淺析基層醫院HEV的檢測方法

摘要：目的 探討基層醫院HEV的檢測方法，提高HEV的陽性檢出率，更好的為患者服務。方法 2011～2013年我室對2614例疑似HEV患者按試劑盒要求，同時檢測血清HEV-IgM和HEV-IgG，與分別單獨檢測其中單項抗體進行比較，戊肝患者早期HEV-IgM水平較高，后期HEV-IgG水平較高。結果 檢測血清中HEV-IgM和HEV-IgG與單獨檢測其中單一抗體陽性率增高。結論 對疑似HEV患者要同時檢測HEV-IgM和HEV-IgG，才能保證檢驗質量。

關鍵詞：戊型肝炎；急性期感染；檢出率

戊型肝炎病毒（hepatitis virus，HEV）是1982年發現的一種新病毒，是引起腸道傳播非甲非乙型肝炎的主要病因。1983年前蘇聯學者Balayan等首次用免疫電鏡技術從一名志愿者糞便中觀察到直徑為27～30 nm的病毒樣顆粒，1989年東京國際會議正式將其命名為戊型肝炎病毒。戊型肝炎（Hepatti E，HEV）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的經消化道傳播的急性傳染病，發病率逐漸升高，目前尚無特效治療方法，也無特異性被動和主動免疫制劑可供預防。建立針對HEV感染的具有較高敏感性、特異性和穩定性的檢驗方法，對HEV患者的早期診斷和治療，以及預防控制食源性HEV感染具有重要意義。通常HEV-IgG陽轉時間早，幾乎與HEV-IgM同時出現，而且與HEV-IgM相比具有檢出率高及抗體滴度高等特點。多數學者認為HEV-IgM在6個月內轉陰，但也有HEV-IgG長期存在的報道，因此如單項戊型肝炎病毒抗體HEV-IgM陽性，可以作為新近戊型肝炎病毒感染的標志，但最好作滴度并作動態觀察，如滴度較高或有滴度增高或下跌趨勢，可作為戊型肝炎病毒新近感染過。雖然恢復期中抗HEV-IgG抗體滴度低一點，但可持續存在1年及數10年，故抗HEV-IgM和抗HEV-IgG均可作為近期感染指標。我院對2614例單獨檢測和同時檢測HEV-IgM、HEV-IgG以判斷HEV病毒感染。

1資料與方法

1.1一般資料 本院2011～2013年住院患者2614例，年齡2～86歲，其中男性1691例，女性925例，均采集肱靜脈新鮮血液（均以凝血酶促凝）。

1.2方法 北京萬泰生物股份有限公司戊型肝炎病毒IgM/IgG診斷試劑盒及配套陰陽行對照和質控物，每季度參加省臨床檢驗中心的室間質量評價，結果均合格。為確保我室檢測結果的準確性，每日檢測均做質控、空白及陰陽性對照，并及時繪制質控圖，采用即刻法質控規則，保證檢測數據的精密度及準確度。本試劑盒檢測HEV-IgM采用捕獲法酶聯免疫吸附試驗原理，在微孔條上預包被抗-人IgM，加入待測標本進行溫育，標本中的IgM抗體被捕獲，形成復合物，洗板去除不與抗-人IgM結合的物質，加入酶標試劑進行第二次溫育，當樣品中存在HEV-IgM抗體時將形成\"包被抗-人IgM-HEV-IgM抗體-酶標抗原\"復合物，再次洗板后加入顯色劑TMB，復合物上連接的HRP催化顯色劑反應，生成藍色產物，終止反應后變為黃色，若樣品中無HEV-IgM抗體時不顯色。本試劑盒檢測HEV-IgG時微孔條上包被的基因重組HEV抗原，可與樣品中HEV-IgG抗體反應，加入HRP標記的抗人IgG抗體后將形成\"包被抗原-HEV-IgG抗體-酶標二抗\"復合物加入顯色劑，復合物上連接的HRP使顯色劑生成藍色產物，終止反應后變為黃色，通過酶標儀檢測吸光度（A值）從而判斷樣品中HEV-IgG抗體的存在與否。

2結果

同時檢測血清HEV-IgM和HEV-IgG與單獨檢測其中一項抗體的檢出率單獨比較：HEV-IgM 2614例，陽性144例，陽性率5.5%；單獨檢測HEV-IgG 2614例，陽性1019例，陽性率38.9%；同時檢測HEV-IgM和HEV-IgG2614例，陽性1163例，陽性率44.5%。

3討論

我們知道夏秋是HEV的高發季節，HEV是一種嚴重危害人類健康的肝炎病毒，主要通過糞口途徑傳播，易通過污染水源而導致大規模爆發流行，其傳染源包括潛伏末期，急性早期患者或隱性感染者，迄今未發現慢性患者，HEV傳播具有明顯季節性，多發生于雨季或洪水后，主要侵犯青壯年，表現為重型肝炎的比例較高，戊型肝炎潛伏期2～9 w，感染后主要為臨床顯性感然及隱性感染兩類，該病為自限性疾病，發病后6 w可自然康復，一旦病愈獲終生免疫，我國新疆南部在1986～1988年發生HEV的大流行，歷時20個月共有近12萬人發病，72%為15～44歲的青壯年[1]，而我們棗陽地區則30～80歲人群為多，且男多于女，而婦產科檢出率不高，（這與有的報導不符，將有待以后我們更加深入研究），內科及感染科陽性患者很多，這主要是除了這兩個科其余科室申請檢查的不多；鑒于此準確的篩查出HEV陽性患者，對臨床特別是流行病學調查至關重要。目前HEV的檢測主要有顯微鏡檢查、免疫學檢測、核酸檢測，對于HEV顯微鏡檢查迄今未用于臨床，RT-PCR檢測患者血清、膽汁和糞便中的RNA是診斷急性戊型肝炎特異性最好的方法[2]，急性期血清中RNA的檢出率達70%，由于有一定技術難度，RT-PCR尚難以在臨床上常規開展，因此臨床上對HEV患者的初篩主要采用免疫學方法。當前很多基層醫院為節約成本，往往只是單獨檢測其中某一抗體水平，以此來篩查HEV患者。從本研究看來：同時檢測HEV-IgM和HEV-IgG可大大提高檢出率，在結果的解釋中應充分考慮到所用試劑在特異性和敏感性方面差異，對不同抗原的血清學反映模式以及不同地區HEV臨床感染率方面的差異[3]，如患者確診正處于HEV急性感染，更應引起高度重視。

參考文獻：

[1]倪語星，尚紅.臨床微生物學與檢驗.[M]北京：人民衛生出版社，2008：274-279.

[2]朱光澤，屈勇剛，孫中峰，等.HEV國內外研究現狀及目前所面臨問題[J].中國實用診斷學，2006，3（8）：34-38.

[3]李江，和霞，沈秀芳，等.81例戍型肝炎檢測與分析[J].檢驗醫學與臨床，2010，6（6）：216-217.

編輯/肖慧