松果菊提取物對大鼠膠原性關節炎的作用

摘要：目的 研究松果菊提取物對膠原性關節炎（CIA）大鼠的作用及其可能機制。方法 用雞膠原Ⅱ型和弗氏完全佐劑建立CIA大鼠模型。觀察CIA大鼠足腫脹度的變化并檢測大鼠血清白細胞介素-1β（IL-1β）和前列腺素E-2（PGE-2）的水平。結果 松果菊提取物可以顯著抑制CIA大鼠的足腫脹度，并且能顯著抑制CIA大鼠血清IL-1β和PGE-2水平。結論 松果菊提取物對CIA大鼠有明顯的治療作用，其機制可能是與降低血清IL-1β和PGE-2的表達以及促使炎性細胞因子網絡趨向平衡有關。

關鍵詞：膠原誘導性關節炎；松果菊提取物；炎癥因子

松果菊（Echinacea purpurea L.），為菊科松果菊屬多年生草本植物。在臨床上主要用作免疫促進劑和調節劑[1-2]。松果菊的主要活性成分是多酚、咖啡酸衍生物和多糖[3]。目前關于松果菊提取物對大鼠類風濕性關節炎的作用研究仍未見報道。為此，本實驗建立膠原性關節炎大鼠模型，觀察松果菊提取物對膠原性關節炎大鼠的作用并探索其可能機制，為臨床應用提供理論基礎。

1資料與方法

1.1一般資料 原料松果菊花，自然干燥，粉碎。藥品與試劑地塞米松磷酸鈉注射液；雞膠原II型、弗氏完全佐劑；IL-1β、PGE-2酶聯免疫試劑盒。實驗動物Sprague-Dawley（SD）大鼠，雌雄各半，體重（180±20） g，本單位實驗動物中心提供。樣品制備稱取松果菊原料，用質量15倍的70%乙醇水溶液在90℃下回流提取3次，1 h/次，減壓蒸餾，真空干燥得淡黃色粉末。

1.2方法

1.2.1 CIA大鼠模型的制備[4] 將20 mg雞膠原Ⅱ型溶于10 mL預先配制好的0.1 mol/L醋酸溶液中，濃度為2 mg/Kg，4℃過夜使之充分溶解。次日，將之與10 mL弗氏完全佐劑在冰浴下混合，充分乳化，制成穩定的乳化劑20 mL，置4℃冰箱保存備用。除正常組外，在其他組大鼠的左后肢足跖皮內注射0.1 mL膠原乳劑致炎，第7 d在大鼠尾、背多點皮內注射0.1 mL膠原乳劑，作為激發注射。正常組大鼠注射等量生理鹽水作為致炎物質。

1.2.2動物分組與給藥方案 SD大鼠60只，雌雄各50%，每組10只，隨機分為6組：正常組、模型組、地塞米松（DXM，2 mg/Kg）組和松果菊提取物（EE，20、40、80 mg/Kg）組。于造模后第7～30 d，各用藥組灌胃給藥，1次/d。正常組及模型組，用等容積生理鹽水灌胃。

1.2.3體質量及足腫脹度的測定 于致炎前（d0）和致炎后第7、12、18、24、30 d（d7、d12、d18、d24、d30），用足趾容積測量儀測量各鼠左足腫脹度，腫脹度（mL）=致炎后左足容積（d7、d12、d18、d24、d30）-致炎前左足容積（d0）。

1.2.4血清IL-1β和PGE-2的檢測 于末次給藥后24 h股動脈放血處死大鼠，用10 mL注射器心臟取血，取血后4℃靜置1 h，4000 r/min離心10 min，取上清液置-80℃冰箱保存待檢。采用酶聯免疫吸附法（ELISA，按試劑盒說明書進行操作）檢測血清中IL-1β和PGE-2的含量。

2結果

2.1松果菊提取物對CIA大鼠足腫脹的影響 模型組大鼠足腫脹度較正常組明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，DXM組和EE組均能顯著抑制CIA大鼠的足腫脹（P<0.01或P<0.05），且后者具有明顯的量效關系，見表1。

2.2松果菊提取物對CIA大鼠血清IL-1β和PGE-2的影響 模型組血清中IL-1β和PGE-2的表達量均明顯高于正常組（P<0.01）；DXM組和EE組均能顯著抑制CIA大鼠血清中的IL-1β和PGE-2水平（P<0.01或P<0.05），且后者具有明顯的量效關系，見表2。

3討論

類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種炎癥性自身免疫疾病，膠原蛋白和弗氏完全佐劑誘導的CIA大鼠的病理過程和實驗室指標與RA相似，是篩選和研究RA治療藥物的理想動物模型之一[4]。

實驗結果表明，松果菊提取物對CIA大鼠的足腫脹有較好的抑制作用，表明它對CIA大鼠有較好的治療作用。

RA的主要病理學變化與炎癥性細胞因子的表達異常有關。IL-1和PGE-2能促進膠原酶和其他中性蛋白酶的產生，導致軟骨基質崩解、軟骨吸收和軟骨破壞。

本研究結果表明松果菊提取物能顯著下調CIA大鼠血清IL-1β和PGE-2水平，揭示它對CIA的治療作用可能與其降低IL-1β和PGE-2的表達以及恢復細胞因子的網絡平衡有關。

參考文獻：

[]劉一兵.紫花松果菊屬植物制劑的化學、免疫作用與臨床[M].國外醫藥，植物藥分冊，2001，16（2）.

[2]肖培根.國際流行的免疫調節劑-紫花松果菊及其制劑[J].中草藥，1996，27（1）：46.

[3]王康才，唐曉清，朱光明，等.紫花松果菊屬植物的化學成分、藥理及開發利用研究進展[J].中藥材，2000，23（12）：780-782.

[4]李宜川，葉文中，劉國玲，等.白芍總苷對大鼠膠原性關節炎體質量及足腫脹度和足爪組織基質金屬蛋白酶表達的影響[J].中國臨床藥理學雜志，2010，9：680-683.

編輯/肖慧