銫137輻照對庫存紅細胞表面分子CD35、CD47的影響

趙學濤，楊從容，任曉亮，李 明，解曉元，巨紅妹(河北醫科大學第四醫院輸血科，河北 石家莊 050011)

·論著·

銫137輻照對庫存紅細胞表面分子CD35、CD47的影響

趙學濤，楊從容，任曉亮，李 明，解曉元，巨紅妹
(河北醫科大學第四醫院輸血科，河北 石家莊 050011)

目的探討銫137(137Cs)輻照對庫存紅細胞表面分子紅細胞1型補體受體(complement receptor type 1,CR1 or CD35) 及CD47分子的影響。方法采集60例健康獻血者靜脈血，制備去白細胞的懸浮紅細胞，并將其分為2組各30例，未輻照組常規4℃保存，輻照組采用25Gy137Cs輻照后4℃保存。分別于第0、7、14、28、35天收集2mL樣本。采用直標法流式細胞術檢測紅細胞表面分子CD35、CD47。結果輻照組和未輻照組紅細胞CD35、CD47的表達均隨著4℃保存時間的延長而減少，2組的時點間以及組間·時點間交互作用比較差異均有統計學意義(P<0.01)，但組間差異無統計學意義(P>0.05)。結論25Gy137Csγ射線輻照對保存期內紅細胞CD35、CD47表面分子表達無明顯影響。

紅細胞;γ射線;受體,補體3b;抗原,CD47

輸血相關移植物抗宿主病(transfusion-associatedgraft-versus-hostdisease,TA-GVHD)是嚴重的輸血不良反應之一，為減少其發生，現國內外普遍采用γ射線輻照血液制品進行預防[1]。另外，紅細胞的免疫作用已被大量的實驗證實，紅細胞表面分子紅細胞1型補體受體(complementreceptortype1,CR1orCD35)的表達與很多疾病的發病機制和轉歸密切相關[2]。分化群47(clusterofdifferentiation,CD47)作為紅細胞自身標志在紅細胞庫存損傷中扮演著重要角色。CD47抑制性受體信號調節蛋白α(signalregulatoryproteinα,SIRPα)信號系統是老化紅細胞清除的重要理論之一[3]。然而，γ射線對紅細胞表面分子CD35、CD47的影響，國內外文獻報道甚少。為此，本研究觀察γ射線輻照后紅細胞表面分子CD35、CD47的變化規律，旨在為臨床規范使用輻照血液制品提供理論依據，報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源：隨機選擇河北省血液中心提供的全血60單位(每個單位由1例健康獻血者提供，每單位含全血200mL及檸檬酸葡萄糖抗凝液保存液50mL)，制備去白細胞的懸浮紅細胞，分為輻照組與未輻照組各30例。未輻照組常規4℃保存；輻照組應用德國GM2000(BIOBEAM,Germany)輻照儀，銫137(137Cs)γ射線為輻照源，輻照總劑量為25Gy，137Cs輻照后4℃保存。2組分別于保存前及保存7、14、21、28、35d采用無菌操作取樣2mL待測。

1.2 紅細胞CD35、CD47分子水平測定：將懸浮紅細胞2mL以3 500r/min離心5min,從紅細胞層中部吸取紅細胞10μL,用0.01mol/LPBS稀釋至1×105個/μL;各分子測定均設同型對照(陰性對照)管和測試管,在CD35、CD47測定的2管,分別加入異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanat，FITC)標記鼠IgG1κ同型對照(Biolegend公司產品)和鼠抗人CD35、CD47單克隆抗體各5μL，然后每管分別加入100μLPBS,室溫避光反應30min;每管中加入500μLPBS搖勻,將紅細胞懸液移入1.5mL環氧樹脂管,2 500r/min離心5min;吸棄上清,沉淀中加入300μLPBS,重懸紅細胞,避光,即刻上機測試。采用CellQuest軟件分析數據,測定結果以平均熒光強度比值(meanfluorescenceintensity,MFI)表示[4]。

2 結 果

2組保存前紅細胞CD35、CD47差異無統計學意義。在4℃保存的條件下，2組紅細胞CD35、CD47隨時間的延長逐漸降低，其時點間和組間·時點間交互作用差異均有統計學意義(P<0.01)，但組間差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

GroupsCD350d7d14d21d28d35dNon?irradiation8．56±0．548．41±0．468．32±0．777．02±0．656．43±0．745．96±0．66Irradiation8．52±0．488．37±0．507．84±0．646．89±0．686．35±0．725．87±0．59GroupsF=0．768 P=0．385TimeF=1854．47 P=0．000Groups·timeF=11．459 P=0．001GroupsCD470d7d14d21d28d35dNon?irradiation9．62±0．659．54±0．738．78±0．818．53±0．768．01±0．677．32±0．69Irradiation9．54±0．628．91±0．568．20±0．777．56±0．697．23±0．346．73±0．48GroupsF=0．873 P=0．157TimeF=1191．385 P=0．000Groups·timeF=28．231 P=0．000

3 討 論

TA-GVHD是有嚴重免疫缺陷和免疫抑制患者在接受含有免疫活性的淋巴細胞輸血后出現的一種病理狀態[5]。盡管TA-GVHD發生率很低，但是病死率很高[6]。目前有效的預防措施之一是輸血前對血液制品進行γ射線輻照。美國血庫協會建議，137Csγ射線照射最小劑量為25Gy。

國內血站分離的紅細胞4℃保存期為35d。紅細胞表面存在著多種免疫物質(如CD35)，對機體的免疫功能發揮著重要作用。研究證明紅細胞CD35的改變與機體許多疾病發病機制和轉歸密切相關;在抗腫瘤免疫監控中也起著一定的作用[6-7]。本研究25Gy137Cs輻照組紅細胞表面分子CD35在7d逐漸下降，但與未輻照組比較差異不明顯，與李志強等[8]的結果基本一致。

CD47又稱整合素相關蛋白(integrin-associated protein,IAP),是一種廣泛表達的抗原,存在于所有組織的不同細胞上。它是一個相對分子質量為5 000的膜糖蛋白,屬于免疫球蛋白超家族的成員。Oldenborg[9]首次報道了CD47作為紅細胞自身標志的新觀點,認為CD47存在于正常紅細胞膜表面,正常紅細胞以CD47與巨噬細胞表面SIRPα結合,產生抑制性信號,從而不被吞噬。巨噬細胞依靠CD47的存在或缺失來區別自身或異己。CD47缺失的紅細胞被視為“異物”,迅速在脾臟被巨噬細胞清除,從而發生溶血。Anniss等[10]發現,濃縮紅細胞在4℃儲存14d后,CD47表達有少量進行性減少,由此推測輸入體內的紅細胞在循環中的迅速清除與此有關,從另一個角度也表明CD47表達可能與紅細胞破壞有關。本研究輻照組紅細胞表面分子CD47與未輻照組相比差異無統計學意義。

總之，本研究結果顯示，25Gy137Csγ射線輻照庫存紅細胞對紅細胞表面分子CD35、CD47表達沒有顯著影響。

[1] PATIDAR GK,JOSHI A,MARWAHA N,et al.Serial assessment of biochemical changes in irradiated red blood cells[J].Transfus Apher Sci,2014,50(3):479-487.

[2] LAPIN ZJ,H?PPENER C,GELBARD HA,et al.Near-field quantification of complement receptor 1 (CR1/CD35) protein clustering in humanerythrocytes[J].J Neuroimmune Pharmacol,2012，7(3):539-543.

[3] BURGER P,HILARIUS-STOKMAN P,DE KORTE D,et al.CD47 functions as a molecular switch for erythrocyte phagocytosis[J].Blood,2012，119(23):5512-5521.

[4] 胡金川,田亞平,江朝光，等.直標法流式細胞術測定人紅細胞表面CD35水平的方法學研究[J].標記免疫分析與臨床,2008,15(6):396-399.

[5] SUNUL H,ERGUVEN N.Transfusion-associated graft-versus-host disease[J].Transfus Apher Sci,2013，49(2):331-333.

[6] ZIMMERMANN R,SCHOETZ AM,FRISCH A,et al.Influence of late irradiation on the in vitro RBC storage variables of leucoreduced RBCs in SAGM additive solution[J].Vox Sang,2011,100(3):279-284.

[7] CREHAN H,HOLTON P,WRAY S,et al.Complement receptor 1 (CR1) and Alzheimer's disease[J].Immunobiology,2012，217(2):244-250.

[8] 李志強,徐文皓,樂嘉宜,等.60Co輻照血紅細胞CR1分子數目的變化[J].河南診斷與治療雜志,2002,16(1):1-2.

[9] OLDENBORG PA.CD47:a cell surface glycoprotein which regulates multiple functions of hematopoietic cells in health and disease[J].ISRN Hematol,2013,2013:614619.

[10] ANNISS AM,SPARROW RL.Expression of CD47(integri-associated protein) decreases on red blood cells during storage[J].Transfus Apher Sci,2002,27(3):233-238.

(本文編輯：趙麗潔)

EFFECTOF137CsRADIATIONONCD35ANDCD47OFSTORAGEERYTHROCYTES

ZHAOXuetao,YANGCongrong,RENXiaoliang,LIMing,XIEXiaoyuan,JUHongmei
(DepartmentofBloodTransfusion,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011，China)

ObjectiveToinvestigatetheeffectsof25Gy137Csradiationontheredcellsurfacemoleculecomplementreceptortype1(CD35)orCD35andCD47instorageerythrocytes.MethodsTheveinbloodsamplesofhealthydonorswerecollected,leukocyte-depletedsuspendederythrocyteswereprepared.Thespecimensof60caseswererandomlydividedintotwogroupswith30casesineachgroupandstoredat4℃,namelynon-irradiationgroup(controlgroup)andirradiationgroup.Thesuspendederythrocytes(2mL)wererespectivelycollectedonthe0,7th,14th,21st,28th,and35thdayafterthestorageoftwogroups.ThequantityofCD35andCD47oferythrocyteswereassessedbydirectcalibrationmethodusingflowcytometry.ResultsThequantityoferythrocytesCD35andCD47ofnon-irradiatedgroupandirradiationgroupdecreasedduringstorageat4℃.Thedifferencehadstatisticalsignificanceindifferentstoragetimesandinteractionsbetweengroupsandtime(P<0.01).However,intergroupdifferencewasofnosignificance(P>0.05).Conclusion25Gy137CsradiationdoesnothavesignificanteffectsontheCD35andCD47expression.

erythrocytes;gammarays;receptors,complement3b;antigens,CD47

2014-09-05；

2014-11-05

河北省衛生廳醫學科學研究重點課題(20090532)

趙學濤(1977-)，男，河北阜城人，河北醫科大學第四醫院主管技師，醫學博士,從事輸血與腫瘤免疫研究。

R331.122

A

1007-3205(2014)12-1414-03

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.12.018