銫137輻照對(duì)庫(kù)存紅細(xì)胞表面分子CD35、CD47的影響

趙學(xué)濤，楊從容，任曉亮，李 明，解曉元，巨紅妹(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院輸血科，河北 石家莊 050011)

·論著·

銫137輻照對(duì)庫(kù)存紅細(xì)胞表面分子CD35、CD47的影響

趙學(xué)濤，楊從容，任曉亮，李 明，解曉元，巨紅妹
(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院輸血科，河北 石家莊 050011)

目的探討銫137(137Cs)輻照對(duì)庫(kù)存紅細(xì)胞表面分子紅細(xì)胞1型補(bǔ)體受體(complement receptor type 1,CR1 or CD35) 及CD47分子的影響。方法采集60例健康獻(xiàn)血者靜脈血，制備去白細(xì)胞的懸浮紅細(xì)胞，并將其分為2組各30例，未輻照組常規(guī)4℃保存，輻照組采用25Gy137Cs輻照后4℃保存。分別于第0、7、14、28、35天收集2mL樣本。采用直標(biāo)法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)紅細(xì)胞表面分子CD35、CD47。結(jié)果輻照組和未輻照組紅細(xì)胞CD35、CD47的表達(dá)均隨著4℃保存時(shí)間的延長(zhǎng)而減少，2組的時(shí)點(diǎn)間以及組間·時(shí)點(diǎn)間交互作用比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論25Gy137Csγ射線輻照對(duì)保存期內(nèi)紅細(xì)胞CD35、CD47表面分子表達(dá)無(wú)明顯影響。

紅細(xì)胞;γ射線;受體,補(bǔ)體3b;抗原,CD47

輸血相關(guān)移植物抗宿主病(transfusion-associatedgraft-versus-hostdisease,TA-GVHD)是嚴(yán)重的輸血不良反應(yīng)之一，為減少其發(fā)生，現(xiàn)國(guó)內(nèi)外普遍采用γ射線輻照血液制品進(jìn)行預(yù)防[1]。另外，紅細(xì)胞的免疫作用已被大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，紅細(xì)胞表面分子紅細(xì)胞1型補(bǔ)體受體(complementreceptortype1,CR1orCD35)的表達(dá)與很多疾病的發(fā)病機(jī)制和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[2]。分化群47(clusterofdifferentiation,CD47)作為紅細(xì)胞自身標(biāo)志在紅細(xì)胞庫(kù)存損傷中扮演著重要角色。CD47抑制性受體信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(signalregulatoryproteinα,SIRPα)信號(hào)系統(tǒng)是老化紅細(xì)胞清除的重要理論之一[3]。然而，γ射線對(duì)紅細(xì)胞表面分子CD35、CD47的影響，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道甚少。為此，本研究觀察γ射線輻照后紅細(xì)胞表面分子CD35、CD47的變化規(guī)律，旨在為臨床規(guī)范使用輻照血液制品提供理論依據(jù)，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源：隨機(jī)選擇河北省血液中心提供的全血60單位(每個(gè)單位由1例健康獻(xiàn)血者提供，每單位含全血200mL及檸檬酸葡萄糖抗凝液保存液50mL)，制備去白細(xì)胞的懸浮紅細(xì)胞，分為輻照組與未輻照組各30例。未輻照組常規(guī)4℃保存；輻照組應(yīng)用德國(guó)GM2000(BIOBEAM,Germany)輻照儀，銫137(137Cs)γ射線為輻照源，輻照總劑量為25Gy，137Cs輻照后4℃保存。2組分別于保存前及保存7、14、21、28、35d采用無(wú)菌操作取樣2mL待測(cè)。

1.2 紅細(xì)胞CD35、CD47分子水平測(cè)定：將懸浮紅細(xì)胞2mL以3 500r/min離心5min,從紅細(xì)胞層中部吸取紅細(xì)胞10μL,用0.01mol/LPBS稀釋至1×105個(gè)/μL;各分子測(cè)定均設(shè)同型對(duì)照(陰性對(duì)照)管和測(cè)試管,在CD35、CD47測(cè)定的2管,分別加入異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanat，F(xiàn)ITC)標(biāo)記鼠IgG1κ同型對(duì)照(Biolegend公司產(chǎn)品)和鼠抗人CD35、CD47單克隆抗體各5μL，然后每管分別加入100μLPBS,室溫避光反應(yīng)30min;每管中加入500μLPBS搖勻,將紅細(xì)胞懸液移入1.5mL環(huán)氧樹(shù)脂管,2 500r/min離心5min;吸棄上清,沉淀中加入300μLPBS,重懸紅細(xì)胞,避光,即刻上機(jī)測(cè)試。采用CellQuest軟件分析數(shù)據(jù),測(cè)定結(jié)果以平均熒光強(qiáng)度比值(meanfluorescenceintensity,MFI)表示[4]。

2 結(jié) 果

2組保存前紅細(xì)胞CD35、CD47差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在4℃保存的條件下，2組紅細(xì)胞CD35、CD47隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低，其時(shí)點(diǎn)間和組間·時(shí)點(diǎn)間交互作用差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

GroupsCD350d7d14d21d28d35dNon?irradiation8．56±0．548．41±0．468．32±0．777．02±0．656．43±0．745．96±0．66Irradiation8．52±0．488．37±0．507．84±0．646．89±0．686．35±0．725．87±0．59GroupsF=0．768 P=0．385TimeF=1854．47 P=0．000Groups·timeF=11．459 P=0．001GroupsCD470d7d14d21d28d35dNon?irradiation9．62±0．659．54±0．738．78±0．818．53±0．768．01±0．677．32±0．69Irradiation9．54±0．628．91±0．568．20±0．777．56±0．697．23±0．346．73±0．48GroupsF=0．873 P=0．157TimeF=1191．385 P=0．000Groups·timeF=28．231 P=0．000

3 討 論

TA-GVHD是有嚴(yán)重免疫缺陷和免疫抑制患者在接受含有免疫活性的淋巴細(xì)胞輸血后出現(xiàn)的一種病理狀態(tài)[5]。盡管TA-GVHD發(fā)生率很低，但是病死率很高[6]。目前有效的預(yù)防措施之一是輸血前對(duì)血液制品進(jìn)行γ射線輻照。美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)建議，137Csγ射線照射最小劑量為25Gy。

國(guó)內(nèi)血站分離的紅細(xì)胞4℃保存期為35d。紅細(xì)胞表面存在著多種免疫物質(zhì)(如CD35)，對(duì)機(jī)體的免疫功能發(fā)揮著重要作用。研究證明紅細(xì)胞CD35的改變與機(jī)體許多疾病發(fā)病機(jī)制和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān);在抗腫瘤免疫監(jiān)控中也起著一定的作用[6-7]。本研究25Gy137Cs輻照組紅細(xì)胞表面分子CD35在7d逐漸下降，但與未輻照組比較差異不明顯，與李志強(qiáng)等[8]的結(jié)果基本一致。

CD47又稱整合素相關(guān)蛋白(integrin-associated protein,IAP),是一種廣泛表達(dá)的抗原,存在于所有組織的不同細(xì)胞上。它是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為5 000的膜糖蛋白,屬于免疫球蛋白超家族的成員。Oldenborg[9]首次報(bào)道了CD47作為紅細(xì)胞自身標(biāo)志的新觀點(diǎn),認(rèn)為CD47存在于正常紅細(xì)胞膜表面,正常紅細(xì)胞以CD47與巨噬細(xì)胞表面SIRPα結(jié)合,產(chǎn)生抑制性信號(hào),從而不被吞噬。巨噬細(xì)胞依靠CD47的存在或缺失來(lái)區(qū)別自身或異己。CD47缺失的紅細(xì)胞被視為“異物”,迅速在脾臟被巨噬細(xì)胞清除,從而發(fā)生溶血。Anniss等[10]發(fā)現(xiàn),濃縮紅細(xì)胞在4℃儲(chǔ)存14d后,CD47表達(dá)有少量進(jìn)行性減少,由此推測(cè)輸入體內(nèi)的紅細(xì)胞在循環(huán)中的迅速清除與此有關(guān),從另一個(gè)角度也表明CD47表達(dá)可能與紅細(xì)胞破壞有關(guān)。本研究輻照組紅細(xì)胞表面分子CD47與未輻照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

總之，本研究結(jié)果顯示，25Gy137Csγ射線輻照庫(kù)存紅細(xì)胞對(duì)紅細(xì)胞表面分子CD35、CD47表達(dá)沒(méi)有顯著影響。

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(本文編輯：趙麗潔)

EFFECTOF137CsRADIATIONONCD35ANDCD47OFSTORAGEERYTHROCYTES

ZHAOXuetao,YANGCongrong,RENXiaoliang,LIMing,XIEXiaoyuan,JUHongmei
(DepartmentofBloodTransfusion,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011，China)

ObjectiveToinvestigatetheeffectsof25Gy137Csradiationontheredcellsurfacemoleculecomplementreceptortype1(CD35)orCD35andCD47instorageerythrocytes.MethodsTheveinbloodsamplesofhealthydonorswerecollected,leukocyte-depletedsuspendederythrocyteswereprepared.Thespecimensof60caseswererandomlydividedintotwogroupswith30casesineachgroupandstoredat4℃,namelynon-irradiationgroup(controlgroup)andirradiationgroup.Thesuspendederythrocytes(2mL)wererespectivelycollectedonthe0,7th,14th,21st,28th,and35thdayafterthestorageoftwogroups.ThequantityofCD35andCD47oferythrocyteswereassessedbydirectcalibrationmethodusingflowcytometry.ResultsThequantityoferythrocytesCD35andCD47ofnon-irradiatedgroupandirradiationgroupdecreasedduringstorageat4℃.Thedifferencehadstatisticalsignificanceindifferentstoragetimesandinteractionsbetweengroupsandtime(P<0.01).However,intergroupdifferencewasofnosignificance(P>0.05).Conclusion25Gy137CsradiationdoesnothavesignificanteffectsontheCD35andCD47expression.

erythrocytes;gammarays;receptors,complement3b;antigens,CD47

2014-09-05；

2014-11-05

河北省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20090532)

趙學(xué)濤(1977-)，男，河北阜城人，河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院主管技師，醫(yī)學(xué)博士,從事輸血與腫瘤免疫研究。

R331.122

A

1007-3205(2014)12-1414-03

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.12.018