型病毒性肝炎非肝硬化組和健康對照組之間的差異。本次實驗結果得出的結論與林靜華等[9]所闡述的結論是一致。

3.2 血常規參數RET#、RET%、IRF與HA、PcⅢ、Ⅳ.c、LN的相關分析 肝纖維化是各種慢性肝病向肝硬變發展的必經階段。早期發現和診斷肝纖維化，并給予必要的藥物治療，對于延緩或阻斷患者病情向肝硬化進展至關重要。本實驗通過對129例乙型病毒性肝炎患者的血常規參數與血清中的HA、LN、PcⅢ、Ⅳ.c等的水平進行相關性分析發現RET#與HA存在顯著正相關，與PcⅢ存在正相關性。RET%與HA、PcⅢ存在顯著正相關，與Ⅳ.c均存在正相關，LN與5項血常規參數均不存在相關性。IRF與4項均不存在相關性。對于HA、LN、PcⅢ型膠原前體、Ⅳ.c這4項血清學檢測指標中LN與任何一項血常規參數都沒有明顯的相關性，分析其原因可能有以下幾點：①LN的檢測要求較高，該試劑盒的靈敏度和穩定性都不夠要求。②LN是基底膜的主要成分，LN含量與組織纖維化程度平行，與纖維增生性門脈高壓關系密切，而與網織紅細胞等本身相關性就不高。國外有學者報道網織紅細胞計數與脾功能亢進無明顯關系[10]。故網織紅細胞參數受其他因素影響較少,具有較強的特異性,并和紅系指標呈一致性變化。

根據相關性分析結果，我們進一步驗證了RET#、RET%與HA、PcⅢ、Ⅳ.c之間的直線關系，并分別求出了各自的直線回歸方程。

3.3 血常規參數RDW-SD在乙型病毒性肝炎非肝硬化組和乙型病毒性肝炎肝硬化組與健康對照組比較結果的討論 RDW-SD是反映紅細胞體積大小異質性的參數，RDW的升高常提示紅細胞壽命縮短、破壞增多。之前已有多篇文獻報道肯定了RDW-SD在肝臟纖維化診斷中的價值[3]。本次試驗選取的乙型病毒性肝炎非肝硬化組和乙型病毒性肝炎肝硬化組患者的RDW-SD與正常對照組比較沒有得到其與健康對照組有差異性的結論。通過對數據的分析發現慢性乙型病毒性肝炎非肝硬化組和乙型病毒性肝炎肝硬化組其RDW-SD統計得出的方差值均大于10。我們通過對數據進行對數處理后再對其進行統計學分析也無法確認其呈正態性分布特性。血常規參數RDW-SD在乙型病毒性肝炎非肝硬化組和乙型病毒性肝炎肝硬化組與健康對照組比較沒有得到與之前報道相應結果原因可能是：①參考文獻中所選取的人群與本實驗所選取的人群存在一定的差異性，導致結果不匹配。②參考文獻中所選取的標本數太少，參數RDW-SD在人群中不穩定變化輻度太大，失去了統計學規律。

4 結論

綜上實驗討論結果，我們可以認為網織紅細胞計數的相關參數在乙型病毒性肝炎非肝硬化和乙型病毒性肝炎肝硬化患者中可以在一定程度上反映肝臟纖維化的病變程度，可以作為一項無創輔助評定指標來用于乙型病毒性肝炎非肝硬化和乙型病毒性肝炎肝硬化患者的肝臟纖維化的診斷和定期臨床監測。

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Objective To probe into the significance of blood routine parameters in the diagnosis of liver fibrosis in terms of the hepatitis patients'RBC distribution w idth(RDW)，mean corpuscular volume(MCV)，reticulocyte count(RET#)，reticulocyte percentage(RET%)，immature reticulocyte ratio(IRF)，low reticulocyte ratio(LFR)，the moderate fluorescence reticulocyte ratio(MFR)，high fluorescence reticulocyte ratio(HFR)，and nets weave red blood cells hemoglobin(RET-HE).Methods 128 viral hepatitis(Hepatitis b)sufferers with and w ithout liver cirrhosis were chosen as the experimental subjects，and 59 healthy adults with normal check results make up the normal control group.XE-5000 full-automatic blood cell counter was adopted to detect all the blood test routine parameters，while enzyme-linked immunosorbent method was used to detect the serum hyaluronic acid(HA)and laminin(LN)，then the relationship of the parameters between the experimental group and the normal control group was studied.Results The parameters of IRF，HFR，RET#，and RET%shared great differences between the viral hepatitis(Hepatitis b)group w ithout liver cirrhosis and the control group.The parameters of IRF，LRF，MFR，HFR，RET#，and RET%shared great differences between the viral hepatitis(Hepatitis b)group with liver cirrhosis and the control group.The parameters of IRF，RET#，and RET%shared great differences between the viral hepatitis(Hepatitis b)group with liver cirrhosis and the viral hepatitis(Hepatitis b)group w ithout liver cirrhosis.RET#was positively related to HA and PcⅢ.RET%was positively related to HA，PcⅢ，andⅣ.c，LN was not related to 5 blood routine parameters.IRF was not related to 4 blood routine parameters.Conclusion Reticulocyte counting parameters can reflect to some degree the the lesion of liver fibrosis among the viral hepatitis(Hepatitis b)sufferers w ith and w ithout liver cirrhosis，which can be taken as a noninvasive supplementary index to diagnose and regularly monitor the liver fibrosis among the viral hepatitis(Hepatitis b)sufferers w ith and w ithout liver cirrhosis.

Liver fibrosis；Blood test routine parameters；Reticulocyte

1005-619X(2014)02-0100-03

2013-08-23)