正交試驗優(yōu)選痔寧膠囊的提取工藝

摘要：目的：優(yōu)選出痔寧膠囊的最佳提取工藝。方法：采用正交設計的試驗方法，以干浸膏得率、黃芩苷含量為考核指標，優(yōu)選出最佳的醇提和水提工藝。結果：醇提的最佳工藝為：70%乙醇，加6倍量，回流2次，第一次2小時，第二次1小時；水提的最佳工藝為：加8倍水，煎煮2次，每次2小時。結論：該提取工藝穩(wěn)定可行。

關鍵詞：痔寧膠囊；黃芩苷；提取工藝；正交試驗

【中圖分類號】R943【文獻標識碼】B【文章編號】1672-8602（2014）06-0247-02

痔寧膠囊是由槐角（炒）、地榆（炭）、黃芩等八味藥組成的方劑。組方中的有效成分主要為甙類、黃酮等[1]。試驗選用乙醇回流提取；再用傳統(tǒng)的水煎煮提取。以黃芩苷的含量和干膏量為指標，采用正交實驗優(yōu)選最佳試驗參數(shù)。

1.儀器和材料

HP一1100高效液相色譜儀（Agilent）、Agilent色譜工作站、CQ一250超聲波處理器（中國上海船舶電子設備研究所）、CS-501超級恒溫器（重慶實驗設備廠）、氧氣瓶（航天醫(yī)學工程研究所）；黃芩苷（中國藥品生物制品檢定所），所用試劑中除流動相為色譜純級，其余均為分析純級，水為重蒸水；所用藥材購自湖北省藥材公司，經(jīng)檢驗均符合2005年版中國藥典一部規(guī)定。

2方法與結果

2.1醇提工藝條件的選擇：

2.1.1醇提次數(shù)的選擇

根據(jù)預試驗情況，從乙醇濃度、加醇量、提取次數(shù)、提取時間幾方面進行考查。首先采用單因素試驗法確定提取的次數(shù)，方法如下：

取處方量的藥材，加6倍量60%乙醇，分別回流提取1、2、3次，每次2小時，過濾，濾液減壓濃縮并干燥至恒重，稱取干膏重量，采用高效液相色譜法測黃芩苷含量[2]，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2500。

由以上實驗可以看出，當提取3次時，出膏率最大，但與提取2次的差別不大，且黃芩甘的含量與提取2次的結果相當，為了節(jié)省能源，縮短工時，選擇提取2次較好。

2.1.2醇提工藝正交試驗

在此基礎上，采用正交試驗的方法繼續(xù)對回流的乙醇濃度、加醇量、提取時間三個因素進行優(yōu)選，并在預試驗的基礎上確定以下因素水平表：

試驗方法是：分別取1倍處方量的藥材，按正交試驗設計表中設定的方案進行提取，濾過，濾液減壓濃縮并干燥至恒重，稱取干膏重量，并按上法測黃芩苷含量，試驗結果3：

以黃芩苷含量為考核指標，應選A3B2C3；以干膏量為考核指標，應選A1B3C3。但仔細觀察C2、C3，無論以黃芩苷含量還是以干膏量為考核指標，差距都不大，但從提高效率的角度講，選擇C2較好；以干膏量為考核指標，B2與B3的差異也不大，但選擇B2可以提高黃芩苷的含量，因此選擇B2較好；由于黃芩苷的含量是關鍵考核指標，干膏量的多少對提取效果的判斷沒有明確的意義，因此在確定因素A時著重考慮黃芩苷含量，選擇A3較好。

最終將乙醇回流的工藝條件定為A3B2C2，即以6倍量的70%乙醇回流2次，第一次2小時，第二次1小時。

2.1.3醇提工藝驗證

取處方量的藥材，按優(yōu)選的最佳工藝進行提取、濃縮、干燥，計算浸膏得率及檢測黃芩苷的含量，結果4：

2.2水提工藝條件的選擇：

2.2.1水提工藝正交試驗

根據(jù)生產(chǎn)實踐經(jīng)驗，影響提取效果的因素有以下三個方面：加水量、提取次數(shù)、提取時間，故我們在預實驗的基礎上，設立了以下4個因素3個水平，按照L9（34）正交表安排試驗，5：

分別取1倍處方量的藥材，首先按醇提部分優(yōu)選的最佳方案進行提取后，藥渣按設定的方案進行提取，濾過，濾液合并，濃縮成稠膏，干燥，稱重。由于黃芩苷在水提浸膏中的含量也比較高，因此仍以黃芩苷含量作為水提部分的主要考核指標。測黃芩苷含量，試驗結果6：

以黃芩苷含量為考核指標，應選A2B2C2；以干膏量為考核指標，應選擇A3B3C3，但仔細分析，A2與A3、B2與B3、C2與C3對干膏量的影響不大，從縮短工時，節(jié)省能源考慮，同時為提高黃芩苷的含量，選擇A2、B2、C2較好。最終我們確定的工藝為A2B2C2，即加8倍水，煎煮2次，每次2小時。

2.2.2水提工藝驗證

取處方量的藥材，按照優(yōu)選的最佳工藝條件，進行三次重復試驗，計算干膏量及檢測黃芩苷含量，結果7：

從以上的驗證試驗結果來看，表明三次試驗的結果無明顯差異，說明該工藝穩(wěn)定、可行。

3討論

方中的當歸、防風、陳皮含有揮發(fā)油，揮發(fā)油中主要含有烯萜類及其它鏈狀脂肪族化合物等酯溶性成分，這些成分多數(shù)有活血止痛、潤腸通便、抗炎抑菌的功能[3]。試驗采用較高濃度的乙醇提取方中的甙類、黃酮等成分，同時也能最大限度地提取揮發(fā)油中的酯溶性成分。藥效學試驗表明，制劑具有很好的抗炎、鎮(zhèn)痛、止血、抑菌等作用，表明該方法對有效成分的提取比較充分，效果較好。

參考文獻

[1]王麗華，段玉峰，丁紅軍，等.槐角丸的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2007，7（5）：793-794

[2]中國藥典[S].二部.2005：642-643；211-212.

[3]王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床[M].天津.天津科技翻譯出版公司，2004：582-583.