ERCC1基因多態性與鉑類聯合方案治療晚期肺腺癌患者療效及預后的研究

原發性支氣管肺癌(簡稱肺癌)是最常見的惡性腫瘤之一，發病率和死亡率在惡性腫瘤中居首位。肺癌中最常見類型為非小細胞肺癌(NSCLC)，很多患者確診時已為晚期，晚期非小細胞肺癌的治療主要采用以化療為主的綜合治療。目前以鉑類為基礎的化療方案作為綜合治療的重要組成部分是治療晚期NSCLC的主要方法。鉑類藥物主要是通過引起DNA損傷而發揮其抗腫瘤療效，其引起的DNA損傷主要由核酸切除修復(Nucleotide excision repair，NER)通路修復，該途徑的DNA修復能力與鉑類藥物的療效及預后關系密切[1]。本研究探討了在晚期NSCLC中ERCC1基因多態性與含鉑類方案化療療效及預后的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取江西省人民醫院2012年4月至2013年11月收治的經組織病理學或細胞學診斷的Ⅲb-Ⅳ期肺腺癌患者50例，經CT掃描證實肺部具有可測量的腫瘤病灶。50例中男性14例，女性36例，平均年齡56歲(45～78歲)。臨床分期：Ⅲb期26例，Ⅳ期24例。化療前患者體力評分采用ECOG(美國東部協作腫瘤組)評分為0～1分。血常規、肝腎功能及心電圖均正常。

1.2 ERCC1基因檢測實驗方法

基因組DNA的提取：化療治療開始前，經患者同意進行遺傳標志物與療效相關研究，并自愿捐獻3 ml靜脈血用于提取基因組DNA。采用DNA試劑盒(購自樂悠生物科技有限公司)提取外周血基因組DNA。引物系列：C8092A：上游引物5'-ACAGTGCCCCAAGAGGAGAT-3'，下游引物5'-AGTCTCTGGGGAGGGATTCT-3'，擴增產物204 bp；ERCC1 118：上游引物5'-GCAGAGCTCACCTGAGGAAC-3'，下游引物5'-GAGGTGCAAGAAGAGGTGGA-3'，擴增產物199 bp。引物由樂悠生物科技有限公司合成。PCR反應條件；94 ℃預變性3 min；94 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s、72 ℃ 45 s，共30個循環；72 ℃再充分延伸7 min后置4 ℃冰箱保存。酶切處理體系及電泳：對C8092A采用限制性內切酶BstEⅡ(購自樂悠生物科技有限公司)進行酶切、100V 電泳50 min。C8092A基因為A/A型獲得酶切產物片段大小為116 bp和88 bp 2個片段；C/T型則獲得204 bp、116 bp和88 bp 3個片段；而C/C型則只有204 bp 1個片段。對ERCC1 118采用限制性內切酶BsrD Ⅰ(購自樂悠生物科技有限公司)進行酶切、100 V 電泳50 min，為C/C型則檢測獲得片段大小為208 bp；C/T型，則為128和208 bp；T/T型，則為128 bp。

1.3 化療方案

順鉑75 mg/m2，靜脈滴注第1天，長春瑞濱25 mg/m2，靜脈滴注第1、8天，21天為1個周期，共4個周期。化療結束后4周復查目標病灶CT，根據世界衛生組織實體瘤療效評價標準進行療效評價。

1.4 療效評估

按世界衛生組織實體瘤療效評價標準：近期療效分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩定(SD)、惡化(PD)。參考國內外同類研究，設定CR+PR為有效，SD+PD為無效。另觀察無進展生存期(progression for survival，PFS)。患者的隨訪資料來源于門診和病房的病歷資料。隨診工作主要由本課題組成員隨診組完成。對于在隨訪截至日期無進展的病例，在統計時作為刪失數據。

1.5 統計處理

應用SPSS17.0軟件進行分析。檢驗水準α=0.05，應用卡方檢驗或Fisher’s精確概率法分析計數資料；采用Kaplan-Meier法對生存資料進行統計描述，運用Log-Rank檢驗比較各因素水平間生存率，采用Cox比例風險回歸模型分析法進行多因素生存分析。

2 結果

2.1 ERCC1 C8092A、118位基因型頻率

50例晚期肺腺癌患者ERCC1 C8092A位點CC、CA和AA基因型頻率分別為： 42.0%(21/50)、24.0% (12/50)、34.0%(17/50)；ERCC1 118位點 CC、CT和TT基因型頻率分別為： 36.0%(18/50)、28.0%(14/50)、36.0%(18/50)。不同年齡、性別、吸煙狀況、臨床分期患者間ERCC1 C8092A、118多態性均無統計學差異(P>0.05)(表1)。

2.2 ERCC1 C8092A、118多態性與療效的相關性

50例肺腺癌患者經療效評價后，CR為0例，PR為 14例(28.0%)，SD 為24例(48.0%)，PD 為12例(24.0%)，總有效率(CR+PR)為28.0%。ERCC1 C8092A CC和CA+AA基因型患者療效比較，差異有統計學意義(P=0.00)。ERCC1 118位點CC和CT+TT基因型患者療效比較，差異有統計學意義(P=0.00) (表2)。ERCC1 2個位點同為CC型患者療效與其它基因型患者比較無統計學差異(P=0.76)(表3)。

表1 患者基本情況與ERCC1 C8092A、118多態性相關性分析(例，%)

表2 肺腺癌患者ERCC1 C8092A、118多態性與含鉑化療療效的關系(例，%)

表3 肺腺癌患者ERCC1 C8092A、118多態聯合與含鉑化療療效的關系(例，%)

2.3 ERCC1 C8092A、118多態性與PFS的相關性

ERCC1 C8092A CC和CA+AA基因型患者的中位PFS為4個月，經Log-rank檢驗，兩者PFS無統計學差異 (P=0.58) (圖1A)；ERCC1 C8092A CC和CT+TT基因型患者的中位PFS分別為5個月和4個月，經Log-rank分析無統計學差異(P=0.16)(圖1B)： Cox多因素回歸分析顯示ERCC1 C8092A、118多態性均不是影響肺腺癌患者PFS的獨立因素。

3 討論

鉑類藥物作為肺癌化療的最重要的藥物，其抗腫瘤作用的主要機制在于引起DNA損傷包括DNA加合物的形成、交聯和氧化損傷。這些損傷阻斷DNA的復制從而導致細胞死亡[2]。但是，這些損傷可以被人類核苷酸切除修復通路(nucision repair pathway，NER)修復。因此機體DNA修復能力的差異可能是不同患者采用鉑類藥物化療后療效和預后不同的分子生物學基礎。王云南等研究發現ERCC1是參與修復DNA加合物等損傷的重要核苷酸切除修復基因，其表達低下在肺癌發生中起著重要作用[3]。且NSCLC中，ERCC1在肺癌組織中的表達顯著高于癌旁組織[4]，許崇安等認為ERCC1在非小細胞肺癌中表達升高并且存在正相關關系，可能在非小細胞肺癌發生發展中起協同作用，ERCC1陽性表達者生存期長，可能在預后判定中有一定作用[5]。同時有學者認為ERCC1高表達是Ⅰ期NSCLC術后良好預后的獨立指標，含DDP化療延長了Ⅱ期ERCC1低表達患者的生存，術后可根據ERCC1的水平決定是否選擇含DDP方案化療，ERCC1表達對NSCLC術后生存期的影響在Ⅰ期和Ⅱ期DDP化療患者中可能不盡相同，ERCC1高表達在Ⅰ期NSCLC術后展現的是其保護的一面，而Ⅱ期以化療抵抗為主[6]。Park等證明ERCC1 118C變異為T，CT或TT等位基因使ERCC1 mRNA水平增高，DNA修復能力增強，患者對鉑類藥物的敏感性降低，野生型基因(CC)患者對含鉑化療更敏感[7]。而王敬慧等研究認為ERCC1 C8092A、118多態性可能與晚期非小細胞肺癌患者鉑類化療療效無明顯相關性[8]。

圖1 ERCC1 C8092A(A)和118(B)多態性的Kaplan-Meier生存曲線

本研究對我院50例晚期肺腺癌患者ERCC1基因C8092A、第118密碼子多態性與含鉑方案化療療效的相關性進行探討，結果發現，不同年齡、性別、吸煙狀況、臨床分期患者間ERCC1 C8092A、118多態性均無統計學差異(P>0.05)。50例肺腺癌患者經療效評價后，總有效率(CR+PR)為28.0%。ERCC1 C8092A中，CC基因型患者使用含鉑方案化療有效率高于CA+AA基因型患者，療效間差異有統計學意義(P=0.00)。ERCC1 118中，CC基因型患者使用含鉑方案化療有效率高于CT+TT基因型患者，療效間有統計學差異(P=0.00) (表2)。但ERCC1 2個位點同為CC型患者療效與其它基因型患者比較無統計學差異(P=0.76)(表3)。ERCC1 C8092A、118多態性與晚期肺腺癌患者PFS無明顯相關性。

目前國內外大量關于ERCC1多態性與鉑類藥物治療療效相關性研究得出的結論不盡相同。WEI等[9]認為118位基因多態性鉑類藥物化療敏感性有關，D.Isla1等[10]研究ERCC1多態與多西他賽加卡鉑聯合治療晚期非小細胞肺癌療效之間的關系得出118位基因CC純合型療效更好，能更好延長患者的生存期。Kalikaki等[11]通過聚合酶鏈式反應一限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)法對晚期NSCLC患者進行基因型分析，結果表明攜有1個或者2個C的等位基因(CC，CT) 對化療敏感性優于不含有C等位基因(OR：0.10；95%CI：0.013～0.828；P=0.033)。還有研究也證實了該觀點，即認為ERCC1 codon118 CC型患者對鉑類化療反應優于CT及TT型[12]。然而，也有少部分研究報道不同，Caicun Zhou等[13]通過對ERCC1 118基因多態研究就發現118TT或CT基因型能明顯地提高鉑類聯合藥物治療晚期非小細胞肺癌患者的生存期。關于C8092A與鉑類藥物治療療效報道較少，Ji-Youn Han等[14]研究結果顯示在不吸煙的肺腺癌患者中，攜帶C8092A的AA基因型比CC、CA基因型的患者在治療中獲得更好的療效。

各研究結果不一致可能受入組病例數、化療方案、基因型檢測方法等因素影響，也可能與不同種族基因型頻率分布顯著不同有關[15]。同時也可能與基因表達程度相關，這有待于今后進一步觀察研究。

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