克拉霉素片含量不確定度的HPLC測量方法分析

麥煥章 旋桂香 李煒鳳 楊育輝

（番禺區中心醫院,廣東 廣州 511400）

克拉霉素片含量不確定度的HPLC測量方法分析

麥煥章 旋桂香 李煒鳳 楊育輝

（番禺區中心醫院,廣東 廣州 511400）

目的分析HPLC測量方法測定克拉霉素片含量不確定度的方法。方法評估和分析測定克拉霉素片各個環節的不確定度，指出影響不確定度的主要因素。結果得出影響測定環節各個變量不確定度，同時給出測定結果擴展不確定度以及置信水平。結論HPLC法測定克拉霉素片含量不確定度大概為1.6%。

克拉霉素片；含量；不確定度；HPLC法

克拉霉素片多用于臨床鼻咽、呼吸道、宮頸炎、肺炎支原體和皮膚軟組織感染的治療中,臨床多采用HPLC外標一點法測定克拉霉素片含量,本文分析評估了采用HPLC法測定克拉霉素片含量的不確定度,分析影響克拉霉素不確定度的相關因素,為臨床正確評價克拉霉素片不確定度提供參考意見。

1 測定方法

1.1 克拉霉素片含量不確定HPLC測量準備條件

實驗多采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑,流動相:磷酸鹽緩沖液-乙腈,柱溫為45 ℃,檢測波長210 nm,將克拉霉素峰值作為計算標準,理論板數要＞3000,拖尾因子＜2.0,確保克拉霉素峰值、相鄰雜峰分離度與要求相符。

1.2 配置對照品溶液

克拉霉素作為對照品,適量,將其置于50 mL的量瓶中,流動相溶解,定量稀釋,將其稀釋為0.35 mg/mL的溶液。

1.3 配置供試品溶液

取克拉霉素10片,0.25克/片,稱定,研磨,稱取適量研磨的細粉,將其置于100 mL的量瓶中,向量瓶中加入流動相,搖晃溶解,加水稀釋,用力搖勻并濾過,該溶液即為供試品溶液。

1.4 克拉霉素片含量不確定度的測定方法及數據分析

分別取對照品溶液和供試品溶液各20 μL,將兩種溶液分別注入相色譜儀,密切觀察并記錄兩種溶液的峰面積,結果見表1。

表1 實驗結果

計算公式如下:X=[（As×Vs×Wr×M×P） /（Ar×Ws×Vr×K ×10） ]×100%,其中,X為克拉霉素標示量,As是供試品溶液峰面積,Vs是樣品稀釋倍數,Wr是對照品稱樣量,M是10片克拉霉素重量,P是對照品純度,Ar是對照品溶液峰面積,Ws是供試品稱樣量, Vr是對照品稀釋倍數,K標示克拉霉素片劑標示量（0.25 g）。

2 克拉霉素片含量不確定度的量化分析

2.1 對照品引起的不確定度

由對照品溶液純度造成的克拉霉素片相對不確定度屬于B類,中國藥品生物制品檢定所提供純度為97.9%的克拉霉素對照品,在使用該對照品之前無需干燥處理。

測量過程中,因對照品稱量造成的克拉霉素片相對不確定度也是B類不確定度,使用雙量程電子分析稱,最大允許誤差為正負0.03 mg,所以,對照品稱量引起的相對不確定度為0.03/31/2=0.0173 mg。

由電子分析電平稱重復性引起的不確定度也是B類不確定度,電子分析天平允許誤差為正負0.05 mg,按照矩形分布,其不準確度為0.05/31/2=0.0289 mg,單次稱量的不確定度為（0.01732+0.02892）1/2=0.0337 mg。整個稱量的過程根據減重的方法進行稱量,最終得出不確定度為0.0477mg。

對照品稀釋造成的不確定度屬于B類不確定度,按照規定,A級50 mL容量瓶的體積允差加減0.05 mL,接下來可以依據三角分布相關性質得到不確定度[1]。

由容量瓶體積重復性引起的克拉霉素片含量不確定度屬A類,將50 mL量瓶加水稀釋至刻度,重復10次稱量,得到不確定度。

溫度引起的不確定是B類不確定度,20 ℃溫度下校準50 mL容量瓶,按照矩形分布,95%置信概率下,不確定度是6×2.1×10-4×50/（31/2×50）=7.27×10-4。

對照品溶液稀釋造成的不確定度由對照品稀釋、容量瓶體積重復性以及溫度引起的不確定共同絕對,計算所得的不確定為8.50×10-4。

2.2 供試品引起的不確定度

供試品引起的不確定主要包括供試品稱量引起的不確定度、供試品稀釋引起的不確定度、對照品溶液進樣重現性的不確定度、供試品溶液進樣重現性的不確定、平均片重稱量引起的不確定度引起的。其中,供試品稱量引起的不確定度包括電子分析天平校準不確定度、電子分析電平稱量重復性不確定度以及供試品雙樣稱量的相對不確定度。供試品稀釋引起的相對不確定度包括容量瓶體積重復性不確定度、溫差引起的不確定度以及供試品溶液稀釋引起的相對不確定度共同決定。計算方法如上。引起克拉霉素片含量不確定的因素及分析結果見表2。

表2 不確定度各分量分析結果

3 討 論

任何完整的藥品檢驗報告書中均應包含不確定度評定,因為在檢驗過程中,任何檢驗防范都會引起不確定度,而不確定度很大程度影響著監測結果[2]。通過本文不確定度的分析可知,利用HPLC法測定克拉霉素含片不確定度多來自稱量對照品、配置供試品溶液以及液相色譜儀等多個環節,在上述影響因素中,對照品及供試品溶液的色譜分析進樣環節不確定度在很大程度上影響著檢驗不確定的結果。本文研究表明,利用HPLC方法測定克拉霉素片含量的時候,要保證被測藥品相關參數和液相色譜儀技術性能指標項適合,并確保定期進行相色譜儀計量檢定和核查工作,保證液相色譜儀處于穩定狀態；另外,要選用精度較高的天平進行稱量,從各方面確保降低操作及人為因素造成的不利結果[3-4]。

總之,利用HPLC測量方法測量克拉霉素含量不確定的時候,要保證液相色譜儀各項性能指標正常,在測定過程中要核查各個環節,確保液相色譜儀工作于最佳狀態,以便確保克拉霉素片含量檢驗結果的客觀正確性。不能為了節約成本或方便操作等目的降低對照品及供試品取樣量,應從根本上杜絕人為因素或隨意操作等對克拉霉素片含量不確定度測量的影響,從而實現準確無誤的測量。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:153.

[2] 邢以文.硫酸慶大霉素片含量測定的不確定度評估[J].中國現代藥物應用,2011,2(12):67-68.

[3] 吳美芳.高效液相色譜法測定克拉霉素片的溶出度[J].中國藥師,2008,3(12):57-58.

[4] 饒毅,夏川川,周海濱,等.高效液相色譜法測定白芍總苷的不確定度分析[J].中國實驗方劑學雜志,2011,4(3):57-58.

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B

1671-8194（2014）25-0090-02