VITEK2—compact細(xì)菌分析系統(tǒng)在微生物鑒定應(yīng)用上的探討

摘要：目的 通過(guò)鑒定多個(gè)已知菌株，了解VITEK 2-compact細(xì)菌分析系統(tǒng)鑒定微生物的性能，探討其在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 本次研究的試驗(yàn)方法參考采用第三版全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程及室間質(zhì)量評(píng)比操作手冊(cè)的細(xì)菌檢驗(yàn)相關(guān)步驟，實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范按照VITEK 2-compact細(xì)菌分析系統(tǒng)的基本操作規(guī)程和API的鑒定試劑說(shuō)明書中標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行，以省臨床檢驗(yàn)中心回報(bào)的正確結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱作為參考標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本次研究的35株微生物的種類進(jìn)行鑒定，驗(yàn)證VITEK 2-compact系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果 VITEK 2-compact細(xì)菌分析系統(tǒng)檢驗(yàn)效率較高，所有鑒定結(jié)果都在48h內(nèi)得出，最快4h就能鑒定出結(jié)果。鑒定出細(xì)菌的名稱和標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱相符合，準(zhǔn)確性較高，生化鑒定符合鑒定到種水平ID%達(dá)到了95%以上的共有34例，占97.1%。結(jié)論 VITEK 2-compact細(xì)菌分析系統(tǒng)對(duì)于微生物鑒定的準(zhǔn)確性極高，同時(shí)進(jìn)一步提高了臨床工作效率，值得在臨床上廣泛推廣使用。

關(guān)鍵詞：細(xì)菌鑒定；細(xì)菌分析儀；質(zhì)量控制

隨著現(xiàn)代科技日新月異高速的發(fā)展，自動(dòng)化、電腦智能化技術(shù)先進(jìn)的自動(dòng)化儀器在臨床實(shí)驗(yàn)室得到廣泛的應(yīng)用。為提高檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)水平起到了很大的促進(jìn)作用，而微生物學(xué)檢驗(yàn)由于其自身的一些特殊性，自動(dòng)化進(jìn)程發(fā)展較生化學(xué)，免疫學(xué)進(jìn)程慢，但其自動(dòng)化智能化檢測(cè)亦為大勢(shì)所趨。一些適合于微生物室使用的自動(dòng)化儀器近年相續(xù)問(wèn)世，目前，我省大部份醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室裝備了半自動(dòng)或全自動(dòng)細(xì)菌分析儀系統(tǒng)，我院檢驗(yàn)科于2013年購(gòu)進(jìn)梅里埃VITEK 2-compact細(xì)菌分析儀系統(tǒng)。為了解該儀器在細(xì)菌鑒定上的效果，我們應(yīng)用該儀器對(duì)中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)進(jìn)的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株及區(qū)臨床檢驗(yàn)中心頒發(fā)的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本菌株進(jìn)行鑒定，并對(duì)分析總結(jié)其對(duì)細(xì)菌種屬鑒定的性能。現(xiàn)將以2013～2014年省臨床檢驗(yàn)中心回報(bào)的正確結(jié)果多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株及中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)進(jìn)的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株為參考標(biāo)準(zhǔn)，分析VITEK 2-compact系統(tǒng)將細(xì)菌鑒定到種的正確率。共分析鑒定35例結(jié)果，資料分析回報(bào)如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)進(jìn)的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株及區(qū)臨床檢驗(yàn)中心發(fā)放的、適合上述系統(tǒng)鑒定的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本35例。

1.2儀器VITEK 2-compact細(xì)菌分析系統(tǒng)，DENSICHEK比濁儀、二級(jí)生物安全柜、上海智城電熱培養(yǎng)箱等微生物檢驗(yàn)相關(guān)儀器。

1.3試劑生物梅里埃公司所生產(chǎn)的各種微生物商品培養(yǎng)基，和VITEK 2 GN革蘭氏陰性菌鑒定卡、VITEK2GP革蘭氏陽(yáng)性鑒定卡、VITEK 2 NH奈瑟菌嗜血桿菌鑒定卡、VITEK 2YST酵母菌鑒定卡、及配套培養(yǎng)液等。

1.4方法 采用第三版全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程及室間質(zhì)量評(píng)比操作手冊(cè)的細(xì)菌檢驗(yàn)相關(guān)步驟，接種梅里埃公司生產(chǎn)的羊血平板培養(yǎng)24或48h培養(yǎng)分離出細(xì)菌菌落后，根據(jù)VITEK 2-compact系統(tǒng)SOP文件選取菌落形態(tài)特征明顯、單個(gè)的細(xì)菌菌落，分別用VITEK 2-compact上機(jī)鑒定。以省臨床檢驗(yàn)中心回報(bào)的正確結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱作為參考標(biāo)準(zhǔn)，分別計(jì)算各個(gè)系統(tǒng)將細(xì)菌鑒定到種。

2 結(jié)果

報(bào)告時(shí)間均不計(jì)菌株預(yù)培養(yǎng)準(zhǔn)備階段的時(shí)間，全部的鑒定結(jié)果均在48h內(nèi)得出，其中最快4h就能鑒定出結(jié)果。鑒定出細(xì)菌的名稱和標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱相符合。本次試驗(yàn)中檢測(cè)樣本念珠菌5例，革蘭氏陽(yáng)性球菌10例，革蘭氏陰性桿菌15例，革蘭氏陰性球菌及革蘭氏陽(yáng)性桿菌5例，共計(jì)35例。與省臨床檢驗(yàn)中心回報(bào)的正確結(jié)果進(jìn)行比較，VITEK 2-compact細(xì)菌分析系統(tǒng)的準(zhǔn)確性較高，其生化鑒定符合鑒定到種水平ID%在95%以上的有34例，占97.1%。另有1例鑒定到屬水平，外加兩項(xiàng)補(bǔ)充試驗(yàn)后出結(jié)果。

3 討論

臨床微生物檢驗(yàn)質(zhì)量水平判斷的重要標(biāo)準(zhǔn)是準(zhǔn)確性，標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定是驗(yàn)證試驗(yàn)方法準(zhǔn)確性的有效手段[1]。細(xì)菌是一種微小的生物，具有生物的遺傳性，通過(guò)遺傳含有親代的基本特征，細(xì)菌在新陳代謝、生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中，某些形狀會(huì)發(fā)生變異，造成我們鑒定上的困難。傳統(tǒng)的手工鑒定方法接種量大，操作復(fù)雜繁瑣，耗時(shí)耗力，加上生化微量管本身質(zhì)量或人操作技巧的因素，使得判讀生化反應(yīng)結(jié)果往往因人而異，對(duì)于微生物學(xué)檢驗(yàn)學(xué)經(jīng)驗(yàn)不足者更是難以適應(yīng)[2]。VITEK 2-compact系統(tǒng)的問(wèn)世，使得這些難題可以迎韌而解。VITEK 2-compact系統(tǒng)由計(jì)算機(jī)、孵育箱、讀取器、填充機(jī)、封口機(jī)等部件組成。只要分出單個(gè)菌落后，涂片革蘭氏染色后，就可選用相對(duì)應(yīng)的鑒定卡片，制備菌液上機(jī)檢測(cè)，最快可4h出鑒定結(jié)果。鑒定原理是采用八進(jìn)位制數(shù)碼鑒定原理，在鑒定卡上設(shè)置生長(zhǎng)對(duì)照孔并設(shè)有卡片終點(diǎn)的閾值，系統(tǒng)每間隔一定時(shí)間對(duì)卡片的每一反應(yīng)孔進(jìn)行讀數(shù)，獲得細(xì)菌生化反應(yīng)譜，當(dāng)卡片生長(zhǎng)對(duì)照孔到達(dá)終點(diǎn)閾值時(shí)，可獲得生化鑒定結(jié)果。動(dòng)態(tài)鑒定是得用細(xì)菌最佳時(shí)間段生物特征作為鑒定依據(jù)[3]，所以比傳統(tǒng)鑒定時(shí)間短，報(bào)告速度更快捷，大幅提高了工作效率。對(duì)于儀器鑒定結(jié)果的可靠性，我們從上面鑒定結(jié)果中可以觀察到，該系統(tǒng)對(duì)細(xì)菌可鑒定到種的水平，準(zhǔn)確率接近100%，故檢測(cè)結(jié)果比較可靠。雖然儀器使用簡(jiǎn)單便捷，但也要了解和注意一些事項(xiàng)才能得到滿意的結(jié)果。制備菌懸液一定要純培養(yǎng)的菌落，準(zhǔn)確的濁度。這些都要求較為嚴(yán)格的無(wú)菌操作技術(shù)和平板劃線分離技術(shù)，否則不但影響了鑒定結(jié)果也影響工作效率。因?yàn)闄z測(cè)卡板種類是依據(jù)革蘭氏染色結(jié)果選定的，革蘭氏染色是選定上機(jī)檢測(cè)卡板種類的關(guān)鍵，嚴(yán)格把握染色時(shí)間和脫色時(shí)間，這樣才能得到正確的革蘭氏染色結(jié)果，隨后才能夠選取正確的上機(jī)檢測(cè)卡板。因此，必須掌握正確的涂片染色工作；保證所用試劑的質(zhì)量。VITEK 2-compact系統(tǒng)檢測(cè)所得出的結(jié)果具有專家系統(tǒng)功能，當(dāng)某個(gè)鑒定結(jié)果得出兩種菌未能最后確定時(shí)，就會(huì)提示往下做何種補(bǔ)充試驗(yàn)以便得到最后準(zhǔn)確的結(jié)果。此外，熟悉VITEK 2-compact系統(tǒng)就能很好運(yùn)用此系統(tǒng)的所有功能，充分發(fā)揮其微生物檢測(cè)技術(shù)的先進(jìn)性。

本次研究表明，VITEK 2-compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性，檢驗(yàn)速度較快，且能直接報(bào)告確定的細(xì)菌，值得在臨床上推廣使用，但該系統(tǒng)仍存在一定的不足之處，對(duì)某些菌的鑒定能力尚需補(bǔ)充生化試驗(yàn)。上述不足相信會(huì)在后續(xù)的發(fā)展中逐漸彌補(bǔ)，VITEK 2-compact系統(tǒng)將廣泛應(yīng)用于臨床，用以進(jìn)一步提高臨床工作效率。

參考文獻(xiàn)：

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