基因芯片技術在陰道分泌物常規檢測中的應用研究

史從寧，王雅杰，趙運轉，康熙雄，胡敏華，張麗梅

婦科陰道分泌物常規檢測 (陰道分泌物常規)是判斷女性泌尿生殖道健康水平的一項重要醫學檢查項目。陰道分泌物常規中的項目主要有白細胞 (清潔度)、線索細胞、念珠菌和滴蟲。顯微鏡鏡檢是開展陰道分泌物常規最常用的方法，但有經驗要求高、主觀性強等缺點，在敏感度和特異度方面也存在問題。一些試劑盒只能檢測陰道分泌物常規中的個別項目，不能達到顯微鏡鏡檢的效果。美國BD公司生產的BD Affirm VPⅢ芯片以基因雜交為原理，可以對念珠菌、滴蟲、加德納菌進行檢測，其產品在歐美上市多年，現在中國進行臨床驗證，本實驗室作為驗證中心之一參與了本次驗證。共檢測了400例陰道分泌物常規，報道如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選取2012年1—4月首都醫科大學附屬北京天壇醫院婦產科門診患者 400例，年齡 20～68歲，平均(38．2±11．3)歲，主訴以陰道分泌物增多、有異味、外陰瘙癢為主，均用無菌拭子取陰道后穹窿分泌物，經期、性生活后以及行陰道灌洗后的標本除外。

1．2 主要試劑和方法 BD Affirm VPⅢ試劑盒由美國BD公司提供;細菌性陰道病(BV)甲酚藍試劑由合肥華今生物科技公司提供;BV藍試劑由北京明悟德生物技術有限公司提供;念珠菌顯色培養基由法國科瑪嘉公司提供;滴蟲培養基由上海彤云公司提供，均嚴格按照說明書操作。每份標本同時用BD Affirm VPⅢ芯片檢測、顯微鏡鏡檢、BV甲酚藍試劑檢測和BV藍試劑檢測，并接種至念珠菌顯色培養基和滴蟲培養基培養。

1．3 結果判定 BV以BV藍試劑檢測結果為金標準，而念珠菌和滴蟲分別以念珠菌顯色培養基和滴蟲培養基培養結果為金標準。BD Affirm VPⅢ芯片檢測結果的判斷按說明書進行。BV甲酚藍試劑檢測結果以顯藍色為 (+)，以顯黃色為 (-);BV藍試劑檢測結果以顯藍色為 (+)，以顯黃色為 (-)。念珠菌以顯微鏡高倍鏡下看到念珠菌孢子和菌絲為 (+)，未看到念珠菌孢子和菌絲為 (-);滴蟲以看到滴蟲為 (+)，未見滴蟲為 (-);念珠菌顯色培養基以白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌或克柔念珠菌生長為(+)，以無白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌或克柔念珠菌生長為 (-);滴蟲培養基以滴蟲生長為 (+)，以無滴蟲生長為 (-)。

1．4 統計學方法 采用SPSS 16．0統計軟件進行統計學處理，行Kappa檢驗，Kappa值≥0．75，說明已經取得較好的一致性;Kappa值＜0．40，說明一致性程度不夠理想;Kappa值在 0．40～0．74說明一致性在可接受范圍內。

2 結果

2．1 BV檢測結果 以BV藍試劑檢測結果為金標準，BV甲酚藍試劑檢測和BD Affirm VPⅢ芯片檢測BV的Kappa值分別為0．813 和0．553(見表1、2)。

表1 BV甲酚藍試劑檢測與BV藍試劑檢測BV結果 (例)Table1 The results of BV cresolblue reagentand BV blue reagent for testing bacterial vaginopathy

2．2 念珠菌檢測結果 以念珠菌培養結果為金標準，顯微鏡鏡檢和BD Affirm VPⅢ芯片檢測念珠菌的Kappa值分別為0．605 和0．941(見表3、4)。

表2 BD Affirm VPⅢ芯片檢測與BV藍試劑檢測BV結果 (例)Table2 The results of BD Affirm VPⅢchipsand BV blue reagent for testing bacterial vaginopathy

表3 顯微鏡鏡檢與念珠菌培養念珠菌結果 (例)Table 3 The results of microscope and candida chromogenic plates for testing candida

表4 BD Affirm VPⅢ芯片檢測與念珠菌培養念珠菌結果 (例)Table4 The results of BD Affirm VPⅢchipsand candida chromogenic plates for testing candida

2．3 滴蟲檢測結果 以滴蟲培養結果為金標準，顯微鏡鏡檢和BD Affirm VPⅢ芯片檢測滴蟲的 Kappa值分別為0．973和0．923(見表5、6)。

3 討論

婦科陰道炎是一種常見病、多發病，嚴重影響婦女的正常工作、學習和生活，影響其身體健康［1-2］。準確診斷、正確治療陰道炎將極大提高女性的生活質量。目前，臨床仍大多采用顯微鏡鏡檢的方法，此法對從業人員要求高，易漏檢。也有一些替代顯微鏡鏡檢的產品如陰道炎五聯檢測試劑盒應用于臨床，但敏感度和特異度均不高，臨床應用存在一定問題［3-5］。基因芯片技術應用于陰道分泌物常規檢測還未在國內廣泛開展，本實驗證實其在念珠菌檢測和滴蟲檢測方面具有明顯優勢，但其不能檢測白細胞的數量，無法提供陰道清潔度的結果，而且其BV檢測結果與廣泛認同的BV藍試劑檢測結果一致性不高，這都可能給其臨床應用帶來限制。

表5 顯微鏡鏡檢與滴蟲培養滴蟲結果 (例)Table5 The results ofmicroscope and trichomonad culture mediums for testing trichomonad

表6 BD Affirm VPⅢ芯片檢測與滴蟲培養滴蟲結果 (例)Table6 The resultsof BD Affirm VPⅢchipsand trichomonad culture mediums for testing trichomonad

BV是一類厭氧菌引起的陰道病，其主要致病菌包括陰道加德納菌、類桿菌、普氏桿菌、動彎桿菌等［6-7］。唾液酸酶為以上厭氧菌的特異性分泌物，研究表明，在陰道環境中，此酶活性與BV密切相關，與Amsel法有較高的符合率［8-10］。BV藍是一種酶活性檢測試劑，用于檢測陰道標本厭氧菌所分泌的唾液酸酶活性水平，本實驗中以此法為金標準。BV甲酚藍原理也是測定唾液酸酶活性水平，BD Affirm VPⅢ芯片檢測結果與BV藍檢測結果的一致性較低，這可能是由于基因芯片技術檢測的為特定的基因序列，而BV藍檢測的為菌活性分泌物，二者檢測原理不同。

念珠菌培養是公認的檢測念珠菌的金標準，但培養耗時較長，目前臨床上多依靠濕片顯微鏡鏡檢，顯微鏡鏡檢的漏檢率較高，尤其是熱帶念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌等不生長長菌絲的念珠菌。本實驗中BD Affirm VPⅢ芯片檢測結果與念珠菌培養結果的一致性較高，說明BD Affirm VPⅢ芯片檢測有較高的念珠菌檢出率。

滴蟲培養是公認的檢測滴蟲的金標準，但目前臨床上檢測滴蟲基本上還是靠顯微鏡鏡檢。顯微鏡鏡檢對鏡檢人員經驗性要求高，因氣溫低影響滴蟲的活動性而可能漏檢滴蟲。在本實驗中BD Affirm VPⅢ芯片檢測結果與滴蟲培養結果有良好的一致性，說明BD Affirm VPⅢ芯片可替代顯微鏡鏡檢用于滴蟲的臨床檢測。

綜上所述，美國BD公司生產的BD Affirm VPⅢ芯片在念珠菌和滴蟲的檢測方面與金標準有較好的一致性。在BV方面，BD Affirm VPⅢ芯片檢測與金標準的一致性較低，這可能是由于二者原理不同造成的。BD Affirm VPⅢ芯片檢測的是陰道加德納菌、類桿菌、普氏桿菌、動彎桿菌等厭氧菌的特異基因片段，而BV藍試劑檢測的是陰道加德納菌、類桿菌、普氏桿菌、動彎桿菌等厭氧菌分泌的唾液酸酶活性。目前臨床上對BV藍試劑的認可度較高，美國BD公司生產的BD Affirm VPⅢ芯片與BV藍或BV甲酚藍試劑結合用于臨床進行陰道分泌物檢查，可以取代顯微鏡鏡檢。

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