山楂、杭菊花、決明子煎劑對甲基硫氧嘧啶誘導(dǎo)小鼠動(dòng)脈硬化的保護(hù)作用研究*

宮汝淳，苗婷婷，丁錄軍，孟丹慧，楊 秀

（通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，吉林通化 134002）

山楂、杭菊花、決明子煎劑對甲基硫氧嘧啶誘導(dǎo)小鼠動(dòng)脈硬化的保護(hù)作用研究*

宮汝淳，苗婷婷，丁錄軍，孟丹慧，楊 秀

（通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，吉林通化 134002）

觀察山楂、杭菊花、決明子（SHJ）煎劑高、中、低劑量代茶灌胃對小鼠動(dòng)脈硬化（AS）模型的保護(hù)作用.用甲基硫氧嘧啶和動(dòng)物豬油造小鼠動(dòng)脈硬化模型，采用血象法分析檢測小鼠血清總膽固醇（TC）、血清甘油三脂（TG）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）的含量，觀察小鼠主動(dòng)脈弓血管的形態(tài)學(xué)變化.研究結(jié)果表明:與正常對照組比較，模型組小鼠血清HDL－C含量顯著減少，TG、TC、LDL－C顯著增加（p＜0.05）;與正常對照組比較，模型組血管壁增厚，脂肪堆積物增多.與模型組比較，山楂、杭菊花、決明子煎劑高、中劑量組小鼠血清HDL－C含量顯著增加，TC、TG、LDL－C含量顯著減少，對血管壁上脂肪的清除作用效果顯著.結(jié)論:山楂、杭菊花、決明子煎劑代茶灌胃對小鼠高血脂模型具有保護(hù)作用，并能清除殘留在血管壁上多余的脂肪堆積產(chǎn)物，加速脂肪物質(zhì)代謝，預(yù)防動(dòng)脈硬化的形成.

血清;動(dòng)脈硬化;小鼠

動(dòng)脈硬化（AS）是一種常見疾病，常累及心、腦血管等重要部位而導(dǎo)致嚴(yán)重后果.因其并發(fā)心、腦血管意外事件而死亡的比率占疾病死亡率的首位，故被稱為“頭號(hào)殺手”.近年來，中醫(yī)藥抗AS研究取得了一定進(jìn)展.目前已被證明有降脂作用的中藥:首烏、決明子、澤瀉、虎杖、柴胡、杜仲、金銀花等能抑制脂質(zhì)在腸道的吸收;澤瀉還能抑制膽固醇在體內(nèi)合成;澤瀉、首烏、黃精、山楂、靈芝等能促使血漿中脂蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)與脂質(zhì)的清除;柴胡、茵陳、大黃等可促進(jìn)脂質(zhì)從腸道排泄.這些中草藥是通過調(diào)整脂質(zhì)代謝的作用途徑，緩解脂質(zhì)代謝紊亂來達(dá)到降脂的目的.脂質(zhì)物沉積于動(dòng)脈內(nèi)膜是導(dǎo)致AS最主要的原因［1－3］，因此調(diào)整脂質(zhì)代謝是抗AS的關(guān)鍵.筆者通過研究山楂、杭菊花、決明子煎劑高、中、低劑量對甲基硫氧嘧啶誘導(dǎo)小鼠動(dòng)脈硬化的保護(hù)作用，以期為中草藥應(yīng)用于動(dòng)脈硬化的治療和預(yù)防提供理論參考.

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性健康小白鼠，體重（22±2）g，由長春高新經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供，合格證號(hào)2014－008.

1.2 主要試劑

動(dòng)物油（市售）;甲基硫氧嘧啶片，批號(hào)H44020367，廣州白云山光華制藥股份有限公司;總膽固醇測定試劑盒，批號(hào)2400079，廣州市希邁醫(yī)學(xué)診斷用品有限公司;甘油三酯測定試劑盒，批號(hào)2400184，四川省新成生物科技有限責(zé)任公司;高密度脂蛋白、低密度脂蛋白測定試劑盒，批號(hào)2400728，上海北加生化試劑有限公司.

1.3 儀器

徠卡冰凍切片機(jī):型號(hào)CM1950，北京悅昌行科技有限公司;生物顯微鏡:型號(hào)XSP21－01V，上海立光精密儀器有限公司;半自動(dòng)生化分析儀:型號(hào)AT－658PLUS型，成都一科儀器設(shè)備有限公司;臺(tái)式離心機(jī):型號(hào)GT101，北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:型號(hào)R502－2，西安智琦儀器儀表有限公司.

2 方法

2.1 山楂、杭菊花、決明子煎劑制備

山楂、杭菊花、決明子經(jīng)通化勁峰老百姓大藥房采購并由王力明藥劑師鑒定.山楂、杭菊花、決明子各100g，加1000mL水浸30min煮沸、并置于文火去掉濾液，反復(fù)3次，合并濾液至100mL，冷藏備用.每毫升含生藥3g.

2.2 動(dòng)物分組及給藥

60只小鼠隨機(jī)分為6組，即正常對照組，模型組，洛伐他丁陽性藥組以及山楂、杭菊子、決明子水煎劑高、中、低劑量組，每組10只，模型組按小鼠體重0.10mL/10g·d－1灌胃甲基硫氧嘧啶及動(dòng)物油（取豬油20g置于500mL燒杯中，在電爐上加熱融化，再加入甲基硫氧嘧啶1.0g，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙猓o藥質(zhì)量濃度為 0.0025g/10g·d－1;正常對照組灌胃等量蒸餾水;SHJ水煎劑高、中、低劑量組灌胃甲基硫氧嘧啶及動(dòng)物油同時(shí)按小鼠體重0.10mL/10g·d－1灌胃給予山楂、杭菊花、決明子煎劑，給藥質(zhì)量濃度為1.08g/10g·d－1、0.54g/10g·d－1、0.27g/10g·d－1;陽性藥物組灌胃甲基硫氧嘧啶及動(dòng)物油同時(shí)按0.0001g/10g·d－1灌胃洛伐他丁，飼養(yǎng)2周后，測定血脂水平，以 TC、TG、LDL－C顯著升高為標(biāo)準(zhǔn)，確定動(dòng)脈硬化造模成功.［4］

2.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS數(shù)據(jù)處理軟件，對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行個(gè)體因素與組間存在差異檢驗(yàn)，以P＜0.05為有顯著性差異.

3 結(jié)果

3.1 SHJ對小鼠血清總膽固醇含量的影響

藥物入血20d后，心臟取血1mL離心，以3500轉(zhuǎn)/min離心，15～20min，取上清液置半自動(dòng)生化分析儀測血清總膽固醇含量的變化，測定方法根據(jù)參考文獻(xiàn)［5－7］，結(jié)果見表 1.

表1 SHJ對小鼠血清總膽固醇含量的影響（n=10）

總膽固醇是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇之總和，是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，其血清濃度可作為脂代謝的指標(biāo)，總膽固醇高了，會(huì)在人體動(dòng)脈中形成硬化的板塊，隨著硬化板塊的增多，動(dòng)脈逐漸地變狹窄甚至受阻［8－9］.通過表1可以看出，模型組TC升高，與對照組比較顯著升高（P＜0.05），說明造模成立;SHJ灌胃實(shí)驗(yàn)組與模型組比較，具有顯著性差異（P＜0.05），SHJ灌胃實(shí)驗(yàn)組能有效抑制TC的升高，且作用與洛伐他丁相當(dāng).

3.2 SHJ煎劑對小鼠血清甘油三酯含量的影響

藥物入血20d后，心臟取血1mL離心，取上清液置半自動(dòng)生化分析儀測血清甘油三酯含量的變化，結(jié)果見表2.

表2 SHJ對小鼠血清甘油三酯含量的影響（n=10）

表2研究結(jié)果顯示，模型組TG升高，與對照組比較有極顯著性差異（P＜0.01），說明造模成立;SHJ灌胃實(shí)驗(yàn)組與模型組比較，高中劑量組能顯著降低TG水平（P＜0.05），且作用與洛伐他丁相當(dāng);低劑量組作用效果不存在顯著性差異.

3.3 SHJ煎劑對小鼠血清高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量的影響

藥物入血20d后，心臟取血1mL離心，取上清液置半自動(dòng)生化分析儀測小鼠血清高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量變化，結(jié)果見表3.

表3SHJ對小鼠血清（LDL－C）、（HDL－C）含量的影響（n=10）

從表3可以看出，模型組比正常對照組小鼠血清高密度脂蛋白（HDL－C）含量降低，有顯著差異（P＜0.05）;高、中劑量組和陽性藥組均比模型組有顯著升高（P＜0.05），表明SHJ煎劑高、中劑量有顯著抑制甲基硫氧嘧啶和動(dòng)物油誘導(dǎo)小鼠高密度脂蛋白降低的作用.與正常對照組比較，模型組低密度脂蛋白有極顯著升高（P＜0.01），表明甲基硫氧嘧啶誘導(dǎo)小鼠高血脂模型建立;SHJ煎劑灌胃實(shí)驗(yàn)組，高、中、低三個(gè)劑量組均能抑制LDL－C含量的升高，但作用不明顯（P＞0.05）.

3.4 SHJ對小鼠血管形態(tài)學(xué)的影響

小鼠心臟取血后，頸椎脫臼立即處死，剖腹分離腹主動(dòng)脈，并將腹主動(dòng)脈置于10%中性福爾馬林中固定，包埋劑包埋，冰凍切片機(jī)切5um厚切片，常規(guī)HE染色及Masson染色，鏡下觀察形態(tài)學(xué)改變，見圖A ～F.

模型組可見血管內(nèi)皮連續(xù)性破壞，管壁局部血管腔明顯突出，形成斑塊，并有壞死物質(zhì)堆積管壁，彈性組織不明顯，動(dòng)脈外膜變薄;SHJ煎劑灌胃實(shí)驗(yàn)組高劑量組管壁有少量堆積物，內(nèi)皮雖然有不同程度的凹陷，但清晰可見血管內(nèi)皮;中、低劑量組血管內(nèi)皮有脂肪物質(zhì)堆積.由圖A～F可見，甲基硫氧嘧啶和動(dòng)物油可造成動(dòng)脈血管粥樣硬化，與正常對照組比較，模型組造模成立，SHJ煎劑高劑量組能抑制高脂肪物質(zhì)殘留，加速脂肪物質(zhì)分解，能較好地預(yù)防和控制高血脂動(dòng)脈硬化癥.［10］

4 結(jié)論

動(dòng)脈粥樣硬化就是動(dòng)脈壁上沉積了一層像小米粥樣的脂類，使動(dòng)脈彈性減低、管腔變窄的病變.高血脂、高膽固醇亦是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的重要因子，甲基硫氧嘧啶和動(dòng)物油可誘導(dǎo)小鼠高血脂、高膽固醇，影響脂類物質(zhì)代謝，誘發(fā)動(dòng)脈硬化形成.山楂、杭菊花、決明子煎劑高、中、低劑量可不同程度抑制小鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量的升高;其作用主要通過離子介導(dǎo)控制外源性脂類吸收，包括輕瀉、緩瀉、植物固醇競爭脂化酶和多糖類與膽鹽結(jié)合而減少膽固醇吸收;抑制脂質(zhì)合成，尤其是抑制膽固醇合成限速酶——羥甲基戊二酰輔酶A還原酶，從而減少膽固醇的細(xì)胞內(nèi)合成;促進(jìn)脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和清除，影響脂質(zhì)的肝腸循環(huán)，加速其排泄.中草藥山楂、杭菊花、決明子煎劑代茶飲能夠有效抑制高血脂、高膽固醇引起的動(dòng)脈硬化，對動(dòng)脈硬化具有較好的預(yù)防和治療作用.

圖1 藥物對動(dòng)脈血管的影響

［1］檀戰(zhàn)山，李翠，何作云.中藥抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)急癥，2003（2）:71－72.

［2］楊尊彝.參附注射液治療急性冠脈綜合征的臨床療效［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009（24）:17－19.

［3］楊躍進(jìn).藥物洗脫支架在急性冠脈綜合征中應(yīng)用的思考［J］.心血管病學(xué)進(jìn)展，2006（3）:9.

［4］高振華，楊旭明，董平栓.急性冠脈綜合征患者血清MMP－9濃度檢測的臨床意義［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008（4）:12－14.

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R285

A

1008－7974（2014）03－0039－03

2014－05－19

宮汝淳（1965－），女，吉林通化人，碩士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師.

何曉燕（1972－），女，吉林通化人，碩士，教授.

（責(zé)任編輯:陳衍峰）