TSDH與乳腺癌細胞G期分裂關系探討

摘要：目的 探討分析TSDH藥物與乳腺癌的G期細胞分裂的關系。方法 誘導裸鼠產生腫瘤硬塊，采用隨機數字表法分為觀察組和對照組兩組。觀察組注射0.5ug/ml的TSDH藥物，對照組注射DMSO藥物25ul。結果 觀察組的MDA-MB-231腫瘤細胞的存活率為38.0%，MCF-7腫瘤細胞的存活率為36.4%，而對照組分別為68.7%、64.4%，觀察組的MCF-7和MDA-MB-231細胞明顯受到抑制，兩組對比，P<0.01，具有顯著統計學意義。將0.5ug/ml的TSDH藥物處理不同時間段的腫瘤細胞，可觀察到MDA-MB-231細胞12h后63.76%的細胞停滯于G期，62.54%的MCF-7細胞24h后停滯于G期。結論 TSDH藥物可以抑制乳腺癌細胞G期的細胞分裂，使乳腺癌細胞株停滯在細胞分裂的G期。

關鍵詞：TSDH；乳腺癌；MCF-7；MDA-MB-231

乳腺癌是發生在乳腺腺體上皮組織的一種惡心腫瘤，多發生在24～54歲的女性中，是威脅女性身體健康的常見腫瘤之一。雖然說，乳腺并不是維持人體正常生命活動的必需器官，而且原位的乳腺癌不會致命，但是，由于正常的乳腺細胞失去了正常的生理活性，細胞間的相互連接會變得松散、容易脫落[1]。癌細胞一旦脫落，便可以隨著機體的血液循環或者淋巴循環散播至全身組織中，導致癌細胞轉移、擴散，危及人體的生命健康。現對誘導生成的人類乳腺癌細胞株注射TSDH藥物，結果良好，現報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 取4～5w大的雄性BALB/c老鼠，在進行實驗前，將所有老鼠裝籠培養，每5只放在一籠，放置在動物房中培養1～2w，并以自由取食的方式為BALB/c老鼠提供飲水，所有老鼠均購買自國科會實驗動物中心[2]。個體間沒有差異，可作為本次試驗動物。

1.2 方法 細胞培養：將MCF-7和MDA-MB-231細胞株培養在含有10%的胎牛血清的DMEM培養液中培養，放在10cm的培養皿中，37°恒溫、含有5% CO2的培養箱中培養，每3d更換一次培養液，細胞生長至九分滿時，再做繼代培養[3]。誘導腫瘤的生成：7d后，將大約5*106個MCF-7和MDA-MB-231細胞懸浮在200ul的培養液中，注射到裸鼠的背部，培養1w，便可見小鼠背部的腫瘤硬塊。將誘導成功的裸鼠隨機分為觀察組和對照組，每5只為一組[4]。對于觀察組，按裸鼠體重10mg/kg的比例注射0.5ug/ml的TSDH藥物，注射3次/w藥物，連續注射4w。對于對照組，則注射DMSO藥物25ul，注射3次/w藥物，連續注射4w。在注射藥物期間，定期觀察并記錄兩組裸鼠的體重變化。4w后，取出老鼠背部的腫瘤，進行觀察分析。細胞周期的分布：將0.5ug/ml的TSDH藥物分別處理不同時間段（3h、6h、9h、12h、24h）的腫瘤細胞，通過酒精固定的方法進行固定，收集好不同時間段處理的細胞，再用PI的方法將細胞進行染色觀察，分析腫瘤細胞的周期分布[5]。

1.3評價標準 將兩組老鼠背部腫瘤的MCF-7和MDA-MB-231細胞數量進行對比

1.4統計學方法

2結果

通過4w的藥物注射及培養，觀察組的MDA-MB-231腫瘤細胞的存活率為38.0%，MCF-7腫瘤細胞的存活率為36.4%，而對照組的MDA-MB-231腫瘤細胞的存活率為68.7%，MCF-7腫瘤細胞的存活率為64.4%，觀察組的人類乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231細胞明顯受到抑制，兩組對比，P<0.01，差異具有顯著統計學意義。見表1。

注：觀察組的MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞明顯受到抑制，兩組對比，P<0.01，差異具有顯著統計學意義。

通過表1的數據結果可以得出，TSDH藥物可以抑制人類乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231細胞的分裂。通過將0.5ug/ml的TSDH藥物分別處理不同時間段（6h、9h、12h、24h）的腫瘤細胞，TSDH藥物處理MDA-MB-231細胞12h后可觀察到63.76%的細胞停滯于G期，處理MCF-7細胞24h后可觀察到62.54%的細胞停滯于G期。

3討論

通過細胞周期的分裂，細胞才能分裂成兩個子細胞，因此，細胞周期是細胞生長所必需經歷的過程。根據生物學理論，可將細胞的分裂增殖分為G0、G1、G2、S、M phase五個時期。Gap0（G0）期是細胞離開細胞周期的分裂，處于永久性或暫時性停止生長的休眠期；Gap1（G1）期是細胞代謝活化生長的時期，這個時期，細胞會產生大量的蛋白質和RNA，以供S期染色體復制時使用。Gap2（G2）期，這個時期細胞會繼續合成蛋白質和RNA；Synthesis（S）phase期是進行染色體復制，使分裂后形成兩個相似的子細胞；Mitosis（M）phase期細胞將不會繼續合成蛋白質和RNA，通過有絲分裂分裂成兩個子細胞[6]。

通過數據可以得知TSDH藥物誘使MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞發生細胞周期G期停滯。而其本質原因是在TSDH藥物的誘使下，抑制了D type cyclins蛋白、cyclin E蛋白和CDK4蛋白產生，進而使得CDK4和D type cyclins蛋白反應形成的D type cyclins-CDK4復合物減少、復合物活性降低，致使在細胞Rb磷酸化的過程中不能正常釋放基因轉錄所必需的E2F轉錄因子[7]。另外，在TSDH藥物的作用下，p27kip1蛋白的數量也明顯增多，正常情況下，處于活化態的cyclinE-CDK2復合物會將與p27kip1結合了的cyclinE-CDK2復合物磷酸化，使磷酸化了的復合物被Jab1蛋白重新辨認傳遞到細胞質中，再與其他的細胞因子結合，使p27kip1脫離cyclinE-CDK2復合物，從而繼續進入S期調控染色體的復制[8]。但是在TSDH藥物的作用下，p27kip1蛋白的數量明顯增多，明顯增加p27kip1結合cyclinE-CDK2復合物的數量，使磷酸化的困難程度增加，p27kip1脫離cyclinE-CDK2復合物的可能性大大減小，不能進入細胞分別周期的下一個時期。因此，在TSDH藥物的作用下，可使MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞停滯在細胞周期G期。

綜上所述：通過將0.5ug/ml的TSDH藥物分別處理不同時間段的腫瘤細胞，可觀察到MDA-MB-231細胞12h后63.76%的細胞停滯于G期，62.54%的MCF-7細胞24h后停滯于G期，因此，在TSDH藥物的誘使下，人類乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231細胞會在細胞周期中的G期發生細胞生長周期的停滯。

參考文獻：

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