摘要:目前,醫學上對藥物進行鑒別、分析、檢查和測定時最常使用的一種基礎方法就是高效液相色譜法(英文縮寫HPLC)。最近幾年,科學技術不斷發展,為了與其相適應,人們逐漸將各種儀器、計算機軟件與之相結合,能夠將應用HPLC的范圍拓寬,使其對藥物分析的準確性增強,所以在檢測生物藥品、化學藥品和中藥等時應用的十分廣泛。文章對該方法與其聯合方法的應用進行了分析和探討。
關鍵詞:高效液相色譜法;藥物檢測;聯用 作為眾多色譜中的一種,高效液相色譜法(英文縮寫HPLC)在測定藥物組分含量、鑒別藥物組分、分析藥物組分以及測定有關物質等工作中被人們應用的十分廣泛[1]。高效液相色譜法和其他色譜法相比,廣泛的應用、強分離性能、高速等是其獨有的特點。
1 HPLC的優點與局限性
優點:HPLC具有較高的進樣壓力與供液壓力,而且在使用時耗時少,具有很高的速度,以及很高的分離效能,遠高于氣相色譜法,其靈敏度也很高,并且有廣泛的應用范圍。
局限性:容易造成環境污染以及較高的分析成本,而且在洗脫梯度時,有較為復雜的程序升溫操作,并且在其發展過程中,檢測器較為薄弱。
2在檢測藥物時HPLC的應用情況
2.1在檢測中藥方面HPLC的應用情況 在有效分析中藥組分時,HPLC能起到十分重要的作用,能夠使中藥制劑與飲品的療效和質量得到保證。例如,相關人員層分析并測定干姜中有效組分的含量,而且針對各種有效組分對干姜進行了超臨界CO2萃取,而干姜油就是最后得到的產物,較好的重現性、簡便和靈敏等是這種測定含量方式的優點,所得出的實驗結果能夠有效控制干姜和相關制劑的質量,其意義十分重要。與此同時,在分析和測定中藥的有效成分及其含量時,HPLC的作用也是十分顯著的。例如,相關人員在對比和檢測石斛質量的過程中,同時對石斛酚與石斛素在石斛中的含量進行了檢測,通過檢測發現,對中藥有效組分進行分析和檢測時,HPLC的反應十分靈敏,能夠作為一個檢測、控制石斛質量的主要方法。
2.2在檢測化學藥物方面的應用情況 檢測雜質是HPLC在檢測化學藥物過程中的主要用途。副產物經常會產生于合成制作化學藥物的過程中,嚴重時可能產生的產物中某一種或幾種是有毒有害的,所以需要嚴格控制該過程中產生雜質的含量。據相關的資料顯示,在測定主要化學藥物成分的含量也能由HPLC來實現,例如將燒燙靈軟膏中的主要成分(磺胺醋酰鈉和磺胺)采用HPLC進行測定時,檢測過程能夠在3 min內完成。
3檢測藥物的過程中HPLC 聯用技術的應用
3.1檢測中藥的過程中HPLC 聯用技術的應用 有很多種HPLC 聯用方式包含在HPLC 聯用技術中,而四大譜(核磁共振NMR、質譜MS、紅外光譜IR和紫外光譜UV)和HPLC技術的聯用是其中最為主要的一種。在分析定性組分與未知欲定性組分時該技術提供了很大的幫助。對重要代謝產物進行分析的方法中較為常用的就是HPLC-MS,其特點是不僅有較強的選擇性,還有很高的靈敏度,能夠將單一的質譜圖從復雜的混合物中獲取出來,使內源性化合物與代謝產物被鑒定、分離的幾率得到提高[2]。比如,將馬錢子堿、士的寧和這些物質的主要代謝產物采用HPLC-MS進行鑒定與比較時,發現去甲基化是主要的馬錢子堿代謝途徑,而葡糖苷酸結合物是主要的士的寧代謝產物。
一般在檢測化合物內部結構過程中,由于HPLC-NMR方式存在的缺陷,化合物組分濃度會在一定程度上影響其靈敏度,所以該方式在藥物中檢測的主要化合物對象需要有較小的相對分子質量。中藥粗體物中經常存在一些微量組分較難被分離和鑒定,但是對這一類微量組分進行檢測時HPLC-NMR卻具備高效而快速的特點。比如,相關人員在鉤枝藤科鉤枝樹蠟中鑒定3種新發現的化合物時,一種二聚體是首先被發現的,它屬于萘基異喹啉生物堿,接著對這種化合物的構型進行了確定。但其中還存在著較難分離的兩種成分,檢測過后發現是甲基醌類二萜,而且將其發生互變異構的機制在溶液中進行了研究。
3.2生化藥物的檢測過程中HPLC 聯用技術的應用 在眾多的分離提純方法中,HPLC是較為主要的一種,該技術尤其被廣泛應用于蛋白質與多肽的純化分離方面[3]。最近幾年,醫藥界逐漸發展了HPLC 聯用技術。比如,在分析多肽與氨基酸的一次研究中,以HPLC-NMR 技術與毛細管為主要手段,研究了一些生物樣品,其中都含有黃質素、黃體素等成分,并進行了一些敏感度異變測試,包括氧或光等方面,鑒定了包含在這些物質中的異構體,進而得出了一些資料,可以在預防和治療相關疾病時作為參考。
4結論
如今,在各類藥物的檢測中,HPLC被十分廣泛的應用,該方法無論是研發藥物還是控制其質量都能發揮很大的作用。但是隨著日益發展的現代醫藥科技水平,一些技術需求也越來越高,單一色譜技術并不能適應這些變化,也不能滿足新的需求,對技術發展的方向進行分析時也可以發現聯合使用多種技術是今后的必然趨勢。它不僅能夠使藥物檢測法的試驗結果更加準確,而且能夠增強其選擇性、提高其靈敏性,對藥物有效組分進行分析時也能更加高效。
參考文獻:
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[3]郭繼芬,陳笑艷,鐘大放.液相色譜一電噴霧離子阱質譜法檢測體液中士的寧、馬錢子堿及其主要代謝物[J].藥物分析雜志,2013,21(3):167-170.編輯/肖慧