2012年微生物質控考核盲樣檢測的分析

【摘要】目的通過質控考核提高微生物實驗室檢測能力，檢驗人員技術水平，增強實驗室競爭力。方法依據國家標準GB/T4789-2003，GB/T4789-2008，GB4789-2010對質控盲樣中食源性致病菌（阪崎腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、單核細胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、大腸桿菌O157：H7/NM，志賀氏菌、空腸彎曲菌，溶血性鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌）進行分離鑒定。結果經分離鑒定，質控盲樣中檢出阪崎腸桿菌和單核細胞增生李斯特菌，根據國家食品安全風險評估中心結果反饋，本次考核結論為滿意。結論本次質控考核使用選擇性強、特異性高的顯色培養基及VITEK2 compcat微生物鑒定儀，使檢測更加快速、特異、敏感，檢測結果更加準確可靠。

【關鍵詞】質控考核；阪崎腸桿菌；單核細胞增生李斯特菌；分離鑒定

衛生微生物檢測的質量控制，是實驗室內檢測工作的基礎，直接關系到細菌學檢測結果的準確性和可靠性。本實驗室自2000年起每年參加省疾控中心等相關機構組織的檢測能力驗證計劃，均取得了優異成績，2012年首次參加國家食品安全風險評估中心組織的全國相關食品檢測機構質控盲樣（奶粉）中食源性致病菌分離鑒定，現將本次質控結果分析總結如下：

1資料與方法

1.1待測樣品奶粉質控盲樣（粉狀固體、塑料瓶裝）。

1.2儀器設備VITEK2 compcat微生物鑒定儀，恒溫培養箱，生化培養箱等。

1.3培養基和試劑氯化鎂孔雀綠（MM）亞硒酸鹽胱氨酸增菌液，緩沖蛋白胨水，7.5%氯化鈉肉湯，LB增菌液，GN增菌液，1%葡萄糖肉湯，3%氯化鈉堿性蛋白胨水，mLST-Vm增菌液，mEC肉湯，Bolton肉湯，CIN-I平板，skirrow瓊脂平板，DFI瓊脂平板，B.P平板，MYP平板，伊紅美蘭（EMB）平板，SS平板，HE平板，skirrow瓊脂平板與mCCD平板，克氏雙糖，血平板均購自廣東環凱微生物科技有限公司，有效期內使用。

1.2檢測依據GB/T4789.5，11，13，14-2003，GB/T4789.7，8，9，36-2008，GB4789.4，10，30，40-2010所有操作均在BSL-2生物安全實驗室或萬級凈化實驗室進行，注意生物安全和無菌操作。

2檢測與結果

2.1增菌與分離無菌操作，打開樣品管，接種環蘸取半固體分別直接劃線HE平板、SS平板、EMB平板、血平板、B-P平板、O157H7顯色平板、科瑪嘉沙門氏菌顯色平板、科瑪嘉副溶血性弧菌顯色平板、skirrow瓊脂平板、mCCD平板、P.K平板、CIN-I平板，DFI顯色平板、科瑪嘉李斯特氏菌顯色平板MYP平板。除CIN-I平板26℃培養、skirrow瓊脂平板與mCCD平板42℃微需氧培養、科瑪嘉李斯特氏菌顯色平板30℃培養，其余平板均置37℃需氧培養。同時半固體菌種管直接接種各選擇性增菌液中37℃需氧培養（除LB1增菌液30℃培養24h，TTB增菌液42℃24h，PSB增菌液26℃培養48h，Bolton肉湯微需氧42℃培養24-48h，mLST44℃24）后再接種相應的平板培養。

2.2觀察菌落形態（培養24h）經過培養后，平板上可見：EMB：圓形，光滑的紫紅色菌落。HE：圓形，光滑邊緣整齊的黃色菌落。CIN-I：圓形光滑凸起濕潤紅色菌落。SS：圓形光滑的濕潤的粉紅色菌落。科瑪嘉沙門氏菌顯色平板：藍綠色圓形光滑的菌落。血平板：淡黃色圓形光滑小菌落。科瑪嘉O157H7顯色平板上：可見圓形光滑藍綠色的菌落。

科瑪嘉付溶血性弧菌平板：未見菌落生長。科瑪嘉李氏菌顯色平板：藍綠色帶暈圈可疑菌落。B.P平板：未見菌落生長。DFI平板：藍綠色圓形光滑的可疑菌落。skirrow瓊脂平板：灰白色菌落。mCCD平板：灰白色菌落。MYP平板：黃色圓形光滑菌落。

觀察增菌液劃線的平板：平板菌落形態同直接劃線平板。

2.3初步生化試驗及染色鏡檢將CIN-I上圓形濕潤紅色菌落挑選5個接種改良克氏雙糖26℃培養，同時做尿素酶試驗（結果為陰性）。科瑪嘉沙門氏菌顯色平板上藍綠色菌落，O157H7顯色平板上藍綠色菌落，SS平板上粉紅色菌落，HE平板上黃色菌落，DFI平板上藍綠色的菌落，EMB上紫紅色菌落各挑3-5個分別穿刺雙糖斜面37℃培養觀察均斜面和底層均變黃產氣，同時挑取上述平板單菌落劃線營養平板并做氧化酶試驗及鏡檢。科瑪嘉李氏菌顯色平板上藍綠色帶暈圈可疑菌落鏡檢為革蘭氏陽性小桿菌，上述其余平板上所有挑選的菌落氧化酶試驗均為陰性，鏡檢均為革蘭氏陰性小桿菌。

2.3.1挑取科瑪嘉李斯特氏菌顯色平板上藍綠色帶暈圈可疑單菌落穿刺血平板做溶血試驗（37℃培養24h后刺種點周圍可見狹小透明溶血環）及穿刺半固體做動力試驗（30℃培養3d后可見倒傘狀生長）。

2.3.2挑取DFI平板上藍綠色的可疑單菌落接種TSA平板培養做進一步生化鑒定DFI平板上轉TSA平板上黃色菌落上VITEK2compcat微生物鑒定儀經鑒定為阪崎腸桿菌生化反應。

3討論

混合菌種盲樣的鑒定是衛生微生物實驗室能力驗證的常用方法，對檢測工作來說，實驗室間質控和能力驗證是提高檢測能力的有效手段，對檢測結果起到復核和證明作用，也是對檢驗人員技能、實驗室內質量控制的檢驗，使實驗室對檢測結果心中有底，以及時發現問題，糾正錯誤，從而保證出具的檢驗結果準確、可信。

質控盲樣檢測不同的菌種，應根據鑒定的要求，盡可能制定全面的檢測方案，檢測人員應具有扎實的理論知識和豐富的實踐工作能力。本次比對活動要求鑒定奶粉中的致病菌，同時檢出其他菌一并報告。因此在進行鑒定時，應考慮各種致病菌的生長要求和特性，選擇多種分離增菌液、平板，盡可能多挑取各平板上的可疑菌落進行鑒定，避免漏檢。培養基的制備和使用是微生物檢測的重要環節，培養基的質量直接影響到檢測結果的準確性。應選擇有合格供應資質的試劑公司購買合格產品，并在有效期內使用。平板在使用前應無明顯水珠，潮濕的平板可能造成菌落擴散，影響分離結果。近年來，由食源性致病菌引起的食物中毒的不斷發生，范圍廣、危害大，已引起各國政府的高度重視，除了常見的引起食物中毒的食源性致病菌如沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌外，一些以往并不常檢的食源性致病菌如單核細胞增生李斯特菌、阪崎腸桿菌及空腸彎曲菌等引起的食源性疾病屢有報道，因而增加檢驗項目增強對其的檢測能力可對食物中毒原因的快速排查具有重要意義。

接收質控樣品時應認真核對樣品性狀，仔細閱讀作業指導書。實驗人員應嚴格按國家標準并結合作業指導書的方法進行操作，對樣品原液的直接分離鑒定和增菌后的分離培養鑒定缺一不可。在樣品中菌種比例差異較大的情況下，增菌后分離培養可能使劣勢菌無法生長或生長很少而被忽略。作業指導書中提及的一些信息，比如保存環境，在鑒定時可排除一些對環境有特殊要求的菌種。

總之，通過參加國家食品安全風險評估中心組織的全國相關食品檢測機構能力比對，提高了實驗室檢驗人員對突發傳染病、細菌性食物中毒的病原診斷及應急能力，促進國家認可實驗室水平的不斷提高。

參考文獻

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