慢性非細菌性前列腺炎患者前列腺液中IL-6和IL-22水平的研究

王成榮，卞廷松，史兵偉，談小林，楊凱

(1.南京中醫藥大學，江蘇南京 210046；2.常州市中醫醫院男科，江蘇常州 213003；3.常州市中醫醫院檢驗科，江蘇常州 213003)

·論著·

慢性非細菌性前列腺炎患者前列腺液中IL-6和IL-22水平的研究

王成榮1，卞廷松2，史兵偉3，談小林2，楊凱1

(1.南京中醫藥大學，江蘇南京 210046；2.常州市中醫醫院男科，江蘇常州 213003；3.常州市中醫醫院檢驗科，江蘇常州 213003)

目的比較慢性非細菌性前列腺炎(CAP)患者與正常人前列腺液(EPS)中細胞因子IL-6和IL-22的水平。方法選擇24例CAP患者為實驗組和10例健康人為對照組，分別取兩組受試者的EPS，采用ELISA法檢測其IL-6和IL-22水平。結果實驗組IL-6值11.65 pg/ml(4.42～17.78 pg/ml)，IL-22值(8.64±2.58)pg/ml；對照組IL-6值3.52 pg/ml(2.76～8.32 pg/ml)，IL-22值(9.31±2.26)pg/ml。實驗組IL-6水平顯著高于對照組(P＜0.01)，但兩組之間的IL-22水平差異無統計學意義(P＞0.05)。結論IL-6可能與CAP之間存在一定的關系，IL-6可能具有調節前列腺局部免疫反應的作用；而IL-22與CAP之間無明顯聯系，我們推測IL-22可能不參與前列腺的局部免疫反應。

慢性非細菌性前列腺炎；IL-6；IL-22

慢性非細菌性前列腺炎(Chronic abacterial prostatitis，CAP)是泌尿男性科常見病和多發病，其對男性患者的生活質量以及精神有著較大影響。目前國內外研究者對其病因、發病機制的認識還略顯不足，國內外諸多研究已表明炎癥因子與慢性非細菌性前列腺炎之間有著較為密切的關系[1-2]。本實驗通過比較CAP患者與正常人前列腺液(EPS)中細胞因子IL-6、IL-22的水平，探討IL-6、IL-22與CAP之間的關系，旨為在臨床泌尿男性科醫生對于此病的診斷、治療及預后提供一些理論依據，以便更好地服務臨床，服務患者。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2009年7月至2011年1月來南京中醫藥大學附屬常州市中醫醫院男科門診就診的CAP患者24例為實驗組，年齡最小20歲，最大47歲，平均28.8歲，選擇正常人10例作為對照組，年齡最小27歲，最大40歲，平均30.7歲。

1.1.1 診斷標準參照吳階平主編的《吳階平泌尿外科學》制訂。①癥狀：不同程度的尿頻、尿急、尿痛、尿不盡感，尿道灼熱，于晨起、尿末或大便時尿道偶有少量白色分泌物流出，會陰部、外生殖器區、下腹部、恥骨上區、腰骶及肛門周圍墜脹、疼痛；②前列腺觸診：前列腺表面不平或不對稱；質地不均勻，可觸及炎性結節；有局限性壓痛；③下尿路兩杯法細菌培養陰性，EPS鏡檢：卵磷脂小體減少或消失。凡具備①～③中任何一項即可確診。

1.1.2 納入標準①符合上述診斷標準；②病程≥3個月者；③年齡18～50歲。

1.1.3 排除標準①年齡在18歲以下和50歲以上者；②有良性前列腺增生癥、前列腺腫瘤、尿路疾病及嚴重神經官能癥患者；③合并有心血管、腦血管、肝腎和造血系統等嚴重原發性疾病以及精神病患者；④急性前列腺炎以及特異性前列腺炎患者；⑤離心尿白細胞(WBC)＞5個/HP；⑥以局部疼痛為主要表現的患者應注意排除下腹、會陰、腰骶等部位的其他病變，如輸尿管結石、精索靜脈曲張等。

1.2 標本的收集與保存先用新潔爾滅消毒尿道外口，然后讓患者取膝胸位，醫生經直腸按摩采集前列腺液標本，收集于無菌的痰培養皿中，最后移于1.5 ml離心管中，-80℃冷凍保存。

1.3 指標檢測采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測前列腺液中IL-6、IL-22的濃度。試劑分別為人白介素-6(IL-6)，人白介素-22(IL-22)ELISA試劑盒，均購自上海西唐生物科技有限公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人IL-22/抗人IL-6單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的IL-22/IL-6與單抗結合，加入生物素化的抗人IL-22/抗人IL-6，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在450 nm處測OD值，IL-22和IL-6濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線分別求出標本中IL-22以及IL-6濃度。

1.4.2 試劑盒組成(1)酶標板；(2)酶標抗體工作液；(3)0×標本稀釋液；(4)20×濃縮洗滌液；(5)標準品；(6)底物工作液；(7)第一抗體工作液；(8)終止液。

1.4.3 試劑的準備①10×標本稀釋液用蒸餾水作1：10倍稀釋。②標準品液配制：使用前加入2 ml蒸餾水混勻，IL-6配成10 ng/ml的溶液(IL-22配成20 ng/ml的溶液)。取8個1.5 ml離心管，第一管加標本稀釋液900 μl，第二至第八管加入標本稀釋液500 μl。在第一管中加入20 ng/ml的標準品溶液100 μl置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500 μl，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500 μl棄去。第八管為空白對照。③洗滌液：用重蒸水1：20稀釋。

1.4.4 檢測程序①加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100 μl，將反應板充分混勻后置37℃40 min。②洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌5次，向濾紙上印干。③每孔加入蒸餾水和第一抗體工作液各50 μl (空白除外)。將反應板充分混勻后置37℃20 min。④洗板：同前。⑤每孔加酶標抗體工作液100 μl。將反應板置37℃10 min。⑥洗板：同前。⑦每孔加入底物工作液100 μl，置37℃暗處反應15 min。⑧每孔加入100 μl終止液混勻。⑨30 min內用酶標儀在450 nm處測吸光值。

1.4.5 結果計算與判斷所有OD值減除空白值后再行計算。IL-6以標準品1 000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0(pg/ml)為橫坐標，OD值為縱坐標[(IL-22以標準品2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.2、0(pg/ml)為橫坐標，OD值為縱坐標]，使用軟件作圖，畫出標準曲線。最后根據樣品OD值計算出相應含量。

1.5 統計學方法所有數據均使用SASS19.0軟件進行統計學處理，計量資料正態數據以均數±標準差()表示，其組間比較采用成組t檢驗，偏態數據以M(P25～P75)表示，其組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

與對照組比較，實驗組EPS中的的IL-6水平顯著高于對照組，差異有顯著統計學意義(P＜0.01)，而IL-22水平則低于對照組，但差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組受試者的EPS中IL-6和IL-22水平比較(pg/ml，)

表1 兩組受試者的EPS中IL-6和IL-22水平比較(pg/ml，)

3 討論

CP患者的EPS或精液中可以出現某些細胞因子水平的變化，EPS中細胞因子水平與慢性前列腺炎有一定的相關性，這些細胞因子的變化可以更早、更準確地體現前列腺的炎癥狀況。IL-6是機體許多細胞產生的一種具有多種生物學活性的細胞因子,是機體內復雜細胞因子網絡中的重要成員。體內主要由巨噬細胞、血管內皮細胞、成纖維細胞、角質細胞核T細胞等產生IL-6。IL-6主要通過自分泌或旁分泌產生，其能增強T細胞功能和IL-2的產生，具有免疫激活作用，可誘導中性粒細胞浸潤到前列腺組織內，使T、B細胞及NK細胞廣泛激活，促使中性粒細胞釋放溶酶體酶，從而加劇局部炎癥細胞浸潤，促進炎癥的形成[3]。IL-6的生物學功能在正常情況下調節免疫應答,然而在病理情況下，其濃度的升高可引起免疫病理損傷。因此，患者體內IL-6的水平過高表達，會對前列腺組織造成損傷。此外，IL-6對肝細、神經組織、造血系統也會有廣泛影響，具有抗腫瘤效應。Paulis等[4]曾對207例慢性前列腺炎患者前列腺液及精漿中的一些細胞因子水平進行研究，他發現與正常人相比，慢性前列腺炎患者的IL-6水平顯著升高，因此其認為IL-6是臨床診斷慢性前列腺炎比較好的指標之一。韋超等[5]通過大鼠制造CAP模型，發現CAP大鼠的前列腺組織內IL-6是高水平表達的，其進一步證實了IL-6參與了前列腺組織炎癥的形成或加劇了炎癥反應。因此我們認為IL-6能在一定程度上反映前列腺的炎癥情況。

IL-22最先于2000年由Dumoutier等[6]用IL-9刺激一株T淋巴瘤細胞系所發現。人的IL-22主要是由T細胞產生，包括Th22細胞、Th17細胞，同時在NK細胞中可少量產生，而在巨噬細胞、成熟或不成熟的DC，以及非免疫細胞中都沒有發現有IL-22的表達，目前的研究表明IL-22主要靶向于消化道、皮膚與呼吸器官的非造血細胞，它在黏膜固有免疫中起重要作用[7-8]。IL-22的受體僅表達于表皮細胞和一些器官的纖維母細胞表面，現如今研究IL-22功能最透徹的疾病是銀屑病[7]。IL-22的受體復合物是以IL-10R2與IL-22R1構成的異源二聚體，其中IL-10R2廣泛表達在各組織中，IL-22R1則主要表達在皮膚、腎臟、胰腺、肝臟、小腸，而在T細胞、NK細胞和單核細胞中不表達，因此IL-22具有獨特的作用，它由免疫細胞產生，但并不作用于這些免疫細胞，而是作用于組織細胞。我們檢索了一些文獻，在慢性前列腺炎方面目前還未發現有關IL-22的研究報道。因此，我們選擇了IL-6和IL-22兩種因子作為研究對象，擬分別從IL-6和IL-22方面來研究它們與CAP之間的關系，由于IL-6在CAP中的作用，這方面已有一些研究。因此，我們此次最主要的是研究探討IL-22是否與CAP的發病之間有聯系。

研究結果顯示，CAP患者EPS中IL-6水平較之正常人明顯升高(P＜0.01)，結合前人研究進一步說明了IL-6與CAP之間的密切聯系，其參與了前列腺組織炎癥的形成或者是加劇了炎癥反應；而兩組之間IL-22水平差異無統計學意義，提示IL-22與CAP之間可能沒有聯系，我們推測IL-22可能不參與前列腺的局部免疫反應。IL-22與慢性非細菌性前列腺炎之間關系到底是什么，其中緣由耐人尋味，有待于我們以及廣大同仁的進一步研究探討。

[1]謝作鋼,陳盛鐿,徐潘,等.不同證型慢性非細菌性前列腺炎前列腺液細胞因子水平分析[J].浙江中醫雜志,2013,1:12-13.

[2]郭輝,徐月敏,葉章群,等.細胞因子及熱休克蛋白在慢性前列腺炎患者精漿中的含量及其臨床意義[J].中華男科學雜志,2012, 18(12):1088-1092.

[3]郭應祿,李宏軍.前列腺炎[M].2版.北京:人民軍醫出版社, 2007:347.

[4]Paulis G,Conti E,Voliani S,et a1.Evaluation of the cytokines in genital secretions of patients with chronic prostatitis[J].Arch ltal UrolAndrol,2003,75(4):179-186.

[5]韋超,劉朝東,王洪志.慢性非細菌性前列腺炎CD4+T淋巴細胞及IL-6的表達及意義[J].中國現代醫學雜志,2009,19(3): 395-397.

[6]Dumoutier L,Louahed J,Renauld JC.Cloning and characterization of IL-10-related T cell-derived inducible factor(IL-TIF),a novel cytokine structurally related to IL-10 and inducible by IL-9[J].J Immunol,2000,164(4):1814-1819.

[7]孫奇.IL-22—炎癥性疾病關鍵因子[J].免疫學雜志,2011,27 (9):821-825.

[8]劉曉斐,石云,胡志德,等.IL-22誘導胃上皮細胞釋放炎癥因子并促進淋巴細胞趨化[J].現代免疫學,2012,32(5):371-375.

Levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion of patients with chronic abacterial prostatitis.

WANG Cheng-rong1,BIAN Ting-song2,SHI Bing-wei3,TAN Xiao-lin2,YANG Kai1.
1.Nanjing University of TCM,Nanjing 210046,Jiangsu,CHINA;2.Department of Andrology,Changzhou Hospital of TCM,Changzhou 213003,Jiangsu, CHINA;3.Department of Clinical Laboratory,Changzhou Hospital of TCM,Changzhou 213003,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo compare the levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion(EPS)of between patients with chronic abacterial prostatitis(CAP)and healthy men.MethodsTwenty-four patients with CAP were chosen as experimental group,and 10 healthy people were chosen as control group.The levels of IL-6 and IL-22 in EPS were detected by ELISA.ResultsThe levels of IL-6 and IL-22 of experimental group were 11.65 pg/ml(4.42～17.78 pg/ml)and(8.64±2.58)pg/ml.The levels of IL-6 and IL-22 of control group were 3.52 pg/ml (2.76～8.32 pg/ml)and(9.31±2.26)pg/ml.Compared with the control group,the levels of IL-6 in experimental group was significantly higher(P＜0.01),and the levels of IL-22 in experimental group showed no statistically significant difference(P＞0.05).ConclusionThere may be a certain relation between IL-6 and CAP.IL-6 may regulate local immune response of prostate.There is no obvious relation between IL-22 and CAP,which indicates that IL-22 may not participate in the local immune response of prostate.

Chronic abacterial prostatitis(CAP);IL-6;IL-22

R697+.33

A

1003—6350（2014）22—3314—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1298

2014-04-30)

江蘇省中管局項目(編號：LB09100)

卞廷松。E-mail：bst232370@163.com