食管鱗狀細胞癌中VEGF 、P53及Ki-67的表達及臨床意義

劉漢忠 楊繼洲 肖 蘭 何慧華 王 嵐

本研究采用免疫組化SP法對43例食管鱗狀細胞癌和20例食管癌旁組織中VEGF、P53和Ki-67的表達進行檢測，現探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月-2012年12月活檢食管鱗狀細胞癌資料完整標本43例，其中男性34例，女性9例；患者年齡30～78歲，平均62.5歲。腫瘤分為Ⅰ級(高分化)5例，Ⅱ級(中分化)18例，Ⅲ級(低分化)20例。對照組為食管癌旁組織20例，其中男性15例，女性5例。所有標本均用10%中性福爾馬林固定，常規脫水、石蠟包埋，切片厚度為4 μm，行HE染色，光鏡診斷。

1.2 免疫組織化學染色方法

采用SP法。VEGF、P53和Ki-67工作稀釋度為1∶100，均采用0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)高壓鍋熱修復方法進行抗原修復，過氧化氫(H2O2)封閉后滴加一抗，4 ℃過夜，滴加二抗37 ℃孵育30 min，最后DAB顯色、蘇木精復染、封片。用已知陽性標本作為陽性對照，PBS代替一抗為空白對照。SP試劑盒及VEGF、P53和Ki-67單克隆抗體均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 結果判定

VEGF以胞質呈棕黃色為陽性。P53蛋白及Ki-67蛋白均定位于細胞核。陽性染色指顯微鏡下觀察細胞內具有清晰可見定位準確的黃色、棕黃色或棕褐色顆粒，而且背景清晰。由3位病理醫生對免疫組化染色進行評價，在400倍視野下任意選擇5個視野，每個視野計數200個細胞，共計數1 000個細胞，計算每張切片陽性細胞百分率。按陽性細胞占腫瘤細胞的比例，分為陰性(-)、弱陽性(+)，中度陽性(++)、弱陽性(+++)。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0統計軟件，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF、P53及Ki-67在食管組織中的表達

VEGF、P53及Ki-67在食管癌中的陽性表達率分別為：90.7%(39/43)、88.4%(38/43)、100.0%(43/43)，VEGF、P53及Ki-67在癌旁組織中的表達陽性率分別為：20.0%(4/20)、15.0%(3/20)、5.0%(1/20)，兩者比較差異均有顯著性(χ2=31.49、32.34、58.49，P均<0.01)。

2.2 VEGF、P53及Ki-67表達強弱與癌組織分化程度的關系

VEGF在食管癌中的陽性表達中(+)3例、(++)17例、(+++)19例，經統計學分析發現VEGF表達強弱與癌組織分化程度(γ=0.945，P<0.05)呈正相關。P53在食管癌中的陽性表達中(+)4例、(++)13例、(+++)21例，經統計學分析發現P53表達強弱與癌組織分化程度(γ=0.963，P<0.05)呈正相關。Ki-67在食管癌中的陽性表達率為100.0%，其中(+)5例、(++)16例、(+++)22例，經統計學分析發現Ki-67 表達強弱與癌組織分化程度(γ=0.986，P<0.01)呈正相關。

3 討論

血管內皮細胞生長因子(VEGF)是目前已知的活性最強、專屬性最高的血管生成因子，在腫瘤血管形成中處于核心地位，其表達與多種腫瘤的臨床病理特征和預后密切相關。本研究觀察組VEGF陽性表達率顯著高于對照組，且癌組織的分化程度越低，其表達強度越高，提示VEGF在食管鱗狀細胞癌的血管生成中起重要作用。

腫瘤抑制基因P53 與人類惡性腫瘤相關性很高。已經發現[1]，相當高比例的食管癌P53突變和(或)過表達，從而認為在食管癌的發生過程中，P53異常是一種常見的遺傳事件，同時也是因為P53異常出現在早期和癌前病變。本研究發現在癌旁組織中有3例有表達，細胞存在異型性，表達組織與癌組織接近，因此P53檢測可以發現早期癌和癌前病變。

Ki-67是細胞核內與細胞分裂及增殖相關的核蛋白，其表達與細胞增殖狀態高度相關，是反映細胞增殖活性的敏感指標，細胞增殖是腫瘤生長的前提,腫瘤細胞增生是否活躍直接影響著臨床治療與預后[2]。本研究食管癌中Ki-67陽性表達率為100.0%，明顯高于癌旁組織，而且癌組織分化程度越低，其表達強度越高，提示Ki-67蛋白標記可作為判斷食管鱗狀細胞癌的分化程度依據，并為評估其預后提供參考。

有學者研究發現P53蛋白和Ki-67在結直腸癌中的表達明顯升高,可作為判斷結直腸癌惡性程度及預后的重要參考指標[3]，腦膠質瘤中Ki-67及P53的陽性表達率與其惡性度相關,均可作為判斷膠質瘤惡性程度的指標[4]。本研究發現P53和Ki-67的陽性表達與食管鱗狀細胞癌的分化程度相關，可作為判斷食管癌惡性程度的指標，并為評估其預后提供參考。關于不同病理分化程度的食管鱗狀細胞癌組織中VEGF、P53和Ki-67陽性表達率有無相關性，由于本研究組組病例過少，未進行統計學分析，有待積累病例進一步探討。總之，VEGF、P53、Ki-67在食管鱗狀細胞癌的發生、發展及轉移中扮演著重要角色。

[1] Rosai J著，回允中主譯.ROSAI&ACKERMAN外科病理學〔M〕.第9版.北京：北京大學醫學出版社，2006：627.

[2] 常 英，劉貴生，張 軍,等.組織芯片研究胃食管黏膜病變中Ki-67和C-erbB-2的表達及意義〔J〕.世界華人消化雜志，2008，15(11)：1184-1189.

[3] 葉 斌,王西川,雷 蕾，等.p53和Ki67在結直腸癌中的表達及其臨床意義〔J〕.實用癌癥雜志，2013，28(1)：42-44.

[4] 周開甲，張 鳴，劉伯偉，等.Ki-67、p53在腦膠質瘤中的表達及意義〔J〕.實用癌癥雜志，2012，27(6)：572-573.