金黃散洗劑的制備及質量標準研究

朱春紅，李園，劉巧，林景，周小圓，蘇羽

（海南省皮膚病醫院藥劑科，海南 海口 570206）

·藥物與臨床·

金黃散洗劑的制備及質量標準研究

朱春紅，李園，劉巧，林景，周小圓，蘇羽

（海南省皮膚病醫院藥劑科，海南 海口 570206）

目的制備金黃散洗劑并建立金黃散洗劑的質量標準。方法將姜黃等中藥超微粉碎后加混懸劑制備成金黃散洗劑；采用薄層色譜法(TLC)對處方中黃柏、甘草和白芷進行定性鑒別；采用高效液相色譜法(HPLC)同時測定金黃散洗劑中姜黃素、大黃素和厚樸酚的含量。結果制備的金黃散洗劑微粒細膩均勻，沉降緩慢，穩定性好；在選定的薄層色譜條件下色譜斑點清楚，分離效果較好；姜黃素、大黃素和厚樸酚的質量濃度分別在17.98～179.82μg·ml-1(r=0.999 9)、11.40～114.00μg·ml-1(r=0.999 9)和7.08～70.80μg·ml-1(r=0.999 9)內，與峰面積呈良好的線性關系，平均回收率依次為101.66%、102.27%和102.40%，RSD依次為0.61%、0.87%和0.60%。結論本洗劑制備工藝簡便，所建立的質量標準簡單、準確，能有效地控制該制劑質量。

金黃散洗劑；質量標準；姜黃素；大黃素；厚樸酚

“如意金黃散”為明代陳實功《外科正宗》所載的瘍科要方，由姜黃、大黃、黃柏等十味中藥配伍組成，主要用于治療瘡瘍腫痛、跌打損傷、乳癰紅腫等病癥，亦可用于濕疹樣皮炎、膿皰瘡、單純皰疹等治療，臨床使用時需臨時調劑，使用極為不便，外敷時又易掉藥，影響臨床應用與藥效的發揮。為提高藥物療效和使用方便，在如意金散劑基礎上改變劑型制成金黃散洗劑，并對其質量標準進行了研究，為有效控制該制劑質量提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器LC-20AD HPLC液相色譜儀、SPD-20A型紫外檢測器(日本島津公司)；AL204 METTLER TOLEDO電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；HS6150D數控超聲清洗儀(天津恒奧儀器有限公司)。

1.2 材料金黃散洗劑(自制，批號20130520、20130521、20130522)；姜黃素(批號110823～201004)、大黃素(批號110756～200110)、厚樸酚(批號110729～200412)、白芷對照藥材(批號120945～201008)、甘草對照藥材(批號120904～201117)、黃柏對照藥材(批號12150-201105)，以上對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；黃原膠(江蘇神華藥業有限公司，批號130304)；色譜乙腈(Fisher公司)，其余試劑均為分析純，水為自制純化水。

2 方法

2.1 處方與制備

2.1.1 處方金黃散200 g(先將姜黃、大黃等10味中藥超微粉碎[1]，依《中國藥典》2010年版一部“如意金黃散”的處方制備散劑)、黃原膠5 g、乙醇200 g、苯酚10 g、丙二醇50 g、純化水適量，全量1 000 g。

2.1.2 制備取黃原膠加適量純化水制成黃原膠液。取金黃散、乙醇、苯酚、丙二醇及剩余量的水共研成糊狀，然后加入黃原膠液，攪拌均勻，即得[2]。

2.2 定性鑒別

2.2.1 黃柏鑒別取本品3 g，加甲醇10 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液濃縮至約1 ml，作為供試品溶液；按處方比例和制備工藝除去黃柏的陰性樣品，同法制成黃柏陰性對照溶液；另取黃柏對照藥材0.1 g，加甲醇5 ml，同法制成對照藥材溶液；再取鹽酸小檗堿對照品，用甲醇制得質量濃度為0.5 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤB)試驗，吸取上述供試溶液各1 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水(12:3:6:4:0.6)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。陰性樣品無干擾。

2.2.2 甘草鑒別取本品20 g，加三氯甲烷30 ml、鹽酸2 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣用1 ml乙醇溶解，制成供試品溶液；按處方比例和制備工藝除去甘草的陰性樣品，同法制成甘草陰性對照溶液；另取甘草次酸對照品，用無水乙醇得質量濃度為1.0 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤB)試驗，吸取上述供試溶液各1 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸(20:40:14:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液。在105℃加熱5 min。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。陰性樣品無干擾。

2.2.3 白芷鑒別取本品10 g，加乙醚20 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣用1 ml乙酸乙酯溶解，制成供試品溶液；按處方比例和制備工藝除去白芷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法操作，得白芷陰性對照溶液；另取白芷對照藥材0.5 g，加乙醚10 ml，浸漬1 h，時時振搖，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作為對照藥材溶液；再取歐前胡素對照品、異歐前胡素對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤB)試驗，吸取上述供試溶液各3 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)-乙醚(3：2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性樣品無干擾。

2.3 含量測定以高效液相色譜法同時測定該洗劑中姜黃素、大黃素和厚樸酚的含量。

2.3.1 色譜條件色譜柱：Wondasil TM C18柱(4.6 mm×150 mm，5.0μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸= 38：62；流速：1.0 ml/min；進樣量：20μl；檢測波長：254 nm。

2.3.2 溶液的制備

2.3.2.1 對照品溶液的制備分別精密稱取姜黃素9.10 mg(含量98.8%)、大黃素5.70 mg與厚樸酚3.54 mg，置10 ml量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得各個對照品溶液；分別精密量取上述對照品溶液各1 ml置于10 ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2.2 供試品溶液的制備取本品約5.0 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加入甲醇適量，冷浸1 h，超聲處理30 min，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.2.3 陰性對照溶液的制備按處方比例稱取除去厚樸、姜黃及大黃外的其他中藥，按金黃散洗劑制備方法制成陰性對照樣品，按“2.3.2.2”項的方法操作，即得。

2.3.3 方法學驗證

2.3.3.1 專屬性試驗取上述混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，分別按上述色譜條件進樣20 μl，記錄色譜圖。各組分峰分離度均符合要求，陰性樣品無干擾，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.3.2 線性關系考察依次精密吸取以上配好的標準品溶液0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml置10 ml的量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，取各濃度的單個對照品溶液20μl注入色譜儀，以各對照品面積(Y)對其質量濃度X(μg/ml)進行線性回歸，得回歸方程，結果見表1。

表1 各對照品線性關系考察及回歸方程

2.3.3.3 精密度試驗取“2.3.2.2”項供試品溶液，20μl進樣測定峰面積，重復6次。姜黃素、大黃素及厚樸酚峰面積的RSD分別為0.85%、1.22%、1.31% (n=6)，表明用本方法測定樣品，精密度較好。

2.3.3.4 穩定性試驗取“2.3.2.2”項下供試品溶液，分別在配制后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h測定，分別記錄姜黃素、大黃素及厚樸酚的峰面積，計算RSD分別為0.93%、1.01%、0.84%，在24 h內測定樣品穩定。

2.3.3.5 重復性試驗取6份供試品(20130522)按“2.3.2.2”項下處理，依法測定，并計算結果。姜黃素、大黃素及厚樸酚的含量分別為0.7131 mg/g、0.4182 mg/g、0.5984 mg/g，RSD分別為1.55%、0.89%和0.95%(n=6)。說明重現性較好。

2.3.3.6 回收率試驗取批號為20130522樣品6份，各2.5 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，并分別加入姜黃素儲備液(0.5930 mg/ml)、大黃素儲備液(0.3510 mg/ml)和厚樸酚儲備液(0.4980 mg/ml)各3 ml，按“2.3.2.2”項下方法處理，計算各成分的平均加樣回收率，見表2。

表2 回收率試驗結果(n=6)

2.3.4 樣品測定取三批樣品(批號為20130520，2030521，20130522)，依法測定，記錄峰面積，計算三種有效成分含量，結果見表3。

表3 樣品測定結果(n=3)

3 討論

在金黃散洗劑處方篩選時，曾分別選用黃原膠、卡波姆、羧甲基纖維素鈉、硅皂土為助懸劑，以沉降容積比和重新分散為評價指標對制得金黃散洗劑的穩定性進行比較，對比結果顯示以黃原膠為助懸劑制得的金黃散洗劑沉降緩慢，不結塊，易于分散，穩定性好，易于涂布。

在黃柏定性鑒別中，筆者曾對比了《中國藥典》[3]過柱和超聲這兩種供試品處理方式，結果差異不明顯，鑒于超聲處理方式較簡單，所以采用了后者。采用《中國藥典》方法以苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(12:3:6:3:1)為展開劑時，分離效果不好，后改用苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水(12:3:6:4:0.6)做展開劑，取得較滿意分離效果。

如意金黃散具有清熱解毒、消腫止痛之功效，歷版《中華人民共和國藥典》均予收載。現代藥理研究表明[4]，姜黃中的姜黃素、大黃中的大黃素、大黃素甲醚、厚樸中的厚樸酚等為如意金黃散中的主要活性成分。2010年版《中國藥典》僅規定了其中姜黃素的含量限度。為了全面的評價金黃散洗劑的質量，筆者建立了同時測定金黃散洗劑中姜黃素、大黃素和厚樸酚含量的方法，目前未見文獻報道。對于要同時測定的姜黃素、大黃素和厚樸酚，因其最大吸收波長相差較大[5]，利用全波長掃描最后確定在254 nm處三者的響應值相對較好，因此選擇254 nm波長作為檢測波長。

[1]羅剛,陳立庭,周晶.超微粉碎技術在中藥研究中的應用[J].現代藥物與臨床,2011,26(2):108-111.

[2]蘇石旺,盧戎,李燕麗,等.不同助懸劑對爐甘石雷佛奴爾洗劑穩定性的研究[J].今日藥學,2012,22(5):279-281.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:720.

[4]楊敏,蔣強富,許伯慧,等.HPLC法測定如意金黃散中5種活性成分的含量[J].中國藥房,2011,22(16):1511-1513.

[5]楊躍華,胡春麗,張洪霞,等.RP-HPLC法同時測定利膽排石片中5種有效成分的含量[J].沈陽藥科大學學報,2012,29(5):373-376.

Preparation of Jinhuangsan lotion and the establishment of its quality standard.

ZHU Chun-hong,LI Yuan,LIU

Qiao,LIN Jing,ZHOU Xiao-yuan,SU Yu.
Pharmacy Department,Skin Disease Hospital of Hainan Province,Haikou 570206,Hainan,CHINA

ObjectiveTo prepare Jinhuangsan lotion and to establish its quality standard.MethodsCurcumae longae rhizoma and other traditional Chinese medicines were ultrafine pulverized,and the suspension was used to prepare Jinhuangsan lotion.TLC was used to identify Phellodendri Chinensis cortex,Glycyrrhiza uralensis and Angelica dahurica in the prescription.HPLC was used to simultaneously determine the concentration of curcumin, emodin and magnolol.ResultsJinhuangsan lotion showed delicate uniform,slow subsidence and good stability. The chromatographic spots were clear and had good separation effect in the selected TLC conditions.The concentration of curcumin,emodin and magnolol were 17.98～179.82μg·ml-1(r=0.9999),11.40～114.00μg·ml-1(r=0.9999)and 7.08～70.80μg·ml-1(r=0.9999)respectively.They all showed a good linear relationship with the peak area.The average recovery rates were 101.66%,102.27%and 102.40%,with RSD of 0.61%,0.87%and 0.60%,respectively.ConclusionIt was easy to prepare Jinhuangsan lotion with a simple and accurate quality standard.

Jinhuangsan lotion;Quality standard;Curcumin;Emodin;Magnolol

R289

A

1003—6350（2014）17—2552—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.17.0997

2014-05-27)

海南省衛生廳科研課題（編號：瓊衛2012PT-86）

李園。E-mail：liyuan19832012@163.com