CD90和VEGF在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

于 樂，丁雪貞，孫雅靜，高 原，魏 丹，萬學(xué)東

（河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南洛陽471003）

CD90和VEGF在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

于 樂，丁雪貞，孫雅靜，高 原，魏 丹，萬學(xué)東

（河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南洛陽471003）

目的研究CD90和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法利用免疫組化法檢測(cè)33例肝細(xì)胞癌手術(shù)切除標(biāo)本、25例癌旁組織標(biāo)本和20例正常肝臟組織標(biāo)本中CD90和VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果肝細(xì)胞癌組織中CD90、VEGF的陽性表達(dá)率分別為72.73%和81.82%，高于癌旁組織（48.00%和52.00%）和正常肝臟組織（0.00%和45.00%）（P＜0.05）。結(jié)論CD90和VEGF表達(dá)與肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

肝細(xì)胞癌；CD90；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

腫瘤干細(xì)胞對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥起了決定作用［1］。有研究［2］提出CD90是肝細(xì)胞癌干細(xì)胞的標(biāo)志物，在肝細(xì)胞癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中有重要意義。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前所知的作用最強(qiáng)的一種促血管生長(zhǎng)因子，在誘導(dǎo)腫瘤血管生成中起著重要作用［3］。作者應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)CD90、VEGF在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，探討兩者與肝細(xì)胞癌的發(fā)生以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集解放軍第150醫(yī)院2006年6月至2011年8月接受手術(shù)治療肝細(xì)胞癌患者術(shù)后存檔的石蠟標(biāo)本33例、癌旁組織標(biāo)本25例、正常肝臟存檔石蠟標(biāo)本20例，所有病例均有完整臨床資料。

1.2 試劑兔抗人CD90和兔抗人VEGF單克隆抗體（美國(guó)Bioss公司產(chǎn)品）、二步法免疫組化試劑盒（SP-0023）（美國(guó)Zymed公司產(chǎn)品均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。DAB顯色試劑盒（AR-0612）購自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司。其他試劑均為分析純。

1.3 CD90和VEGF檢測(cè)方法采用免疫組化法檢測(cè)不同肝臟組織標(biāo)本中CD90和VEGF的表達(dá)：石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，水浴法抗原修復(fù)，試劑盒A液封閉，一抗二抗結(jié)合，DAB顯色顯微鏡下觀察，自來水終止，蘇木素復(fù)染2 min，鹽酸乙醇分化10 s，自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。顯微鏡下觀察結(jié)果。

1.4 結(jié)果判斷用試劑盒中的陽性片作為陽性對(duì)照，PBS取代一抗作為陰性對(duì)照。細(xì)胞質(zhì)染色呈棕黃色視為陽性，染色強(qiáng)度：無染色為0分；淺黃色為1分；黃色為2分；棕黃或棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分率：無陽性細(xì)胞為0分；陽性細(xì)胞數(shù)＜25%為1分；陽性細(xì)胞數(shù)25%～＜50%為2分；50%～＜75%為3分；陽性細(xì)胞數(shù)≥75%為4分。2項(xiàng)之和：0分為（-）；1～2分為（+），3～4分為（++），5～7分為（+++），均為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

CD90陽性著色主要分布于細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒（圖1），肝細(xì)胞癌組織中CD90的陽性表達(dá)率為72.73%，高于癌旁組織（48.00%）和正常肝臟組織（0.00%）（P＜0.05）（表1）。VEGF蛋白陽性著色主要分布于細(xì)胞漿，呈棕黃色或棕褐色顆粒（圖2），肝細(xì)胞癌組織中VEGF的陽性表達(dá)率為81.82%，高于癌旁組織（52.00%）和正常肝臟組織（45.00%）（P＜0.05）（表2）。

圖1 CD90在正常肝臟組織（A）、癌旁組織（B）及肝細(xì)胞癌組織（C）中的表達(dá)（×200）

圖2 VEGF在正常肝臟組織（A）、癌旁組織（B）及肝細(xì)胞癌組織（C）中的表達(dá)（×200）

表1 CD90在不同肝臟組織中的表達(dá)

表2 VEGF在不同肝臟組織中的表達(dá)

3 討論

腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要先決條件是黏附分子介導(dǎo)的細(xì)胞黏附。CD90是一種細(xì)胞黏附分子免疫球蛋白，主要參與細(xì)胞之間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用。在肝臟的形成過程之中，CD90表達(dá)于肝臟干細(xì)胞或祖細(xì)胞表面，而在成人的肝臟中表達(dá)卻十分稀少［4］。目前，CD90已經(jīng)被認(rèn)為是肝細(xì)胞癌干細(xì)胞的表面標(biāo)志物。肝細(xì)胞癌干細(xì)胞標(biāo)志物大部分來源于肝細(xì)胞癌細(xì)胞系，而CD90在人肝細(xì)胞癌組織及肝細(xì)胞癌細(xì)胞系中的存在均已得到證實(shí)。本研究結(jié)果顯示，CD90在肝細(xì)胞癌組織中的陽性率為72.73%，在癌旁組織中的陽性率為48.00%，在正常肝組織中的陽性率為0.00%，其在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織及正常肝臟組織，表明CD90可能與肝細(xì)胞癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系，促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展。

VEGF是腫瘤血管生成過程中最重要的促血管生成因子，在誘導(dǎo)腫瘤血管生成、促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲以及轉(zhuǎn)移中起著重要作用［5］。研究［6-8］表明，VEGF在肝細(xì)胞癌組織中表達(dá)明顯增強(qiáng)。本研究結(jié)果顯示，VEGF在肝細(xì)胞癌組織中的陽性率為81.82%，在癌旁組織中的陽性率為52.00%，在正常肝組織中的陽性率為45.00%，其在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常肝臟組織，提示VEGF表達(dá)增高在肝細(xì)胞癌的生長(zhǎng)過程中起重要作用，并且與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，CD90及VEGF的異常表達(dá)可能與肝細(xì)胞癌組織的過快生長(zhǎng)、對(duì)周圍組織的侵襲破壞能力強(qiáng)、淋巴管或血行轉(zhuǎn)移早等存在密切關(guān)系。

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［3］ 王洪海，任寧，張輝，等.聯(lián)合檢測(cè)VEGF、PD-ECGF和PCNA表達(dá)預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)及預(yù)后［J］.中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2005，12（3）：448-451.

［4］ Rege TA，Hagood JS.Thy-1 as a regulator of cell-cell and cell-matrix interactions in axon regeneration，apoptosis，adhesion，migration，cancer，and fibrosis［J］.FASEB J，2006，20（8）：1045 -1054.

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Expressions of CD90 and VEGF in the Hepatocellular Carcinoma

Yu Le，Ding Xuezhen，Sun Yajing，Gao Yuan，Wei Dan，Wan Xuedong
（Medical College，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China）

ObjectiveTo investigate the expressions and clinical significance of CD90 and vascular endothelial growth factor（VEGF）in the hepatocellular carcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expressions of CD90 and VEGF in the 33 cases of hepatocellular carcinoma tissues，the 25 cases of paraneoplastic tissues and 20 cases of normal liver tissues.ResultsThe positive expression rate of CD90 and VEGF in the hepatocellular carcinoma tissues（72.73%and 81.82%）were higher than those in the paraneoplastic tissues（48.00% and 52.00%）and the normal liver tissues（0.00%and 45.00%）（P＜0.05）.ConclusionThe expressions of CD90 and VEGF are closely related to the canceration and development of hepatocellular carcinoma.

hepatocellular carcinoma；CD90；vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.02.003

R735.7；R730.23

A

1673-5412（2014）02-0102-03

2014-01-26）

河南科技大學(xué)大學(xué)生研究訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：2012194）；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：201210464020）

于樂（1991-），女，學(xué)士在讀，參與了肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制探討工作。E-mail：fishle2012@163.com

萬學(xué)東（1966-），男，博士，副教授，主要從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)與研究。E-mail：lywxd97@163.com