更年樂水丸的質量標準研究

2014-05-18 01:25:54周紅敏李亞萍張明昊

中國醫藥指南 2014年21期

周紅敏李亞萍張明昊*

（1 鄭州市第六人民醫院，河南鄭州 450061；2 鄭州市中醫院，河南鄭州450007；3 河南中醫學院基礎醫學院，河南鄭州450046）

更年樂水丸的質量標準研究

周紅敏1李亞萍2張明昊3*

（1 鄭州市第六人民醫院，河南鄭州 450061；2 鄭州市中醫院，河南鄭州450007；3 河南中醫學院基礎醫學院，河南鄭州450046）

目的建立更年樂水丸的質量控制方法。方法采用薄層色譜法對女貞子、淫羊藿進行鑒別，應用高效液相色譜法測定淫羊藿中的淫羊藿苷含量。結果TLC鑒別女貞子、淫羊藿方法簡便易行，斑點清晰，專屬性強；高效液相色譜法測定淫羊藿苷含量，平均回收率為94.17%，RSD為2.2%（n=6）。結論該方法合理，簡便，結果準確，可用于更年樂水丸的質量控制。

更年樂水丸；淫羊藿苷；薄層色譜法；高效液相色譜法

更年樂水丸是河南中醫學院自主研制的用于治療婦女更年期綜合征的中藥制劑，由淫羊藿、巴戟天、肉蓯蓉、女貞子、枸杞子、白芍、香附子、石菖蒲、合歡皮等11味中藥加工而成，具有養心養腎、調補沖任的功能[1]，可提高機體免疫力，總體調節神經-內分泌-免疫網絡系統，能夠全面改善圍絕經期女性出現的夜寐不安、心悸、耳鳴、烘熱汗出、煩躁易怒、腰背酸痛等癥狀。為了初步建立更年樂水丸的質量標準，本文對該方中淫羊藿、女貞子等2味中藥進行了薄層定性鑒別研究，并以淫羊藿苷為指標成分進行了含量測定研究。

1 儀器與試藥

DIONEX高效液相色譜儀購自美國；依利特C18色譜柱購自大連依利特分析儀器有限公司。淫羊藿苷對照品：中國藥品生物制品檢定所；批號：110737-200414。齊墩果酸對照品：購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，其他為分析純。

2 實驗內容

2.1 薄層鑒別[2]

2.1.1 淫羊藿的鑒別

取淫羊藿10 g，加乙醇50 mL，超聲10 min，殘渣加10 mL蒸餾水使之溶解，乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，殘渣加乙醇至5 mL，溶解后作為供試品溶液。另取本品加甲醇制成對照品溶液（0.5 mg/mL）。以上三種溶液各3 μL，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶1∶1∶1）為展開劑，在365 nm波長的紫外燈下檢視。供試品色譜顯暗紅色斑點。陰性無干擾，見圖1。

2.1.2 女貞子的鑒別

取本品10 g，加乙醚30 mL，超聲提取20 min，濾過，加乙醇稀釋至2 mL，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取齊墩果酸加乙醇制成對照品（1 mg/mL）。以薄層色譜法為依據進行試驗，吸取以上3種溶液，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，110 ℃加熱至斑點顯現清晰。在供試品色譜圖對照品相應的位置上出現顏色相同的斑點。陰性則無斑點顯現，見圖2。

2.2 淫羊藿苷的含量測定[3]

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

填充劑選擇十八烷基鍵合硅膠，甲醇-水（55∶45）為流動相，檢測波長設定為270 nm。理論塔板數：淫羊藿苷不低于1500，流速0.8 mL/min；柱溫30 ℃。

圖1 淫羊藿的薄層圖譜

圖2 女貞子薄層色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷4.9 mg，加甲醇溶解、稀釋，制成0.49 mg/mL的標準儲備液。

2.2.3 制備供試品溶液

精密稱取本品2 g，置索氏提取器中，加60 mL三氯甲烷脫脂后，殘渣加60 mL甲醇提取4 h，揮干甲醇，殘渣加乙醇定容至10 mL。作為供試品溶液。

2.2.4 線性關系

精密吸取0.2、0.5、1、2、3 mL標準儲備液注入5 mL量瓶中，以甲醇稀釋，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀進行測定。進樣量（mg）設為橫坐標，峰面積設為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程：Y=37.3X-1.4586（R2=0.9999），見圖3。

圖3 高效液相色譜

2.2.5 精密度試驗

精密吸取淫羊藿苷對照品溶液（0.098 mg/mL）10 μL，使用液相色譜儀進行測定。進行重復測定5次后，峰面積均值為34.91314，RSD=1.06%（n=5），說明有良好的精密度。

2.2.6 穩定性試驗

取本品2 g，按供試品溶液制備和測定項下進行操作。分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，峰面積均值為62.1958，RSD＝1.30%（n=6），24 h內穩定性良好。

2.2.7 重復性試驗

取本品2 g，共6份，進行重復性試驗。峰面積均值為62.9209，RSD＝4.2%（n=6），結果表明，重復性良好。

表1 加樣回收率結果（n=6）

2.2.8 加樣回收率試驗

精密稱取淫羊藿苷對照品10 mg加甲醇，使之溶解，作為標準儲備液。精密量取6份已知含量的水丸1 g，置索氏提取器中。三氯甲烷脫脂后，精密吸取標準儲備儲備液0.4 mL，分置上述索氏提取器中，加甲醇適量，提取4 h，濾液揮干，殘渣加10 mL蒸餾水使溶解，乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，揮干，殘渣加乙醇溶解，定容至5 mL，作為供試品溶液。測定其含量，回收率為94.17%，RSD為2.2%（n=6）。見表1，說明本法有良好的回收率。

2.2.9 測定法

精密吸取10 μL對照品溶液與10 μL樣品溶液，加入液相色譜儀，測定。

2.2.10 樣品含量測定

見表2。

本品每克含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）計，不得少于0.4 mg。

3 討論

祖國醫學認為，女子一生中生殖、生長、發育、衰老的全過程與腎有著密切的聯系，故有“女子以腎為先天”之說。圍絕經期女性歷經、帶、胎、產，屢耗氣血，主要累及心、肝、脾、腎，出現多臟腑功能紊亂，機體陰平陽秘的局面被破壞，從而變生諸癥。目前西醫常采用激素替代療法治療圍絕經期綜合征，但其有禁忌證和不良反應且潛在致癌。而中醫藥治療本病具有療效顯著、不良反應小等優點，在治療圍絕經期綜合征方面具有重要意義[4]。實驗所用制劑更年樂水丸是依據多年臨床經驗組方，經現代工藝加工而成，其中淫羊藿、巴戟天、肉蓯蓉等3味補腎陽之藥為君藥；女貞子、枸杞子等2味補肝腎陰之藥為臣藥，能有效改善圍絕經期女性的各種癥狀。相關研究表明[5，6]，淫羊藿可使心腦血管血流量增加，促進造血功能，而淫羊藿苷是淫羊藿的有效成分之一，故選擇淫羊藿苷作為控制本品質量的指標成分，從而能更好地控制產品質量。本文提供了更年樂水丸定性和定量的測定方法，為全面控制產品質量提供了依據。