高效液相色譜法測定阿魏酸鈉氯化鈉注射液中阿魏酸鈉的含量

蔣艷霞，焦志斌，崔素梅，張慧蘭

（山西康寶生物制品股份有限公司，山西 長治046011）

早在1978年，四川省工業(yè)衛(wèi)生研究所就報道了中藥川芎素的有效成分是阿魏酸鈉（sodium ferulate，SF）。研究表明，阿魏酸鈉為非肽類內(nèi)皮素受體拮抗劑，作用機理復(fù)雜，具有多個靶向細(xì)胞組織，在改善血液流變學(xué)特征、降低血脂、增強免疫機能、治療心血管疾病等方面均有功效，并具有一定的鎮(zhèn)痛、解痙作用［1－2］。近年來，分子機理的研究表明細(xì)胞內(nèi)可以與阿魏酸鈉作用的蛋白酶很多［3－4］，其應(yīng)用潛力很大。因此阿魏酸鈉的含量測定研究十分重要。

作者采用高效液相色譜法測定阿魏酸鈉氯化鈉注射液中阿魏酸鈉的含量，擬為阿魏酸鈉的藥理研究和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 實驗

1．1 試劑與儀器

阿魏酸鈉（批號130118），純度99．7%，麗珠集團利民制藥廠；氯化鈉（批號01130501），天津海光藥業(yè)有限公司；枸櫞酸鈉（批號20121205），臺山新寧制藥有限公司；枸櫞酸（批號20120301），湖南爾康制藥股份有限公司；焦亞硫酸鈉（批號121018），國藥集團化學(xué)試劑有限公司；甲醇（批號12105027），色譜純，美國慧杰公司；醋酸（批號121108），分析純，天津北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；色譜用水為自制注射用水。

AE240型電子分析天平，梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫公司。

1．2 對照品與供試品

阿魏酸鈉對照品（批號773－9405），中國藥品生物制品檢定所。

3批阿魏酸鈉氯化鈉注射液供試品（批號分別為：130701，130702，130703），依據(jù)確定的處方及工藝，按中試規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)，包裝為玻璃瓶，規(guī)格為100mL，含阿魏酸鈉0．1g、氯化鈉0．83g，山西康寶生物制品股份有限公司。

1．3 色譜條件

C18色譜柱（150mm×4．6mm，5μm），填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相為水－甲醇－冰醋酸（69∶30∶1．5，體積比），波長為310nm，理論塔板數(shù)按阿魏酸鈉峰計算應(yīng)不低于2 000。

1．4 方法

精密量取2mL阿魏酸鈉（批號130118），置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。另精密稱取阿魏酸鈉對照品適量，加水制成濃度為20 μg·mL－1的對照品溶液。取上述兩種溶液各20μL，分別注入色譜儀，按外標(biāo)法計算阿魏酸鈉的含量。

1．5 分析測試

參照阿魏酸鈉氯化鈉注射液國家標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)的測定方法［5］，采用高效液相色譜法測定阿魏酸鈉氯化鈉注射液中阿魏酸鈉的含量。

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2 結(jié)果與討論

2．1 色譜條件的選擇

2．1．1 流動相的選擇

參照阿魏酸鈉原料藥標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢測的高效液相色譜方法［6］，以水－甲醇－冰醋酸（69∶30∶1．5，體積比）為基礎(chǔ)對流動相進行篩選，考察流動相配比對色譜分離的影響，結(jié)果見表1。

表1 流動相配比對分離效率的影響Tab．1 Effect of proportiono of mobile phase on separation efficiency

由表1可看出，隨有機相比例的增大，阿魏酸鈉保留時間提前。

另外還考察了磷酸鹽緩沖溶液的分離情況，采用甲醇∶pH3．5磷酸鹽緩沖溶液（30∶70，體積比）時，阿魏酸鈉的保留時間為22min，主要雜質(zhì)保留時間為20min。綜合考慮相鄰的降解物峰與阿魏酸鈉峰的分離情況，確定流動相為水－甲醇－冰醋酸（69∶30∶1．5，體積比），流速為1mL·min－1。

2．1．2 檢測波長的選擇

紫外光譜掃描得知，以水為溶劑的阿魏酸鈉在波長分別為213nm、287nm、310nm時的吸收系數(shù)十分接近，其中310nm波長下進行含量測定時的干擾較少。因此，選擇310nm作為檢測波長。

2．2 方法學(xué)考察

2．2．1 重復(fù)性實驗

精密量取阿魏酸鈉對照品適量，加水分別制成16 μg·mL－1、20μg·mL－1、24μg·mL－1的對照品溶液，各濃度連續(xù)進樣5次進行測定，計算平均峰面積及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。

表2 重復(fù)性實驗結(jié)果Tab．2 Results of repeatability experiment

2．2．2 穩(wěn)定性實驗

精密量取上述對照品溶液，避光放置，分別于0h、2h、4h、8h、24h取樣測定，計算平均峰面積及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性實驗結(jié)果Tab．3 Results of stability experiment

由表3可看出，3個濃度的對照品溶液在5個時間點（24h內(nèi)）測定的RSD在0．08%～0．10%之間。表明該方法的穩(wěn)定性良好。

2．2．3 回收率實驗

取上述阿魏酸鈉對照品溶液，按處方比例加入氯化鈉和輔料，用水稀釋至刻度，進行測定，計算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表4。

由表4可看出，阿魏酸鈉回收率在99．9%～100．8%之間。表明氯化鈉和輔料對阿魏酸鈉的含量測定沒有影響。

2．2．4 線性關(guān)系考察

精密稱取阿魏酸鈉對照品適量，配制成1．0mg·mL－1阿魏酸鈉水溶液作為貯備液。分別精密量取不同體積的貯備液于100mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，制得濃度分別為7．944μg·mL－1、11．92μg·mL－1、15．89μg·mL－1、19．86μg·mL－1、23．83μg·mL－1、31．78μg·mL－1、39．72μg·mL－1的阿魏酸鈉溶液。各吸取20μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法進行定 量 測 定，峰 面 積 依 次 為 646 940、990 242、1 330 078、1 686 090、2 035 564、2 731 828、3 425 585，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并擬合得到線性回歸方程：y＝0．0000142x＋0．6145，R2＝1。表明阿魏酸鈉濃度在7．944～39．72μg·mL－1的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

表4回收率實驗結(jié)果Tab．4 Results of recovery rate experiment

2．2．5 樣品含量測定

測定3批阿魏酸鈉氯化鈉注射液供試品中阿魏酸鈉的含量，分別為103．0%、102．6%、101．6%。

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法測定阿魏酸鈉氯化鈉注射液中阿魏酸鈉的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：阿魏酸鈉氯化鈉注射液中的氯化鈉和輔料對阿魏酸鈉的含量測定沒有影響；回收率在99．9%～100．8%之間；重復(fù)性和穩(wěn)定性良好；阿魏酸鈉濃度在7．944～39．72μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。表明高效液相色譜法適合阿魏酸鈉氯化鈉注射液中阿魏酸鈉含量的測定。

［1］趙琪，馬詠梅．阿魏酸鈉的藥理作用與臨床應(yīng)用［J］．中外健康文摘，2008，4（12）：66－67．

［2］趙保勝，桂海水，朱寅荻，等．阿魏化學(xué)成分、藥理作用及毒性研究進展［J］．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（17）：279－281．

［3］JIN Y，YAN E Z，F(xiàn)AN Y，et al．Sodium ferulate prevents amyloidbeta－induced neurotoxicity through suppression of p38MAPK and upregulation of ERK－1／2and Akt／protein kinase B in rat hippocampus［J］．Acta Pharmacol Sin，2005，26（8）：943－951．

［4］LIN C M，CHIU J H，WU I H，et al．Ferulic acid augments angiogenesis via VEGF，PDGF and HIF－1alpha［J］．The Journal of Nutritional Biochemistry，2010，21（7）：627－633．

［5］YBH16132005，阿魏酸鈉氯化鈉注射液［S］．

［6］國家藥典委員會．中國藥典［M］．2010年版，二部．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：410．