參紅補血顆粒薄層色譜鑒別研究

徐 巖，初洪波，于秀華，金 蕊，位 鴻，段 青，黃曉巍*

(1.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117；2.吉林大學，吉林 長春 130012；3.中國中醫科學院,北京 100700)

“參紅補血顆粒”是用于血虛證治療的中藥復方新藥，是在長春中醫藥大學院內制劑“參脈注射液”的臨床應用基礎上研制開發的．其處方由紅景天、紅參、黃精、白術、麥冬等五味中藥組成，具有益氣生血，養血安神的功效.庫頁紅景天分布于吉林和黑龍江，尤其吉林的長白山是其主要分布地．吉林也是紅參的主產地．紅參與紅景天配伍相得益彰，治療血虛證療效尤為突出．處方中紅景天、紅參為君，大補元氣，益氣生血；黃精、白術為臣，補氣養陰，健脾益腎；麥冬為佐，滋陰補血，養心安神[1]．現代研究表明，紅景天能促進機體骨髓有核細胞的增殖、分化和成熟，并能提高淋巴細胞的免疫活性且具有抗腫瘤作用，其主要有效成分為紅景天苷和多種黃酮苷及水溶性多糖[2-3]．紅參含有多種人參皂苷及多糖，有增強體液免疫、促進造血、抗腫瘤等作用[4]．此外，黃精、白術、麥冬均有很好的增強免疫，益氣滋陰的功效[5-7]．為了更好地控制參紅補血顆粒的質量，本研究對其質量標準進行研究，采用薄層色譜法[8]對紅景天、紅參、黃精、白術進行了鑒別．

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

CAMAG型薄層色譜成像儀(瑞士CAMAG公司)；CP225D型雙量程電子分析天平(德國 Sartoris公司)；KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；GZX-9240MBE型電熱鼓風干燥箱(上海博迅實業有限公司)；薄層板為青島海洋化工廠分廠生產及煙臺市化學工業研究所生產．

紅景天對照藥材(批號:121412-200907)；紅參對照藥材(批號:121045-200609)；黃精對照藥材(批號:121341-201002)；白術對照藥材(批號:120925-200805)；紅景天苷對照品(批號:110774-200206);人參皂苷Re對照品(批號:110754-201123);人參皂苷Rg1對照品(批號:110703-201027);人參皂苷Rb1對照品(批號:110704-201318))；以上對照藥材及對照品均購于中國食品藥品檢定研究院．參紅補血顆粒樣品1、樣品2、樣品3，批號分別為:20130901、20130902、20130903，均由長春中醫藥大學附屬醫院制劑中心提供．

1.2 紅景天的薄層鑒別

取本品5g，研細，加甲醇10ml，超聲處理30min，濾過，取續濾液，作為供試品溶液．同時按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含紅景天的陰性對照溶液．另取紅景天對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液．再取紅景天苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液．按照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述四種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6:3:1:1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏．供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，如圖1所示.

圖1 紅景天薄層鑒別

1.3 紅參的薄層鑒別

取本品5g，研細，加水1ml攪拌濕潤，加水飽和的正丁醇50ml，超聲處理30min，吸取上清液，加3倍量氨試液，搖勻，分層，取上層液，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液.按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含紅參的陰性對照溶液．另取紅參對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液．再取人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液．按照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰．供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，如圖2所示.

圖2 紅參薄層鑒別

1.4 黃精的薄層鑒別

取本品5g，研細，加70%乙醇20ml，加熱回流1h，抽濾，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，加正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液．同時按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含黃精的陰性對照溶液.另取黃精對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液．按照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10μl ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(5:2:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰．供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，如圖3所示.

圖3 黃精薄層鑒別

1.5 白術的薄層鑒別

取本品5g，研細，加正己烷10ml，超聲處理15min，濾過，取濾液作為供試品溶液．同時按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含白術的陰性對照溶液．另取白術對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液．按照薄層色譜法試驗，吸取上述新制備的三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰．供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，如圖4所示.

圖4 白術薄層鑒別

2 討論

2.1 上樣技術問題

上樣是薄層色譜分析操作最關鍵的一步，也是第一步．它直接關系到能否得到分離度好的薄層色譜．在進行上樣操作時，由于操作不當等原因，毛細管或注射器等上樣裝置可能會對薄層表面造成一定的機械性損傷，這將會對物質的定量分析結果帶來一定的影響．質量高、流程規范的上樣操作，對于樣品的定量及定性分析至關重要．此外，在選用溶劑時應盡可能地避免使用溶解度相對大的溶劑，同時盡可能地保證溶劑的粘度小，沸點適中．在實際應用中，由于中藥中含有許多并不十分明確的物質，同時又要保證其所含成分盡可能地全部得到分析處理，在實驗中使用最頻繁的溶劑還是甲醇和乙醇．而許多甲醇或乙醇的萃取液卻常常由于含有太多雜質而無法得到較高質量的薄層色譜，這是因為其萃取液還沒有經過預處理環節所致，所以對于中藥的薄層色譜鑒別實驗，樣品的預處理也是一個非常值得注意的步驟．

2.2 展開劑的選擇

在薄層鑒別中，對于同一種吸附薄層，展開劑極性越大，對化合物的展開能力越強，反之則弱．為防止某些被分離化合物斑點的拖尾，可以在展開劑中加入少量酸、堿等化合物．在展開劑中加入丙酮等中等極性的溶劑可使兩種互不混合的溶劑進行混溶，同時加快展速，并降低展開劑的粘度．

2.3 展開劑與顯色劑的使用問題

對于薄層色譜鑒別，展開劑的預飽和是非常重要的，最好在展開之前預飽和5～10min，這樣可以防止斑點的拖尾現象以及邊緣效應；其次，展開劑不可放置太久或者再次使用，否則會因有機溶劑不同程度的揮發而造成展開劑比例的改變，使薄層板出現假前沿；最后，噴顯色劑時不應太靠近薄層板，否則會因力度太大而將斑點噴花．

薄層板在經過上樣和展開劑展開操作后，有些樣品還需要用顯色劑進行顯色處理，如果需要用到氨水和碘蒸氣進行熏蒸處理，熏蒸的時間要足夠長，使之反應充分，直至顯色后再將其取出．如果要進行噴霧顯色，所壓縮的氣體要均勻．加熱顯色時需注意加熱的時間和溫度．有的成分加入試劑(如揮發油成分或甾醇類成分經香草醛硫酸、硫酸醋酐等試劑顯色)后，加熱溫度的高低、時間長短的不同或加熱后放置時間的不同，斑點的顯色都可能會隨之而發生改變．

3 結論

本研究參照《中國藥典》2010年版紅景天、紅參、黃精、白術薄層鑒別方法，同時查閱了大量相關文獻．在此基礎上，建立了上述四味藥材的薄層層析鑒別方法，方法簡便、可靠、重現性好．該方法能有效控制產品的內在質量，可作為參紅補血顆粒的質量控制標準．

參考文獻：

[1]黃曉巍,初洪波,位鴻.正交試驗優選參紅補血顆粒提取工藝[J].吉林中醫藥,2012,32(11):1152-1153.

[2]孫曉軍,趙慧,林杰.紅景天的藥理與制劑研究綜述[J].中國藥師,2005,8(5):415-516.

[3]馬莉.紅景天苷抗疲勞作用及其機制的實驗研究[D].上海:第二軍醫大學,2006.

[4]許海順,蔣劍平,徐攀,等.紅參多糖抗氧化活性的研究[J].浙江中醫藥大學學報,2011,35(6):909-912.

[5]雷震,楊光義,葉方.黃精多糖藥理作用及臨床應用研究概述[J].中國藥師,2012,15(1):114-116.

[6]陳曉萍,張長林.白術不同化學成分的藥理作用研究概況[J].中醫藥信息,2011,28(2):124-126.

[7]陳屏,徐東銘,雷軍.麥冬化學成分及藥理作用的研究現狀[J].長春中醫學院學報,2004,20(1):35-36.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部[M].北京:化學工業出版社,2010.