關鍵詞:口腔感染;白色念珠菌;厚膜孢子;假菌絲
【中圖分類號】R781.5【文獻標識碼】A【文章編號】1672-8602(2014)06-0324-02
白色念珠菌(Candidaalbicans),又名白假絲酵母。念珠菌是臨床常見的條件致病菌,抗生素的濫用及免疫抑制劑廣泛使用使得念珠菌的感染機會逐漸增加[1]。存在于人的口腔、呼吸道、腸道和陰道的粘膜上,念珠菌是健康人口腔中常見共生真菌[2],一般在正常機體中數量少,不引起疾病,在人體免疫力下降時或正常菌群相互制約作用失調,就引起白色念珠菌感染,主要引起口腔炎、陰道炎等。
1病例摘要
2013年9月2日,一患者懷疑是口腔白色念珠菌感染前來進行細菌培養鑒定。該患者,男,40歲,農民。因口腔潰瘍,自服消炎藥無效去縣醫院就診,查體發現口腔內舌下及牙齦內側有白色串珠樣菌膜,質硬,不易拭去。據患者回憶,三天前在家吃西瓜,西瓜有一塊霉斑,只把霉斑切去,把剩余部分吃掉了。做細菌學檢查。患者經含服制霉菌素后7日痊愈。
2細菌培養
2.1培養基(1)沙氏葡萄糖液體培養基:1L水中加入10g蛋白胨,混合,微濕溶解,濾過,加入40g葡萄糖,溶解,分裝,滅菌。(2)沙氏葡萄糖瓊脂培養基:1L水中加入10g蛋白胨,混合,微溫溶解,濾過,加入18g瓊脂、40g葡萄糖,分裝,滅菌。(3)1%吐溫80玉米瓊脂培養基:取40g玉米粉、80ml吐溫80及500ml蒸餾水,混合,65℃加熱30分鐘,混勻,用紗布濾過,補足原水量。取15g瓊脂、500ml蒸餾水混合,加熱溶解。將以上兩種溶液混合、搖勻,分裝,滅菌。(4)念珠菌顯色培養基:1L水中加入10.2g蛋白胨、0.5g氯霉素、22.0g色素,混合,微溫溶解,調節PH值至6.3,濾過,加入15g瓊脂,加熱煮沸,不斷攪拌至瓊脂完全溶解,傾注平皿。
2.2用無菌棉簽取患者口腔白色菌膜接種于沙氏葡萄糖液體培養基,將培養管置37℃溫箱內孵育48小時后觀察,可見乳白色菌膜生成。(1)取上述增菌液培養物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上,35℃培養24小時,可見大量乳白色菌落生長,表面光滑有濃酵母氣味。挑取疑似菌落涂片鏡檢。(2)在沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上挑取2-3個菌落劃線接種在念珠菌顯色培養基平板,35℃培養24小時,可見大量藍綠色菌落生長。(3)在念珠菌顯色培養基平板上挑取2-3個菌落劃線接種在于吐溫80-玉米瓊脂培養基平板上,35℃培養24小時,可見大量灰色菌落生長,表面光滑有濃酵母氣味。
2.3染色鏡檢:在吐溫80-玉米瓊脂培養基平板上挑取典型菌落涂片,進行革蘭氏染色,鏡檢。
2.4芽管試驗:在吐溫80-玉米瓊脂培養基平板上挑取典型菌落接種于加有一滴血清的載玻片上,蓋上蓋玻片,置濕潤的平皿內,置35℃溫箱內培養,2小時。
2.5糖發酵試驗:采用杭州天河微生物試劑公司微量生化管。在吐溫80-玉米瓊脂培養基平板上挑取典型菌落接種在葡萄糖發酵管、麥芽糖發酵管、乳糖發酵管、尿素和蔗糖發酵管,35℃溫箱內培養,24小時。
3實驗結果
3.1染色鏡檢:革蘭氏染色陽性菌,圓形、菌體著色不均勻,高倍鏡下觀察,可見豐富假菌絲和芽管生長,在菌絲頂端及側緣厚膜孢子生長。
3.2芽管試驗:置顯微鏡下觀察,可見到由孢子長出短小芽管。
3.3糖發酵試驗分解葡萄糖產酸并產氣,分解麥芽糖產酸并產氣,不能分解乳糖,可以分解蔗糖并產酸不產氣。
4討論
念珠菌顯色培養基根據酶底物法,白色念珠菌具有β-硝基半乳糖苷酶,可分解NGL使對-硝基苯酚游離,在堿性條件下顯色。
幾種細菌在顯色培養基上的顯色對比:
幾種細菌生化試驗對比:
根據在顯色培養基生長形態、染色鏡檢、芽管試驗和糖發酵試驗的情況,可以確定患者口腔潰瘍是白色念珠菌感染。可以推斷,患者之前吃的霉變西瓜含有大量的白色念珠菌,由于大量白色念珠菌的攝入,打破了人體內正常菌群的平衡而導致發病。隨著臨床抗生素、抗癌藥物及免疫抑制劑的應用,白色念珠菌已成為重要的醫院感染病原體之一[3]。而白色念珠菌仍然是血液感染的主要致病菌,且其感染有逐年增加的趨勢[4]。隨著抗真菌藥物在臨床上的大量應用,真菌耐藥性不斷出現且日趨嚴重[5]。其中,白色念珠菌的藥物外排能力增強導致胞內藥物濃度降低,可能是白色念珠菌最主要的耐藥機制。隨著真菌感染率的不斷上升,真菌病治療也面臨著嚴峻的挑戰,且有關耐藥菌株的報道也逐漸增多。要預防白色念珠菌感染,主要是放棄濫用抗生素,要養成良好的衛生飲食習慣,不吃霉變、變質的食物。還要加強體育鍛煉,增強體質,維護正常菌群平衡;保持良好的有規律的起居習慣,保持愉快心情,避免負面情緒。
參考文獻
[1]楊莉莉,范嚴嚴,鄧英,等.146株念珠菌的分布及藥敏結果分析[J].中華醫院感染學雜志,2004,14(6):703~704