FXYD5基因真核表達載體的構建及其功能的初步研究

王本極 潘嘉林 黃曉燕 施翔翔 程碧環 金勝威 楊德業

●論著

FXYD5基因真核表達載體的構建及其功能的初步研究

王本極 潘嘉林 黃曉燕 施翔翔 程碧環 金勝威 楊德業

目的構建大鼠離子通道相關蛋白（FXYD5）基因真核表達載體,研究其對大鼠胸主動脈平滑肌細胞（CRL-1444）的體外作用。方法以含FXYD5全長cDNA的pBluescript II KS（+/-）載體為模板，并用PCR方法擴增,將其連接于真核表達質粒pcDNA3．1（+），PCR、雙酶切和測序鑒定后，用脂質體包裹轉染大鼠胸主動脈細胞，轉染重組真核表達載體為實驗組（PF組），轉染空質粒PCDNA3．1（+）為陰性對照組（NC組）和未做處理的為空白對照組（BC組）。Real-time PCR定量檢測各組FXYD5的表達水平，并研究該基因對CRL-1444細胞膜鈉鉀泵（Na+-K+-ATPase）活性、細胞增殖能力、遷移力的影響。結果重組的真核表達載體pcDNA3．1（+）-FXYD5構建成功,PF組FXYD5的表達水平較BC組上調17．312倍（P＜0．05），PF組的細胞膜Na+-K+-ATPase活性高于BC組和NC組（均P＜0．05），細胞增殖能力和遷移力均高于NC組（均P＜0．05）。結論成功構建了真核表達載體pcDNA3．1（+）-FXYD5，并在CRL-1444細胞中使FXYD5基因的表達水平增加，且增強CRL-1444細胞膜的Na+-K+-ATPase活性、細胞增殖和遷移能力。

真核表達載體；血管平滑肌細胞；鈉鉀泵

近年的研究結果表明，高血壓病是一種遺傳易患性加環境誘導共同作用下導致的，特別是家族多發性高血壓病患者具有很強的遺傳傾向[1]，并且該類患者較無高血壓家族史的血壓正常高值血管內皮損傷更明顯[2]。FXYD蛋白家族最近被證明是一個組織特異性調節Na+-K+-ATPase的小跨膜蛋白[3]，近來Lubarski等[4]發現FXYD5和Na+-K+-ATPase的α1和β1亞單位共表達使鈉泵活性增加2倍。本實驗前期研究通過基因芯片篩查，發現自發性高血壓大鼠（SHR）組的該基因表達水平是Wistar大鼠（WKY）組的6.76%[5]。……