瘧疾鏡檢血片制作的幾個小經驗

【摘要】目的為提高實驗室檢驗人員對瘧原蟲血片染色水平，規范瘧疾血片制作，提高瘧原蟲檢出率。方法利用反面沖洗技術制作血片。結果通過反面沖洗技術制作血片，使血片上的血細胞及瘧原蟲很好的保留血片上面，提高瘧原蟲檢出率。結論可以使血膜上的細胞較好的存留在玻片上，減少了血膜易脫落等現象。使實驗室檢驗人員的檢測水平有了很大的提高。

【關鍵詞】瘧原蟲；血片；反面沖洗

749文章編號：1004-7484（2014）-06-3596-01

瘧疾是世界六大熱帶病和我國五大寄生蟲病之一，主要分布于熱帶亞熱帶地區，世界上有40%的人口生活在瘧疾流行區，目前每年有3-5億人感染，死亡人數達100-300萬人，對人類造成極大的危害。解放以來，我國大力開展瘧疾防治工作，特別是開展消除瘧疾工作以來，瘧疾總體發病率逐漸下降，很多地區多年來無本地病例發生。但近年來隨著國際間交流和勞務合作日趨頻繁，外出務工者增多，特別是去非洲南部地區的勞務人員較多，當地感染流行瘧疾現象時有發生，而目前大多檢驗人員對該病缺乏認識，鏡檢技術生疏，閱片能力不足，特別是在血片制作、染色等環節存在諸多問題，如厚血模容易脫落，薄血模分布不合理等等。本研究利用反面沖洗技術，減少對血膜的沖擊力，使血膜上的細胞較好存留上面，提高了瘧原蟲檢出率。現將本人多年工作實際經驗及染色沖洗的一些技巧總結如下，供大家參考。

1取血

采血部位為耳垂或無名指，通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒去學部位，待酒精干后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無名指指尖，右手持消毒針迅速刺入皮膚，不宜過深或過淺。然后用右手中指輕輕擠壓出血。厚血膜血量約一粒大米（即火柴頭）大小，薄血膜約有厚血膜所需血量一半大小。

2推片

涂制厚、薄血膜的位置：通常將厚、薄血膜涂在一張載玻片上，將玻片分三等份：中部做厚涂片，右部備貼標簽及編號用，薄血膜涂在左部。取血一小滴約4-5立方毫米滴于玻片中部，用清潔玻片的一角由血滴中央向周圍旋轉涂成直徑為0.8-1.0厘米園形厚血膜。合適的厚度為；通過涂片能夠看到鐘表的指針而看不清數字。用一張邊緣光滑的推片沾取如小米粒大的血滴約1.5-2.0立方毫米，在玻片左3分之1處，迅速將推片下緣平抵玻片，讓血液沿著推玻片邊緣散開，當血液向二側擴展至2厘米寬時，使二片保持25-30度角從右向左迅速推成薄血膜。制成的薄血膜應在玻片上形成平鋪的血細胞，細胞之間互相接觸而不相互重疊。外觀看血膜末端呈舌狀、厚薄均勻。

3染色

先用臘筆在厚、薄血膜間劃一界線，用甲醇固定薄血膜，在厚血膜上滴加2-3滴蒸餾水溶脫血紅蛋白經過3分鐘后，玻片保持靜止不動，便于瘧原蟲沉著。取瑞氏-姬姆薩染色液A液2滴于薄血膜上，約1分鐘左右后再將瑞氏-姬姆薩染色液B液滴加于A液上面4-5滴，用洗耳球吹出微風使液面產生漣漪狀使兩液充分混合，混合后引到厚血膜上，使厚、薄血膜同時染色5至10分鐘。

4沖洗

沖洗很關鍵，先用緩沖水輕輕洗去染料，不要先倒掉染料然后才清洗，因為這樣將有染料的沉渣留在涂片上。然后將涂片正面朝下用水流沖洗反面這樣沖洗厚血膜就不能脫落了。由于水流不直接沖洗血膜表面受液體的表面張力的影響只能把體積較小染料雜質沖洗下去而血片上的細胞留在上面。

5注意事項

5.1玻片在使用前應清洗新玻片應浸于有液態洗滌劑的清水中浸泡10-20分鐘，然后用干凈棉巾逐個擦試，再以清水沖洗3-4次，晾干最后用干凈柔軟的棉巾擦干備用。

5.2染液量需充足勿使染液蒸發干燥以防染料沉著于玻片上。

5.3溶脫血紅蛋白時要自然干燥再進行滴加蒸餾水，沖洗時水流不能太大，時間不能太長，10秒鐘左右即可。

5.4染色時當天氣寒冷或濕度較大時，應于37度溫箱中保溫促干，以免細胞變形影響血片檢查質量。

參考文獻

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