時間分辨熒光免疫分析技術(shù)檢測梅毒抗體中的應(yīng)用

郭 輝

(大慶市第四醫(yī)院檢驗科，黑龍江大慶163712)

梅毒螺旋體是引起人類梅毒的病原體。梅毒是性傳播疾病，人是梅毒的唯一傳染源。近年來我國梅毒流行呈逐年上升的趨勢［1］，據(jù)資料顯示從1993～1999年呈年增長率平均達(dá)85%。一經(jīng)感染梅毒螺旋體，48h后機(jī)體即可產(chǎn)生特異性抗體，先為IgM隨后出現(xiàn)IgG、IgA，有些人還可以檢出IgE。IgM經(jīng)過一段時間治療后很快消失，它可作為活動性梅毒的一個指征和療效指標(biāo)。同時機(jī)體也可以產(chǎn)生非特異性抗心脂反應(yīng)素，這就是梅毒特異性和非特異性血清學(xué)檢驗的理論基礎(chǔ)。而梅毒血清學(xué)檢驗的方法選擇對梅毒感染不同表現(xiàn)時期以及區(qū)分先天梅毒和神經(jīng)性梅毒有重要的臨床意義。血清學(xué)標(biāo)記免疫技術(shù)是梅毒血液篩查、方法學(xué)評價和療效判斷應(yīng)用最有價值的免疫技術(shù)，檢測梅毒抗體的方法通常分兩類，一類是以血清類脂質(zhì)抗原測定梅毒非特異性抗體，例如RPR、TRUST等，另一類是以梅毒組份蛋白檢測梅毒特異性抗體，如 TPHA、TPPA、TP-ELISA［2］。我院在 2010 年引進(jìn)上海新波公司提供的時間分辨熒光免疫分析儀后，我們根據(jù)免疫項目的規(guī)劃和儀器的特征使用時間分辨熒光免疫技術(shù)(TRFIA)檢測了梅毒特異性抗體、丙型肝炎抗體和艾滋病抗體血清學(xué)檢測，本人根據(jù)幾年來的親身體會使用TRFIA法檢測梅毒特異性抗體，并且同時與TPPA、RPR方法對部分標(biāo)本比對檢測和相互比較，現(xiàn)將檢測結(jié)果報道如下。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本來源

門診皮膚性病科初診梅毒篩查及復(fù)診梅毒復(fù)檢患者；住院手術(shù)輸血前檢測患者血清26份，同時用TRFIA、TPPA和RPR方法檢測，并且按照實驗室規(guī)定SOP文件嚴(yán)格操作。

1.2 試劑來源

運用TRFIA、TPPA法檢測梅毒特異性抗體，RPR法檢測梅毒非特異性抗體。TRFIA法運用上海新波公司提供的儀器和儀器專用試劑；TPPA試劑來自日本富士株式會社；RPR試劑購自蘭州生物制品研究所，質(zhì)控品購自上海儀器廠家提供供。試劑和質(zhì)控品都在效期之內(nèi)。

1.3 測定基本原理

TRFIA基本原理是蛋白質(zhì)、激素、多肽、抗體等用鑭系金屬離子標(biāo)記抗原和抗體，并與時間分辨熒光儀測定技術(shù)結(jié)合而建立起來的一種新型非放射性微量分析技術(shù)，對液體標(biāo)本中微量物質(zhì)進(jìn)行定量測定最后產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度；具有靈敏度高、發(fā)光穩(wěn)定、熒光壽命長、自然熒光干擾少，標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬等特點目前已廣泛應(yīng)用臨床。TPPA法是在室溫下在U型板加稀釋血清25μL，分別在3、4孔加未致敏和致敏血球顆粒，封板靜止2h；RPR法是在反應(yīng)板加血清50μL再滴加心脂抗原振蕩10min。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用χ2檢驗，P＜0.05為差異而統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

TRFIA實驗26份血清標(biāo)本陽性11例，陽性檢出率12.7%；TPPA實驗26份血清標(biāo)本陽性11例，陽性檢出率12.5%；RPR實驗26份血清標(biāo)本滴度出現(xiàn)顆粒陽性者9例，陽性檢出率9.5%。

3 討論

梅毒病程漫長，早期侵犯生殖器和皮膚，晚期侵犯全身器官，并產(chǎn)生多種多樣的癥狀和體征，通過性行為在人群中相互傳播，危機(jī)下一代，也有極少數(shù)患者通過接吻、哺乳。接觸有傳染性損害病人的日常用品而被感染，危害性大因此必須予以高度重視。

TRFIA法檢測同TPPA、RPR法相比TRFIA檢測梅毒特異性抗體適用于批量梅毒生物學(xué)假陽性的排除和患者的初步診斷。對療效判斷和預(yù)后評價應(yīng)用可能受一定限制［3］。

TPPA法是在TPHA試劑基礎(chǔ)上建立起來的一種新試劑，具有操作簡單，敏感性強(qiáng)，特異性高的特點，所以大多實驗室將其用作確證試驗，業(yè)界認(rèn)為TP-ELISA檢測效果類同TPPA［4］。

RPR(快速血漿反應(yīng)環(huán)狀卡片試驗)是20世紀(jì)80年代問世的非特異性抗體，主要用于二期梅毒診斷。對一期梅毒陽性率在75% ～85%，RPR可用于梅毒普查，抗體過量易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，并且此方法必須手工操作，肉眼觀察結(jié)果，出現(xiàn)陽性必須用TPPA或TRFIA法進(jìn)一步確證，而且存在一定生物學(xué)陽性［5］，是梅毒治療預(yù)后療效觀察、復(fù)發(fā)或再感染的檢測方法，患者經(jīng)過治療后反應(yīng)素消失或陰轉(zhuǎn)，因而用于梅毒的診斷和療效判斷，可是有時也需用特異性抗體測定試驗排除因其它疾病，如結(jié)核、類風(fēng)濕、紅斑狼瘡、麻風(fēng)等血清中也含有抗磷脂抗體的因素所致的生物學(xué)假陽性。

以上試驗充分的比較了梅毒血清學(xué)三種檢測方法的可靠性，同時對26份血清標(biāo)本用TRFIA法和TPPA法檢測特異性抗體，以及用RPR方法檢測非特異性抗體。TRFIA檢測與TPPA檢出陽性符合率幾乎100%。符合程度比較高。同時應(yīng)用TRFIA法檢測避免了用TPPA檢測時由于用手工和肉眼觀察時的室內(nèi)光線而出現(xiàn)遺漏，得出結(jié)論兩種檢測方法可以互補(bǔ)存在，同時發(fā)展。RPR檢出陽性9例，檢出陽性率9.5%，比較與特異性抗體陽性檢出率，差異明顯，時間分辨熒光免疫分析儀的應(yīng)用結(jié)果表明，在檢測梅毒特異性抗體時，操作流程比TPPA檢測更安全、加樣更準(zhǔn)確、判讀靈敏度高，而且時間分辨熒光免疫分析儀整體智能化程度較高，減輕工作人員的負(fù)荷，在今后的實驗室發(fā)展趨勢中會更加適應(yīng)。

［1］郭兌山，寧平，方德強(qiáng)，等.梅毒螺旋體抗體IgG ELISA和RPR試驗的比較［J］.中國輸血雜志，2001，14(2)：88

［2］陳華根.梅毒的實驗室診斷及臨床應(yīng)用［J］.實用醫(yī)技雜志，2010，17(3)：245 246

［3］李金明.臨床酶免疫測定技術(shù)［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2005，163

［4］葉順章，邵長庚，主編.性病診療與預(yù)防［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002，11 12

［5］董瑜，董六慶，王宏.ELISA雙抗原夾心法檢測梅毒抗體的血清學(xué)分析［J］. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2004，27(3)：37