高效液相色譜法測定藤梨根中大黃素的含量*

滕 坤，于思文

（通化師范學院制藥與食品科學學院，吉林通化 134002）

高效液相色譜法測定藤梨根中大黃素的含量*

滕 坤，于思文

（通化師范學院制藥與食品科學學院，吉林通化 134002）

目的:建立測定藤梨根中大黃素含量的高效液相色譜方法.方法:采用高效液相色譜法測定.選用Agilent－C18色譜柱（250mm ×4.6mm，5μm）;流動相:甲醇 －0.1%磷酸水溶液（85:15）;檢測波長:254nm;流速:1.00mL·min－1;柱溫:室溫.結果:大黃素在0.0417～0.2088μg范圍內(nèi)線性關系良好，r=0.9992，平均加樣回收率為101.4%.結論:高效液相色譜法操作簡便，快速，準確，重現(xiàn)性好，適合藤梨根中大黃素含量的測定.

高效液相色譜法;藤梨根;大黃素

藤梨根為獼猴桃科獼猴桃的根.我國是主產(chǎn)區(qū)，主要分布于我國東北地區(qū)及河北、山西、山東、安徽、浙江、江西、河南、湖北、云南等地，朝鮮和日本也有分布.含熊果酸（ursolic acid）、齊墩果酸（oleanolic acid）、琥珀酸（succinicacid）、胡蘿卜甙（daucosterol）以及精氨酸、賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天門冬氨酸等，并富含 Fe、Cu、Mn、Se 等元素.具有清熱解毒，清熱利濕，祛風除濕，利尿止血，解毒消腫，止血的功效，適用于多種疾病的治療.藤梨根常被用于主治黃疸，消化不良，嘔吐，風濕痹痛，消化道癌腫，癰瘍瘡癤，跌打損傷，外傷出血，乳汁不下等.

大黃素，化學名稱為6－甲基－1，3，8－三羥基蒽醌，是從大黃屬、蓼屬、鼠李屬和番瀉葉等中藥中分離得到的活性成分.大黃素具有廣泛的藥理作用，如具有抗腫瘤活性，解痙、止咳作用，對心血管系統(tǒng)的作用，利尿作用，對組胺的作用，對LTB4的合成作用，瀉下作用等.近年來，對大黃素藥理作用機制進行的大量深入研究發(fā)現(xiàn)，大黃素藥理作用主要集中在抑制細胞增殖、抗炎、抑制肝臟和腎臟纖維化等方面.本文用高效液相色譜法測定藤梨根中大黃素的含量，為藤梨根的進一步研究奠定基礎.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient 1100型高效液相色譜儀（Aglient公司）;MP21001型電子天平（上海恒平科學儀器有限公司）;超聲波提取儀（昆山市超聲儀器有限公司）;容量瓶（5mL，10mL，50mL）;電熱套;量筒;蒸發(fā)皿;0.45μm 微孔濾膜;漏斗;濾紙.

1.2 試藥

藤梨根（購置于通化百泉中藥飲片有限公司，經(jīng)于俊林教授鑒定為軟棗獼猴桃的根）;0.1%磷酸水溶液;甲醇（分析純）;大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號:0756－200805）.

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Hypersil－C18色譜柱（250mm ×4.6mm，5μm）;流動相:甲醇－0.1%磷酸水溶液（85:15）;檢測波長:254nm;流速:1.00mL·min－1;柱溫:室溫.

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取大黃素對照品5.22mg，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取大黃素對照品2mL置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL含20.88μg的大黃素對照品溶液.

2.3 供試品溶液的制備

精密稱定藤梨根粉末6.0332g，精密加入甲醇50mL，稱定重量，放超聲波提取儀中超聲30min，放冷后補足重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液25mL致蒸發(fā)皿中蒸干，蒸干后的殘渣用少量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液.

2.4 線性關系的考察

精密吸取大黃素對照品溶液 2、4、6、8、10μL，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件分別進行分析，測定其峰面積積分值（表1），以峰面積積分值（A）與進樣量（X）進行線性回歸，得回歸方程為:A=2806.6X－1.4318，r=0.9992，結果表明，大黃素在0.0417 ～0.2088μg范圍內(nèi)與其色譜峰峰面積呈良好的線性關系（圖1）.

表1 大黃素的濃度、峰面積

圖1 大黃素標準曲線圖

2.5 精密度實驗

精密吸取對照品溶液15μL，按“2.1”項中的色譜條件進樣，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，大黃素峰面積RSD=1.0%，說明精密度良好.

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取對照品溶液 15μL，分別在 0、1、2、3、4h進樣，測定大黃素峰面積并記錄峰面積，結果顯示，樣品在4h內(nèi)基本穩(wěn)定，其RSD為0.9%.

2.7 重復性試驗

精密稱取已知含量的供試品溶液15μL，按“2.1”項中的色譜條件連續(xù)測定5次，計算大黃素含量，測得其RSD值為1.2%，表明本方法重現(xiàn)性良好.

表2 加樣回收率試驗結果

2.8 加樣回收率試驗

精密稱定已知含量的供試品5份，每份3g，適量加入對照品溶液，按照“供試品溶液的制備”項下方法處理，依照其方法測定，計算回收率（表2），大黃素的平均回收率為101.4%，RSD為1.3%.

2.9 樣品的測定

取購置于通化百泉中藥飲片有限公司的藤梨根樣品，按“供試品溶液的制備”項下方法制備溶液，并取對照品溶液，分別進樣測定，結果如圖2、圖3所示.計算樣品中大黃素的含量，結果測得，藤梨根中大黃素的含量為 6.30μg·g－1.

圖2 對照品溶液色譜圖

圖3 藤梨根大黃素樣品色譜圖

3 結論與討論

根據(jù)文獻報道的含大黃素制劑中大黃素的含量測定條件，單純甲醇與水作用為流動相，盡管也能得到較好地分離，但大黃素表現(xiàn)不穩(wěn)定.用0.1%的磷酸水溶液代替水可增強大黃素的穩(wěn)定性.本文對流動相比例進行了調(diào)整，選擇甲醇－0.1%磷酸水溶液（85:15）為流動相，檢測波長為 254nm，流速為1.00mL·min－1，柱溫為室溫，大黃素色譜峰分離良好.

本文建立了藤梨根中大黃素的含量測定方法，該法簡便，快速、準確，重現(xiàn)性好，為藤梨根及其復方的質(zhì)量標準研究提供一定的科學依據(jù)，對藤梨根中其他化合物的定量也提供了一定的參考.

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［4］李杰，張陸勇，江振洲.大黃素的藥理學研究近況［J］.藥學進展，2005，29（12）:540－544.

R931

A

1008－7974（2014）03－0042－02

2014－03－25

滕坤（1975－），女，碩士，副教授，制藥與食品科學學院副院長.

國家自然基金青年基金項目（31100254）.

（責任編輯:陳衍峰）