突變型Ras蛋白表達與食管癌復發的相關性分析

江 定

（新鄭市第二人民醫院腫瘤科，河南新鄭451100）

突變型Ras蛋白表達與食管癌復發的相關性分析

江 定

（新鄭市第二人民醫院腫瘤科，河南新鄭451100）

目的分析突變型Ras蛋白表達與食管癌復發的相關性。方法采用免疫組化S-P法檢測65例食管癌（復發組43例和未復發組22例）手術標本中突變型Ras蛋白的表達情況。結果復發組Ras蛋白陽性表達率是72.09%（31/43），未復發組是18.18%（4/22）（P＜0.05），且其表達與分化程度有關。結論突變型Ras蛋白檢測可作為預測食管癌術后是否復發的參考因素。

食管癌；術后復發；Ras蛋白

食管癌是消化系統常見的惡性腫瘤，發病率較高且容易復發。Ras蛋白在細胞的生長和分化中起重要的作用［1］。Ras基因突變，特別是第12、13和61密碼子部位的點突變可使細胞發生惡性轉化［1］。消化道腫瘤，尤其是食管癌，有較高的Ras基因突變發生率［1-2］。本研究對食管癌術后復發組與術后未復發組的突變型Ras基因測定，探討其與食管癌復發的關系，并為臨床提供早期干預的理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料入組我院外科收治的2003年1月至2009年12月手術后病理證實為食管癌的65例患者，年齡32～73歲，中位年齡55歲；男34例，女31例。通過進行電話復訪、信件回訪及門診復診等形式的回訪，以復查過胃鏡為標準，擇出未復發組22例，復發組43例。未復發組隨訪時間是5個月～4 a，中位隨訪時間22個月；復發組隨訪時間是3個月～3 a，中位隨訪時間14個月。未復發組早期15例，中晚期7例；高分化12例，中分化6例，低分化4例；鱗癌18例，腺癌4例。復發組早期32例，中晚期11例；高分化16例，中分化13例，低分化14例；鱗癌36例，腺癌7例。標本均經胃鏡或開放性手術獲得，所有患者均是保留部分食管，術后均行常規放療或化療。

1.2 Ras蛋白檢測方法將中性甲醛固定、石蠟包埋的組織制成 4～5 μm切片，常規脫蠟，浸入0.01mol·L-1、pH為6.0的枸櫞酸鹽緩沖液內，微波爐抗原修復10 min，溫度為92～98℃。用S-P法進行免疫組化染色。Ras試劑盒為北京中杉生物試劑公司提供的Zymed公司產品。

1.3 結果判定高倍鏡（×400）下隨機取10個視野共計數1 000個細胞中的ras蛋白陽性表達的百分數。結果判斷：未著色的細胞定為陰性細胞，細胞核呈棕黃色或黃色的定為陽性細胞。每次均設陽性和陰性對照。以已知陽性切片作陽性對照，陰性對照用PBS代替一抗。

1.4 統計學處理采用SPSS 12.0進行統計分析，計數資料比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

復發組Ras蛋白陽性表達率是72.09%（31/43），高于未復發組的18.18%（4/22），差異有統計學意義（P＜0.05）。在復發組與未復發組中，腫瘤細胞分化越差，Ras蛋白陽性表達水平越高（P＜0.05）（表1）。

表1 Ras蛋白在不同分化程度食管癌組織中的表達

3 討論

Ras基因在正常細胞中有重要作用，編碼相對分子質量為21 000的鳥苷酸結合蛋白，生化及遺傳學研究［3］提示，Ras蛋白在細胞增殖分化信號從激活的跨膜受體傳遞到下游蛋白激酶的過程中起作用。約有50%的結直腸癌及20%的非淋巴細胞性白血病有KRas、N-Ras基因點突變［4］。Ras基因在消化道腫瘤發生突變的頻率較高，特別是腸道腫瘤，其突變發生率為40%，Ras基因突變在消化道腫瘤癌變過程中起重要作用的觀點已被大多數學者所證實［1-2］。

本研究發現，復發組食管癌組織中Ras蛋白陽性表達率高于未復發組；此外，在復發組與未復發組中，腫瘤細胞分化越差，Ras蛋白的表達水平越高，這提示在食管癌的發生、發展過程中，Ras基因表達與食管癌的生物學行為密切相關。

腫瘤免疫學研究［5］表明，在腫瘤組織中，間質中抗體產生細胞主要依靠其產生的抗腫瘤抗體參與體液免疫，達到抑制腫瘤細胞生長的目的。研究［6］發現，在食管黏膜細胞癌變過程中，IgG產生細胞與腫瘤細胞的生物學行為關系密切，Ras基因的突變可通過抑制IgG產生細胞而降低局部體液免疫力，或IgG通過抑制Ras基因突變而達到抑制腫瘤細胞的腫瘤性生長的特性。因此，食管癌復發患者Ras基因突變，可能影響機體的免疫功能，從而造成食管癌的復發。

綜上所述，相對于食管癌細胞分化程度、腫瘤大小、侵襲能力而言，Ras蛋白陽性表達強度可以作為一個獨立的觀察指標，從分子水平上可以作為預測其是否復發的參考因素。

［1］ Máthé E.RASSF1A，the new guardian of mitosis［J］.Nat Genet，2004，36（2）：117-118.

［2］ Agathanggelou A，Cooper WN，Latif F.Role of the Ras-association domain family 1 tumor suppressor genei n human cancers［J］. Cancer Res，2005，65（9）：3497-3508.

［3］ Pretlow TP，Brasitus TA，Fulton NC，et al.K-ras mutations in putative preneoplastic lesions in human colon［J］.J Natl Cancer Inst，1993，85（24）：2004-2007.

［4］ Fearon ER.K-ras gene mutation as a pathogenetic and diagnostic marker in human cancer［J］.J Natl Cancer Inst，1993，85（24）：1978-1980.

［5］ Ioachim HL，Dorsett BH，Paluch E.The immune response at the tumor site inl ung carcinoma［J］.Cancer，1976，38（6）：2296 -2309.

［6］ 蘇蔚，趙衛星，付華民，等.食管癌P53、PCNA表達與局部體液免疫的關系［J］.癌癥，2000，19（2）：128-130.

Correlation of Mutated Ras Protein Expression with Recurrence in Esophagus Carcinoma

Jiang Ding
（Department of Oncology，the Second People's Hospital of Xinzheng，Xinzheng 451100，China）

ObjectiveTo investigate the correlation of Ras protein with recurrence in esophagus carcinoma.MethodsImmunohistochemistry S-P method was used to detect the mutated Ras protein expression in the 65 patients with undergone surgery for esophagus carcinoma（43 patients with recurrence and 22 patients without recurrence）.ResultsThe positive rate of mutated Ras protein was 72.09%（31/43）in the patients with recurrence，and was 18.18%（4/22）in the patients without recurrence（P＜0.05）.The expression of mutated Ras protein was related to differentiation.ConclusionMutated Ras protein may be refered as a factor for predicting the recurrence in esophagus carcinoma.

esophagus carcinoma；recurrence；Ras protein

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.02.005

R735.1

A

1673-5412（2014）02-0109-02

2012-03-20）

江定（1973-），男，主治醫師，主要從事腫瘤內科臨床工作。

E-mail：445990201@qq.com