陜北白絨山羊KAP9.2基因腺病毒載體的構建及包裝＊

徐華榮，郭 楊，趙志東，李 托，張智英，王 昕

（西北農林科技大學動物科技學院陜西省農業分子生物學重點實驗室，陜西楊凌712100）

羊絨是由絨山羊次級毛囊產生的底層毛，其生長是一個周期性變化的過程，包括生長期、退行期和休止期［1］。羊絨品質與角蛋白的組成相關，并受角蛋白基因表達的影響。角蛋白基因的表達差異導致不同品種絨山羊的羊絨品質存在明顯差異［2］。在絨山羊中存在大量激活和抑制參與皮膚毛囊周期性生長的調控因子［3］，其中KAP基因家族角蛋白相關蛋白9.2（KAP9.2）基因在絨山羊皮膚組織中特異性表達，在奶山羊皮膚組織中不表達［4－5］。為進一步研究羊絨周期性生長過程中KAP9.2基因的功能，需構建KAP9.2過表達載體。但是在真核細胞中通常直接轉染質粒的效率很低，達不到研究基因功能的目的。本研究以陜北白絨山羊為研究對象，旨在構建KAP9.2基因的重組腺病毒載體，并包裝擴增KAP9.2重組腺病毒，為在細胞水平上研究KAP9.2基因功能提供材料和奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 質粒與菌體 HEK293人胚腎細胞、NIH3T3細胞、大腸桿菌DH5α、大腸桿菌BJ5183、試驗用質粒pAdTrack－CMV和pAdEasy－1均由西北農林科技大學動物基因組學實驗室保存。

1.1.2 試劑 限制性內切酶和T4DNA ligase購自DNA ligaseDNA ligaseNEB公司；Taq DNA聚合酶和核酸共沉劑購自TaKaRa公司；質粒DNA提取試劑盒購自OMEGA BIO－TEK公司；DNA凝膠回收試劑盒購自威格拉斯生物技術有限公司；DMEM培養基購自Sigma公司；血清FBS購自Gibco公司；化學試劑為分析純，購自Sigma公司。

1.2 方 法

1.2.1 pAdTrack－KAP9.2腺病毒穿梭載體的構建及鑒定 外科手術法采集陜北白絨山羊肩胛后緣1×2cm2皮膚組織，干冰保存帶回實驗室，－80℃冰箱保存。……