單麻葉千里光多糖的提取及含量測(cè)定*

秦汝蘭，王丹萍

（1.通化師范學(xué)院制藥與食品科學(xué)學(xué)院，吉林通化 134002;2.通化師范學(xué)院長(zhǎng)白山藥用植物研究實(shí)驗(yàn)室，吉林通化 134002;3.吉林省通化市園藝研究所，吉林通化 134002）

單麻葉千里光多糖的提取及含量測(cè)定*

秦汝蘭1，2，王丹萍3

（1.通化師范學(xué)院制藥與食品科學(xué)學(xué)院，吉林通化 134002;2.通化師范學(xué)院長(zhǎng)白山藥用植物研究實(shí)驗(yàn)室，吉林通化 134002;3.吉林省通化市園藝研究所，吉林通化 134002）

利用超聲波輔助技術(shù)從單麻葉千里光中提取多糖，苯酚－硫酸法顯色測(cè)定多糖含量.結(jié)果表明，單麻葉千里光中多糖平均含量為5.29%，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品在10～70μg·mL－1的濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=0.0079C+

0.0046（r=0.9993），加樣回收率為99.80%（n=6，RSD=0.137%）.采用超聲波輔助提取單麻葉千里光中的多糖，提取方法方便可行，得到的多糖含量較高，值得進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究

單麻葉千里光;多糖;苯酚－硫酸法;含量測(cè)定

R284.2

A

1008－7974（2014）03－0013－02

單麻葉千里光（Senecio cannabifolius var integrilifolius（Koidz.）Kitam），為菊科千里光屬多年生草本植物，別名單葉返魂草，其主要分布于我國(guó)東北的長(zhǎng)白山地區(qū)，具有散瘀、止血、理氣化痰、清熱解毒等功效，民間廣泛用于治療感冒、炎癥等癥狀.本研究對(duì)單麻葉千里光中多糖提取和含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，為單麻葉千里光資源的充分開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料、儀器與試劑

單麻葉千里光采自于修正藥業(yè)返魂草種植基地，經(jīng)通化師范學(xué)院制藥與食品科學(xué)學(xué)院于俊林教授鑒定為單麻葉千里光正品;UV－2600A型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限責(zé)任公司）;KQ－5200E超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）;電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）;石油醚、無(wú)水乙醇等試劑均為分析純.

1.2 試驗(yàn)方法

（1）單麻葉千里光多糖的提取與精制.取單麻葉千里光粉末10g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，加入石油醚200mL，回流提取60min，3次，棄去濾液，藥渣揮去溶劑，加水200mL，38℃條件下超聲提取30min，共3次，合并濾液，將濾液濃縮至50mL，加入氯仿:正丁醇（4:1）的混合溶液，2000rpm離心5min，取上清液，加無(wú)水乙醇，靜置過(guò)夜，濾過(guò).沉淀再加水溶解，加無(wú)水乙醇至醇含量為80%，靜置過(guò)夜，取沉淀分別用無(wú)水乙醇、丙酮依次洗滌3次，每次20mL，低溫烘干至恒重，所得物質(zhì)即為單麻葉千里光精制多糖.

（2）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制.取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品25mg，精密稱(chēng)定，于105℃干燥至恒重，置于250mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，搖勻，定容，即為0.1mg·mL－1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用.

（3）單麻葉千里光多糖溶液的配制.精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的單麻葉千里光多糖2.5mg，置于25mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，搖勻，定容，即為0.1mg·mL－1的單麻葉千里光多糖溶液.

（4）樣品溶液的配制.精密稱(chēng)取單麻葉千里光粉末200mg，3份，分別置于圓底燒瓶中，加入石油醚溶液，回流提取3次，每次60min，棄去濾液，藥渣揮去溶劑，加水20mL，38℃超聲提取30min，提取3次，合并提取液，置于250mL容量瓶中，定容，即得供試品溶液.

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液和單麻葉千里光多糖溶液各 1.0mL置于試管中，加 5%苯酚溶液1.5mL，搖勻，然后加入濃硫酸 6.0mL，搖勻，靜置5min后于40℃水浴中加熱30min，以蒸餾水為空白對(duì)照，在400～600nm波長(zhǎng)下進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液均在490nm處有最大吸收，因此檢測(cè)波長(zhǎng)確定為490nm.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL 分別置于干燥試管中，加入蒸餾水至1.0mL，再分別加入5%苯酚溶液1.5mL，搖勻，加入濃硫酸6.0mL，搖勻，靜置5min，置于水浴中40℃恒溫靜置30min，選用蒸餾水同法操作作為空白對(duì)照，分別于490nm處測(cè)定吸光度值.將吸光度值作為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為A=0.0079C+0.0046，r=0.9993，表明葡萄糖在 10 ～70μg·mL－1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表1.

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)

2.3 換算因子的測(cè)定

精密吸取單麻葉千里光多糖溶液1.00mL，于干燥試管中，按2.2項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算出多糖中葡萄糖濃度，按f=W/（DC）計(jì)算換算因子（W為多糖重量，C為多糖中葡萄糖的濃度，D為多糖的稀釋因子），測(cè)得換算因子f=1.14（n=3）.

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取單麻葉千里光粉末200mg，按1.2（4）項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度值，平行操作5次，計(jì)算RSD值為0.67%（n=5），結(jié)果表明儀器精密度良好.

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取單麻葉千里光粉末200mg，按1.2（4）項(xiàng)下操作，顯色后每隔0.5h測(cè)定其吸光度值，連續(xù)3h，計(jì)算RSD為1.06%（n=6），表明顯色后的供試品溶液在3h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取單麻葉千里光粉末200mg，6份，按1.2（4）項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度值，計(jì)算 RSD為1.42%（n=6），表明該方法重現(xiàn)性良好.

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的單麻葉千里光粉末200mg，6份，分別加入精制單麻葉千里光多糖5mg，按1.2（4）項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度值，計(jì)算平均回收率為99.80%，RSD=0.137%（n=6），見(jiàn)表2.

表2 加樣回收率試驗(yàn)（n=6）

2.8 單麻葉千里光多糖含量測(cè)定

精密吸取樣品溶液1.00mL，按2.2項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，代入回歸方程，計(jì)算出多糖中葡萄糖濃度C，按多糖含量%=（CDf×100）/W公式計(jì)算多糖，式中:C表示樣品溶液的葡萄糖的濃度，D表示樣品溶液的稀釋因子，f表示換算因子，W表示樣品的重量.通過(guò)測(cè)定，單麻葉千里光中多糖的平均含量5.29%，RSD=0.378%（n=3），見(jiàn)表3.

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 結(jié)論與討論

多糖具有抗腫瘤和免疫促進(jìn)、抗炎、抗病毒、抗凝血、降血糖等廣泛的生物學(xué)活性，近年來(lái)廣泛用于食品和藥品中，目前對(duì)單麻葉千里光多糖的研究較少，本試驗(yàn)經(jīng)超聲波輔助技術(shù)從單麻葉千里光中提取多糖，通過(guò)苯酚－硫酸法顯色后測(cè)定其多糖含量，經(jīng)計(jì)算單麻葉千里光中多糖含量為5.29%，試驗(yàn)結(jié)果表明，中藥單麻葉千里光中多糖含量較高，具有較好的開(kāi)發(fā)利用前景，但有關(guān)單麻葉千里光多糖的生物活性尚需進(jìn)一步的深入研究.

［1］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草［M］.上海:上海科技出版社，1999.

［2］吳斌，林文輝，高慧媛，等.麻葉千里光抗菌化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2005，36（10）:1447 －1450.

［3］馬鴻雁，王崢濤.單麻葉千里光的化學(xué)成分研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26（3）:246 －247.

［4］胡彥武，李婷婷.五味子藤莖中多糖的提取及含量測(cè)定［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（15）:6990 －6991.

［5］高淑云，馬亞?wèn)|.單麻葉千里光硒多糖及硒元素含量的測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（11）:2763 －2765.

2014－03－10

秦汝蘭（1980－），女，吉林通化人，在讀博士，講師.

（責(zé)任編輯:陳衍峰）