五味子降酶膠囊中五味子醇甲含量測定

摘要：目的 建立五味子降酶膠囊中五味子醇甲的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定，Agilent C18 （4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以甲醇-水（65∶35）為流動相；流速1.0 ml·min-1；檢測波長為250nm；柱溫為30℃。結果 五味子醇甲在0.0664～0.332 mg·ml-1（r=0.9999）范圍內與峰面積線性關系良好；平均回收率99.34%，RSD=1.97% （n=6）。結論 本法簡便、準確、可用于五味子降酶膠囊的質量控制。

關鍵詞：五味子降酶膠囊；五味子醇甲；含量測定

五味子降酶膠囊由五味子、板藍根、敗醬草等四味中藥組成，是經太和縣中醫院臨床實踐研制的純中藥制劑。具有保肝降酶的功效，用于急慢性肝炎、肝硬化、ALT升高者[1]。方中藥材五味子起主要藥效作用，以五味子醇甲作為指標成分，采用HPLC法測定五味子降酶膠囊中五味子醇甲含量，有效控制制劑質量。

1 儀器與試劑

Agilent1220高效液相色譜儀；電熱恒溫干燥箱（型號101-1A，上海申光儀器儀表有限公司）；十萬分之一電子天平（型號AUW120D，島津），超聲清洗機（型號 JK-500DB，合肥金尼克機械制造公司）。五味子降酶膠囊（自制，批號：121201、121202、121203）；五味子醇甲對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110857-201010）；甲醇為色譜純；水為二次純化水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件[2-4] 色譜柱為Agilent C18 （4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-水（65：35）為流動相；檢測波長為250nm；理論板數按五味子醇甲峰計算應不低于2000；進樣量為20μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲0.3mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備[5] 取本品10粒，傾出內容物，取粉末約1.5g，精密稱定，置25ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率20kHz）20min，取出，放冷，再稱定重量，補足失重，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3陰性制劑溶液的制備 按全方比例稱取缺五味子的其他藥材，按制劑工

藝制備成粉末，取約1.5g，精密稱定，其余步驟同供試品溶液的制備方法。精密吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各20μl，進樣測定，在此色譜條件下，五味子醇甲分離良好，陰性組分無干擾，見圖1。

2.3線性關系考察 分別吸取濃度為0.332 mg·ml-1的對照品溶液2，4，6，8，10ml于10ml的容量瓶中，用甲醇定溶即得濃度梯度，用上述色譜條件對各濃度進行測定。以標準品濃度為橫坐標，以對照品的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y=6×108X-701706，r=0.999 4。表明在0.0664～0.332 mg·ml-1濃度范圍內線性關系良好。

2.4精密度考察 精密吸取對照品溶液20μl，在上述色譜條件下連續測定6次，用對照品的峰面積計算精密度，其RSD為1.85%（n=6）。

2.5重復性實驗 取五味子降酶膠囊樣品（批號：121201）粉末6份，每份約1.5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法提取供試品溶液，在上述色譜條件下進行測定。分別求出其含量，計算得平均含量為1.965 mg·g-1，RSD為1.60%（n=6）。

2.6穩定性實驗 用取樣品（批號：121201）一份，按供試品溶液的制備方法提取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h進行測定，記錄色譜峰面積，計算其RSD為1.41%，表明供試品溶液在12h內基本穩定。

2.7加樣回收率實驗[6-8] 精密稱取已知含量的樣品（批號：121201）粉末6份，每份約0.75g，精密加入五味子醇甲對照品適量，按供試品的制備方法進行制備。用上述色譜條件進行測定，計算回收率，見表1。

2.8樣品含量測定 取3個批號的樣品，按\"2.2.2\"項下方法制成供試品，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，見表2。

3 討論

本實驗分別考察了超聲、回流、冷浸3種提取方法。結果表明，超聲提取效率高于其它兩種方法；同時，與回流法相比減少了能源損耗，故本采用超聲法。同時又對提取溶劑、提取時間和次數進行優化，最終確定了提取方法。該方法提取完全，簡單易行，樣品前處理簡便省時。有關HPLC法測定五味子醇甲含量的文獻中，流動相條件多以甲醇-水為洗脫系統。

本文研究表明，以甲醇-水系統為流動相測定五味子醇甲，可使五味子醇甲的分離度、理論塔板數、峰的對稱性及出峰時間達到滿意的結果。

參考文獻：

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編輯/哈濤