高效液相色譜法測定克霉唑溶液的含量及有關物質的研究

摘要：目的 探討高效液相色譜測定克霉唑溶液的含量的準確性。方法 采用13本島津LC-6A高效液相色譜儀，甲醇一水為流動相，流速：10ml·min-1；檢測波長：272mm，采用外標法室溫檢測。結果 克霉唑在13.4～300mg/L范圍內線性關系良好，得到線性回歸方程為Y=1324.4X+213.34，相關系數為0.9998（n=6）；低、中、高濃度精密度的RSD值分別為0.49%、0.38%、0.51%；重復性RSD為0.48%；平均加樣回收率為99.19%，RSD為0.85%；供試品溶液室溫放置8h 穩定。結論 本測定方法簡單易懂，結果精確，可有效測定克霉唑溶液中克霉唑的含量。

關鍵詞：高效液相色譜法；克霉唑；含量測定

克霉唑具有強大的坑真菌作用，臨床上多用于真菌性婦科炎癥治療，傳統的克霉唑含量測定是滴定法，操作復雜，精確度低，并且耗時長[1]。高效液相色譜法（HPLC）應用于物質含量的測定試驗以其高效、準確而被廣泛應用。本文采用高效液相色譜法（HPLC）檢測試劑中克霉唑質量的含量，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 13本島津LC-6A高效液相色譜儀（包括LC-6A恒流泵，CTO-6A柱恒溫箱，SPD-6AV可調波長紫外檢測器，SCL-6B色譜系統控制器，ANASTAR色譜工作站），島津265型紫外分光光度計；METTLER TOLEDO AB135-S 型十萬分之一天平（METTLER，瑞士）；XW-80A渦旋混合器（ 上海滬西分析儀器廠）；TGL16M型冷凍離心機（長沙英泰儀器有限公司）；AHL-2001-P痕量型分析型超純水機（艾科浦，重慶頤洋企業發展有限公司）[2]。

1.2試藥 克霉唑對照品：由中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號：100037-200306；克霉唑栓（醫院制劑，批號：020314，每支10g裝含克霉唑0.3g）；甲醇（色譜純，天津市化學試31--廠）；磷酸二氫鉀：汕頭市西隴化工廠有限公司，分析純，批號：090307；磷酸：天津科密歐化學試劑有限公司，分析純，批號：110215；純水：自制去離子超純水。

1.3實驗方法

1.3.1色譜具體條件 流動相：甲醇-水（64：23，庚烷磺酸鈉4.54g，三乙胺2.5ml溶于1000ml水中）；色譜柱：Lichrospher C18（212 mm×4.7mn，5 um）波長的檢測最適值為：260nm，恒溫35.2C，流速1.0mL·min-1。

1.3.2精密度測定 精密吸取克霉唑38.9ug·mL-1的供試液，連續進樣6次，計算其峰面積的RSD為0.68%。

1.3.3對照品溶液的制備 克霉唑質量100mg，用100ml容量瓶裝，甲醇溶解為1.0mg每毫升的溶液。

1.3.4 標準曲線方程的繪制 稱克霉唑質量為52.21mg（用在100℃恒重的克霉唑），溶解在100面臨的容量瓶中，加庚烷磺酸鈉，三乙胺適量，用超聲波來溶解，把溶液溶解到適量，儲存用于實驗液。把實驗液均放在25ml容量瓶當中（5.0ml，10.0ml，15.0ml，20.0ml，25.0ml），搖勻，各進樣20止，依法測定。記錄各個峰的的峰值，用克霉唑的溶液濃度（C）與對照的各個峰的峰值（A）來求得總體的線性方程：A=3.12×102C-7.52×102，r=0.999 9（n=6），總體說明克霉唑在100.6～498.2 mg.L-1范圍內，線性關系良好。

1.3.5 檢測波長的選擇 以流動相作為空白對照，將克霉唑對照液和供試品溶液在紫外分光光度計上掃描，掃描區間為200～300nm，結果得出，克霉唑在260nm處顯示有最大吸收。因此，選擇260nm作為檢測波長。

2結果

2.1 樣品含量測定 取克霉唑栓劑1支（10 g）精密稱定，混勻，精密稱取適量（約含克霉唑0.28 g）， 放入甲醇，放在熱水浴中，待完全融化移植100ml的容量瓶中，用甲醇溶液進行滴定，待完全溶解后，用冰水進行冷卻，最后過濾。量取續濾液10.5ml放置在100ml的容量瓶當中，用庚烷磺酸鈉，三乙胺定容完成。取25皿注入色譜柱進行分析。寫出線性方程，求出結果并分析，見表1。

2.2回收率試驗 取克霉唑空白溶液適量，分別精密加入對照品適量，結果見表2。

3討論

此實驗如果用甲醇和水進行試驗，雜質峰不明顯，并且分離困難。如果用磷酸鹽，對水相和有機相的比例等有影響。水相比例達到55%及以上時，色相譜的尾風較長，時間也較長，適當的加入三乙胺，分離效果得到改善，并分離完全；甲醇68%時，雜質峰不好分離，效果不明顯。

傳統試驗中水相比例大，組分保留的時間較長，壓力較高，雜質峰的峰形較寬。而本實驗恒溫加熱35.2℃，流速得到了提高，壓力減小了，保留時間明顯減小，峰值變窄[3]。

流動相的pH值對時間的保留和分離也有相應影響。pH在3.6～4.6分離完全；當pH>7.4的時候，各個成分分離不完全，還要考慮填料的過程中pH過高時的穩定性。總體來說，pH越高，時間保留的相對較長[4]。本實驗采用pH為4.3的磷酸，保留時間和分離度為最適值。克霉唑溶液和對照品溶液在200～300掃描，流動相為空白，最大吸收為260nm。本實驗的方法可以排除其它成分的干擾，并且操作簡單，結果精確，各成分的劑量可以得到有效控制。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社， 2010：319-321.

[2]British Pharmacopoeia Commission.BP 2009.London.UK.The Stationery Office，2010（1）：428-429.

[3]李亦蕾，鐘震邦，鄭萍，等.高效液相色譜法測定復方酮氯乳膏中酮康唑和丙酸氯倍他索的含量[J].醫藥導報，2010.29（9）：1216-1218.

[4]王勇.HPLC法測定復方克霉唑乳膏中二苯基（2-氯苯基）甲醇和克霉唑的含[J].中國藥品標準，2010，11（3）：227-230.

編輯/孫杰